초록 ▼

□ HTS 검색시스템 구축
￭ 추진실적 : SARS-CoV2 타겟 단백질 발현/정제
￭ 주요 내용
• PLpro 단백질 순수정제 완료
• 정제된 단백질을 확보함(Acro-Bioscience 사)
• SF 세포주(곤충세포)를 이용한 발현 최적화 진행중
* 베큘로바이러스, 포유세포 등을 이용한 타겟 단백질 발현/정제 시스템의 불량 및 제작사/공급처의 지연으로 발현 최적화가 지체됨.

￭ 추진실적 : 검색계 구축 3건 진행
￭ 주요 내용
• Peptide cleav

□ HTS 검색시스템 구축
￭ 추진실적 : SARS-CoV2 타겟 단백질 발현/정제
￭ 주요 내용
• PLpro 단백질 순수정제 완료
• 정제된 단백질을 확보함(Acro-Bioscience 사)
• SF 세포주(곤충세포)를 이용한 발현 최적화 진행중
* 베큘로바이러스, 포유세포 등을 이용한 타겟 단백질 발현/정제 시스템의 불량 및 제작사/공급처의 지연으로 발현 최적화가 지체됨.

￭ 추진실적 : 검색계 구축 3건 진행
￭ 주요 내용
• Peptide cleavage assay (PLpro) 구축
• Pseudovirus infection assay을 위한 pseudovirus 대량 생산법 완료
• ACE2 의 발현이 강화된 세포주인 HEK-293T-ACE2 및 mCherry set 확보하여 Pseudovirus infection assay
• Spike와 ACE2 간의 직접 결합 측정 가능한 Alpha assay 구축진행

□ 화합물 라이브러리 검색
￭ 추진실적 : Protease 타겟 및 항바이러스 타겟 라이브러리 검색완료: 총 1492종
￭ 주요 내용
• Protease 타겟 라이브러리 : SelleckChem 사 1492종 구축, *선별 1492종 검색완료

￭ 추진실적 : Alpha 시스템을 이용한 1차 라이브러리 검색
￭ 주요 내용
• 500여종의 화합물을 이용한 파일롯 scree을 수행함. 검색계의 signal이 안정화되지 않아서 최적화 필요

□ 유효 hit 검증
￭ 추진실적 : PLpro 검색계에서 모두 6종의 hit 확보됨
￭ 주요 내용
• PLpro 검색계에서 모두 6종의 hit이 확인되어 농도별 실험을 통해서 최종 2종이 선정됨
• 2종의 화합물을 HCoV-OC43을 이용하여 Plaque assay, qRT-PCR 및 TCID50을 수행하여 화합물의 유효함을 확인하였음.
• 2종의 화합물은 Ethacridine lactate, Sepantronium Bromide(YM155) 임

(출처 : 요약문 4p)

Abstract ▼

□ Purpose
Construction of highthroughput screening assays for COVID-19 antiviral agents in BSL2 facility

□ Contents
⦁ Development of drug screen system
-Selection of a specific cell-line expressing the receptor of SARS-CoV2, ACE2
-Optimization of pseudovirus infection on the cell

□ Purpose
Construction of highthroughput screening assays for COVID-19 antiviral agents in BSL2 facility

□ Contents
⦁ Development of drug screen system
-Selection of a specific cell-line expressing the receptor of SARS-CoV2, ACE2
-Optimization of pseudovirus infection on the cell-line expressing the ACE2 by modulating multiplicity of infection( MOI) and feasible conditions. ※ The sources of pseudovirus is to be discussed with the client.
-Purification of recombinant PLpro from bacteria.
-Development and HTS optimization of in vitro screen platform

⦁ HTS Drug Screen
-Preparation of drug/compound libraries including anti-HIV drug(lopinavir, ritonavir), anti-ebolavirus drug(remdesivir), antiviral drug library form the FDA approved collections from Sellekchem (~ 500 compounds).
-HTS using the pseudovirus infection system.
-HTS using in vitro assay targeting PLpro.

⦁ Validation of positive hits
-Purification of recombinant spike-RBD and ACE2 proteins from the baculovirus expression systems.
-Development of an Alphascreen assay using the viral spike protein and ACE2 receptor protein. This assay will allow to validate the inhibition on the interaction between ACE2 and the spike protein by the selected compounds.
-Measurement of antiviral effect of the selected hits both by using the human coronavirus(HCoV-OC43) and cell-line.

(source : Summary 5p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 2
• 목차 ... 3
• 요약문 ... 4
• Summary ... 5
• 학술연구개발용역과제 –세부 1 ... 6
• 제1장 최종 목표 ... 6
• 제2장 국내외 기술 현황 ... 10
• 제3장 최종 연구 내용 및 방법 ... 12
• 제4장 최종 연구 결과 ... 23
• 제5장 연구결과 고찰 및 결론 ... 24
• 제6장 연구성과 및 활용계획 ... 25
• 제7장 연구용역과제 진행과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 28
• 제8장 기타 중요변경사항 ... 29
• 제9장 연구비 사용 내역 및 연구원 분담표-세부1 ... 30
• 제10장 참고문헌 ... 32
• 제11장 첨부서류 (발표 논문) ... 33
• 학술연구개발용역과제 –세부 2 ... 34
• 제1장 최종 목표 ... 34
• 제2장 국내외 기술 현황 ... 37
• 제3장 최종 연구 내용 및 방법 ... 39
• 제4장 최종 연구 결과 ... 48
• 제5장 연구결과 고찰 및 결론 ... 49
• 제6장 연구성과 및 활용계획 ... 50
• 제7장 연구용역과제 진행과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 53
• 제8장 기타 중요변경사항 ... 54
• 제9장 연구비 사용 내역 및 연구원 분담표- 세부 2 ... 55
• 제10장 참고문헌 ... 57
• 제11장 첨부서류 ... 58
• 끝페이지 ... 59