초록 ▼

이 연구는 코로나19 예방 백신이 개발되고 있던 상황에서 코로나19 백신의 세포성 면역원성 측정법을 확립하기 위하여 수행되었다.

코로나19 백신의 세포성 면역원성을 측정하기 위하여 T cell에서 분비되는 다양한 사이토카인들과 바이러스가 감염된 세포를 제거하는 데 관여하는 세포 독성 물질들을 정량적으로 분석할 수 있는 방법을 개발·검증하고 표준작업지침서(SOP)를 마련하였다. 본 연구에서 확립된 시험법은 IFN-g와 IL-2 ELISpot 시험법과 Granzyme B, Perforin과 CD4, CD8을 측정할 수 있는

이 연구는 코로나19 예방 백신이 개발되고 있던 상황에서 코로나19 백신의 세포성 면역원성 측정법을 확립하기 위하여 수행되었다.

코로나19 백신의 세포성 면역원성을 측정하기 위하여 T cell에서 분비되는 다양한 사이토카인들과 바이러스가 감염된 세포를 제거하는 데 관여하는 세포 독성 물질들을 정량적으로 분석할 수 있는 방법을 개발·검증하고 표준작업지침서(SOP)를 마련하였다. 본 연구에서 확립된 시험법은 IFN-g와 IL-2 ELISpot 시험법과 Granzyme B, Perforin과 CD4, CD8을 측정할 수 있는 Intracellular cytokine staining (ICS)이다. IL-1b, IL-6, IL-8, TNF와 같은 사이토카인들은 ELISA로 정량을 하였다. 백신에 의해 유도된 체액성 면역력 측정은 ELISA로 결합항체가는 슈도바이러스 기반 중화시험법(pVNT)으로 중화항체가를 측정하였다. 이 시험법들을 사용하여 mRNA 및 viral vector platform 코로나19 백신 접종자들과 mRNA, subunit, viral vector platform의 코로나19 백신후보물질을 접종한 동물 검체에서 체액성 및 세포매개 면역력을 분석하였다.

mRNA 백신은 사람에서 T cell 활성 및 분화에 관여하는 IFN-g과 IL-2 및 염증관련 사이토카인인 TNF-a, IL-1b, IL-6, IL-8가 모두 접종 전에 비하여 증가하였으나 viral vector 백신은 대부분 접종 전후에 차이가 없었다. mRNA 백신을 접종받은 마우스에서는 IFN-g와 IL-2는 유의하게 증가하였으나 염증관련 사이토카인들은 발현되지 않았다. Subunit 백신을 접종받은 마우스에서는 adjuvant의 종류에 따라 IFN-g와 IL-2의 발현 양상이 다르게 나타났고 염증관련 사이토카인들은 발현되지 않았다. 또한 대부분의 경우 체액성 면역력과 세포성 면역력의 상관관계는 거의 없었다.

(출처 : 요약문 6p)

Abstract ▼

This study was conducted to establish methods for evaluating the cellular immunogenicity of a COVID-19 vaccine during several platform COVID-19 vaccines being developed.

We developed and validated ELISpot assay and intracellular cytokine staining (ICS) to quantitate various cytokines and cyto

This study was conducted to establish methods for evaluating the cellular immunogenicity of a COVID-19 vaccine during several platform COVID-19 vaccines being developed.

We developed and validated ELISpot assay and intracellular cytokine staining (ICS) to quantitate various cytokines and cytotoxic substances secreted from T cells, which involved in immune cell regulation and the removal of virus-infected cells. The standard operating procedure (SOPs) for ELISpot assay and ICS were prepared. ELISpot assay was developed to measure IFN-g and IL-2, and ICS was developed for granzyme B, perforin, CD4 and CD8. Other inflammatory cytokines such as IL-1b, IL-6, IL-8, and TNF-a were measured by ELISA. To evaluate the humoral immunity induced by the vaccines, ELISA and pseudovirus-based neutralization test (pVNT) were used to measure the binding antibody titer and the pVNT titer, respectively.

Using those methods, humoral and cell-mediated immunities were analyzed samples obtained from mRNA and viral vector platform COVID-19 vaccine recipients and also from mouse inoculated with mRNA, subunit, and viral vector platform COVID-19 vaccine candidates. In mRNA COVID-19 vaccinees, IFN-g and IL-2 which involved in T cell activation and proliferation were increased after vaccination and also proinflammatory cytokines such as TNF-a, IL-1b, IL-6, and IL-8 were increased after vaccination. However, there were no statistic differences of all of the above molecules in viral vector vaccinees between pre- and post-vaccination. In mRNA COVID-19 vaccine candidate inoculated mice, IFN-g and IL-2 were significantly increased but proinflammatory cytokines were not. In subunit COVID-19 vaccine candidate inoculated mice, IFN-g and IL-2 responses were different depending on adjuvant however there were no proinflammatory cytokines respnses regardless on adjuvants.

(source : Summary 8p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 2
• 목차 ... 4
• Ⅰ. 총괄연구개발과제 요약문 ... 6
• 국문 요약문 ... 6
• Summary ... 8
• Ⅱ. 총괄연구개발과제 연구결과 ... 10
• 제1장 총괄연구개발과제의 목적 및 필요성 ... 10
• 제2장 총괄연구개발과제의 내용 및 방법 ... 13
• 제3장 총괄연구개발과제의 최종결과 및 고찰 ... 21
• 제4장 총괄연구개발과제의 연구성과 ... 101
• 제5장 총괄주요연구 변경사항 ... 103
• 제6장 총괄참고문헌 ... 103
• 제7장 총괄첨부서류 ... 107
• 끝페이지 ... 130