초록 ▼

본 연구는 식품에 사용할 수 없는 원료인 마황과 사리풀에 대하여 식품에서 원료를 판별할 수 있도록 이화학분석법과 유전자분석법을 각각 개발하고 두 결과를 종합적으로 판단하여, 유통 중인 불법식품에 대한 시험 검사를 지원하고 식품 안전관리에 기여하고자 하였다.
마황과 사리풀의 판별을 위해 이화학분석에서는 지표대상성분 분석법을 확립하였고, 유전자분석에서는 마황과 사리풀 판별 종분석을 위하여 DNA barcode marker 선정 및 PCR 및 시퀀싱을 통하여 종분석을 수행하고, KASP를 이용한 마황의 신속검출을 위한 분석법을 확립

본 연구는 식품에 사용할 수 없는 원료인 마황과 사리풀에 대하여 식품에서 원료를 판별할 수 있도록 이화학분석법과 유전자분석법을 각각 개발하고 두 결과를 종합적으로 판단하여, 유통 중인 불법식품에 대한 시험 검사를 지원하고 식품 안전관리에 기여하고자 하였다.
마황과 사리풀의 판별을 위해 이화학분석에서는 지표대상성분 분석법을 확립하였고, 유전자분석에서는 마황과 사리풀 판별 종분석을 위하여 DNA barcode marker 선정 및 PCR 및 시퀀싱을 통하여 종분석을 수행하고, KASP를 이용한 마황의 신속검출을 위한 분석법을 확립하였다.
마황의 표준원물과 사리풀 표준원물에 관하여 전처리와 HPLC, LC-MS/MS를 통해 기기분석 조건을 검토하였고, 시험법 검증을 위해 method validation을 수행하여 이화학분석법을 확립하였다. 1차적으로 HPLC를 이용하여 정성하고, LC-MS/MS로 정량을 수행한 결과, 마황과 사리풀 원물에 관하여 지표 성분을 모두 검출(마황-6종, 사리풀-13종)하였으며, 유전자 분석방법으로는 원물에 관하여 10종(rpoB, psbC, ycf1, ycf3, atpA, rps12, rpl2, rps4-psbM intergenic spacer, rpoC2, psbI^~ psbk)의 분자마커를 개발하였고, 분자마커 간의 상이성 없이 모두 표준원물에 대해 동일하게 동정이 되었으며, 동정된 결과는 미국 국립생물정보센터(NCBI)에 등재하였다. 이렇게 확보된 염기서열을 기반으로 하여 각 마황과 사리물 종에 대한 KASP-SNP 분자마커를 선정하였고, 각 마커로 KASP를 진행한 결과, 대상 마황과 사리물 종에 관하여 FAM signal을 보였으며, 근연종이나 다른종 같은 경우 HEX signal 또는 non-signal을 보였다.
식품 중 마황 및 사리풀 제품에 대한 적용성 평가를 실시한 결과, 모든 마황 함유 제품에 대하여 이화학 분석법으로는 지표성분이 검출되었고, 유전자분석방법으로는 제품 같은 경우 DNA가 파괴되지 않는 제품에 한해서 마황 및 사리풀이 검출되었다. 이에 따라 이화학분석은 원물의 확신이 어렵다는 단점이 있고, 유전자분석방법은 DNA가 파괴되면 분석이 어렵다는 단점이 있어, 이 연구사업으로 듀얼시스템을 개발하여 각각의 분석 방법의 단점을 보완할 수 있어 마황 및 사리풀을 함유한 불법 식품에 관한 시험검사에 활용할 수 있을 것이라고 사료 된다.

(출처 : 요약문 4p)

Abstract ▼

In this study, we developed the combined physicochemical and genetic analysis method that can discriminate in the foods such as Ephedrae Herba (Ma-huang) and Hyoscyamus niger(henbane) which cannot be used in food.
In order to determine the Ma-huang and Hyoscyamus niger, the physicochemical analys

In this study, we developed the combined physicochemical and genetic analysis method that can discriminate in the foods such as Ephedrae Herba (Ma-huang) and Hyoscyamus niger(henbane) which cannot be used in food.
In order to determine the Ma-huang and Hyoscyamus niger, the physicochemical analysis was established for the analysis of indicator target components. In the genetic analysis, the analysis method was established through conventional PCR and KASP(RT-PCR).
We confirmed the indicator target components by HPLC with UV detection, and then employed UPLC-MS/MS for quantitative analysis. The method validation was performed for reliable analytical method. The parameters of the validation were as follows: specificity, limit of detection (LOD), limit of quantitation (LOQ), accuracy, precision, recovery and stability.
For identification of Ephedra and Hyoscyamus niger species, 117 samples of Ephedra and Hyoscyamus niger were collected, and a reference DNA barcode library was developed using 10 markers (rpoB, psbC, ycf1, ycf3, atpA, rps12, rpl2, rps4-psbM intergenic spacer, rpoC2 and psbI^~ psbK). To develop KASP-SNP markers, we selected 3 markers (ycf3, rpl2, psbK), which were able to distinguish three Ephedra species and Hyoscyamus niger. In the result, the specific markers for each of the three Ephedra and Hyoscyamus niger were clustered into FAM-positive section, whereas non-targeted plants were clustered either HEX-positive or negative section.
Therefore, we have developed the combined physicochemical and genetic analysis method. It is considered that it can be used for testing and inspection on illegal food containing Ma-huang and Hyoscyamus niger.

(source : Summary 5p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 최종보고서 ... 2
• 국문 요약문 ... 4
• Summary ... 5
• 목차 ... 6
• I. 연구개발과제 연구결과 ... 7
• 제1장 연구개발과제의 개요 ... 7
• 제2장 연구개발과제의 국내·외 연구개발 현황 ... 20
• 제3장 연구개발과제의 연구수행 내용 및 결과 ... 23
• 제4장 연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 60
• 제5장 연구개발과제의 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 127
• 제6장 연구개발과제의 연구개발 결과 활용계획 ... 128
• 제7장 참고문헌 ... 131
• 제8장 첨부서류 ... 133
• 끝페이지 ... 191