초록 ▼

◻ 연구개요
본 연구에서는 파지 디스플레이(Phage Display)기술을 활용하여 암의 발병에 관여하는 면역관문(immune checkpoint)을 조절하는 단백질인 CD200 및 CD200R의 상호작용을 억제하는 펩타이드를 스크리닝하고 이의 특성을 규명하고자 함. 이를 통해 펩타이드 의약품 후보물질을 개발하는 것이 연구의 최종 목표로 설정함

◻ 연구 목표대비 연구결과
(1) 1차년도
- CD200단백질을 얻기위해 HEK293 세포주에서 CD200단백질을 발현시키기위해 pcDNA3.4 벡터에 CD200

◻ 연구개요
본 연구에서는 파지 디스플레이(Phage Display)기술을 활용하여 암의 발병에 관여하는 면역관문(immune checkpoint)을 조절하는 단백질인 CD200 및 CD200R의 상호작용을 억제하는 펩타이드를 스크리닝하고 이의 특성을 규명하고자 함. 이를 통해 펩타이드 의약품 후보물질을 개발하는 것이 연구의 최종 목표로 설정함

◻ 연구 목표대비 연구결과
(1) 1차년도
- CD200단백질을 얻기위해 HEK293 세포주에서 CD200단백질을 발현시키기위해 pcDNA3.4 벡터에 CD200 유전자를 클로닝함.
- pcDNA3.4 벡터를 HEK293 세포주에 transfection 시켜 CD200단백질을 발현시킴. 단백질 분리정제를 위해서는 Ni-charge resin을 활용한 크로마토그래피를 수행하였음.
- SDS-PAGE 및 western 분석을 통해 CD200 단백질이 성공적으로 발현됨을 확인함.
(2) 2차년도
- Glycosylation된 것으로 추정되는 재조합 CD200단백질을 PNGase 효소처리를 통해 glycan을 제거후 질량분석을 하였을 때, 그 결과 예상치에 일치하는 23.8 kDa인 것으로 나타남.
- CD200R은 세포막에 위치한 single-pass type I 막단백질이며 총 4개의 domain으로 구성되어 있었음. signal peptide(a.a:1-28), extracellular domain (a.a:29-243), transmembrane domain (a.a: 244-264) 및 cytoplasmic domain (a.a: 265-325).
- 따라서 CD200R의 extracellular domain이 CD200의 extrancellular domain과 상호작용할 것임을 확인함.
(3) 3차년도
- CD200단백질에 결합하여 CD200R과의 상호작용을 억제하는 면역회피 억제 펩타이드를 스크리닝하기 위해 Ph.D 12-mer phage display peptide library를 활용하여 바이오패닝 과정을 수행하였음.
- 바이오패닝결과 스크리닝된 phage plaque를 이용해 DNA 염기서열을 분석하였을 때 가장 높은 빈도로 나타난 펩타이드는 ‘CFAGTPSILMLA’ 인 것으로 나타남

◻ 연구개발성과의 활용 계획 및 기대효과(연구개발결과의 중요성)
2022년 1월 기준으로 현재까지 면역관문 단백질인 CD200과 CD200R의 상호작용을 억제하는 단일클론항체(samalizuab) 1개가 개발되어 임상1상에서 의학적으로 유의미한 효과가 있는 것으로 학술지에 발표되었음. 그 이후 추가로 진척된 연구 및 임상결과에 대한 보고는 없음.
면역관문 억제제를 개발하는 대다수의 연구는 단일클론항체를 개발하는 방향으로 수행되고 있으며, 본 연구처럼 펩타이드 억제제를 개발하는 연구는 상대적으로 활발하지 않다는 점에서 연구과제의 독창성과 차별성이 있음.
지난 연구성과를 토대로 스크리닝된 12-mer 펩타이드중 추가 연구를 통해 CD200에 가장 강하게 결합하는 펩타이드 1종을 선별하고자 함. 향후 생화학적, 물리적 특성을 규명하는 연구를 추가 수행함으로써 신약 후보물질로서의 항암효과를 동물실험에 활용하고자 함.

(출처 : 연구결과 요약문 2p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 연구결과 요약문 ... 2
• 목차 ... 3
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 4
• 1.1 연구목표 ... 4
• 1.2 면역항암제 개발동향 ... 4
• 1.3 CD200 및 CD200R의 상호작용과 면역관문 기능 ... 5
• 1.4 연구범위 ... 5
• 2. 연구개발과제의 수행 과정 및 수행 내용 ... 6
• (가) 1차년도 연구내용 및 결과 ... 6
• (나) 2차년도 연구내용 및 결과 ... 7
• (다) 3차년도 연구내용 및 결과 ... 8
• 3. 연구개발과제의 수행 결과 및 목표 달성 수준 ... 9
• 1) 정성적 연구개발성과(연구개발결과) ... 9
• 2) 세부 정량적 연구개발성과 ... 9
• 3) 목표 달성 수준 ... 10
• 4) 목표 미달 시 원인 분석 ... 10
• 4. 연구개발성과의 관련 분야에 대한 기여 정도(연구개발결과의 중요성) ... 10
• 5. 연구개발성과의 관리 및 활용 계획 ... 11
• 6. 자체점검표 ... 11
• 7. 참고문헌 ... 11
• 끝페이지 ... 17