p53종양 억제 유전자의 돌연변이는 인간의 암에서 가장 흔하게 발견되는 유전자 변이이다. 약 60%정도의 암에서 p53 위치에 돌연변이가 발견되어지고, 종양세포내에서 비정상적인 p53 단백질 산물이 과발현된다. 이러한 p53 유전자의 많은 돌연변이 검색을 통해서 돌연변이 p53과 단백질 산물이 종양에 특이적인 진단과 치료 및 예후에 중요한 지표가 됨을 제시한다. 본 연구에서는 p53 유전자의 돌연변이를 검색하기 위해 PCR-SSCP ...
p53종양 억제 유전자의 돌연변이는 인간의 암에서 가장 흔하게 발견되는 유전자 변이이다. 약 60%정도의 암에서 p53 위치에 돌연변이가 발견되어지고, 종양세포내에서 비정상적인 p53 단백질 산물이 과발현된다. 이러한 p53 유전자의 많은 돌연변이 검색을 통해서 돌연변이 p53과 단백질 산물이 종양에 특이적인 진단과 치료 및 예후에 중요한 지표가 됨을 제시한다. 본 연구에서는 p53 유전자의 돌연변이를 검색하기 위해 PCR-SSCP 분석법을 실행하였다. PCR-SSCP 분석에 의한 p53 종양억제 유전자의 exon 5-8에서의 돌연변이 조사에 36명의 유방암 환자의 조직과 8개의 암세포주가 사용되었다. 36명 환자중 11명(30%)의 종양조직과 8개 세포주중 4개 (50%)에서 p53 유전자 돌연변이가 나타났다. p53 단백질의 발현과 구조적 변이를 알아보기위해 8개의 암세포주를 대상으로 p53 단일클론항체 PAb421, PAb240, PAb1620을 이용하여 면역침강법과 면역블롯을 실시하였다. 면역블롯을 통한 p53 발현이 6개(75%) 세포주에서 나타났고, 면역침강법에 의해서 PAb1620은 8개의 세포주에서 야생형 p53 단백질을 인지하였고, PAb240은 4개의 세포주에서 돌연변이형 p53 단백질을 인지하였다. Northern blot 결과 2개의 세포에서 많은 양의 p53 mRNA발현을 보였고, 이것은 면역블롯의 결과와 일치하였다. 반면, 높은 p53 mRNA를 보이나, 야생형 p53 단백질의 반감기가 짧아 세포내에 적은 양의 p53 단백질이 존재하는 세포주도 있었다. 본 실험에서는 PCR-SSCP분석법과 면역침강법은 매우 연관된 결과를 보였다. 인간의 암조직과 암세포주에 대한 p53 유전자의 돌연변이유형과 빈도를 조사한 본 연구의 결과는 p53 유전자가 암의 진행과 발달에 중요한 기능을 담당함을 시사한다.
p53 종양 억제 유전자의 돌연변이는 인간의 암에서 가장 흔하게 발견되는 유전자 변이이다. 약 60%정도의 암에서 p53 위치에 돌연변이가 발견되어지고, 종양세포내에서 비정상적인 p53 단백질 산물이 과발현된다. 이러한 p53 유전자의 많은 돌연변이 검색을 통해서 돌연변이 p53과 단백질 산물이 종양에 특이적인 진단과 치료 및 예후에 중요한 지표가 됨을 제시한다. 본 연구에서는 p53 유전자의 돌연변이를 검색하기 위해 PCR-SSCP 분석법을 실행하였다. PCR-SSCP 분석에 의한 p53 종양억제 유전자의 exon 5-8에서의 돌연변이 조사에 36명의 유방암 환자의 조직과 8개의 암세포주가 사용되었다. 36명 환자중 11명(30%)의 종양조직과 8개 세포주중 4개 (50%)에서 p53 유전자 돌연변이가 나타났다. p53 단백질의 발현과 구조적 변이를 알아보기위해 8개의 암세포주를 대상으로 p53 단일클론항체 PAb421, PAb240, PAb1620을 이용하여 면역침강법과 면역블롯을 실시하였다. 면역블롯을 통한 p53 발현이 6개(75%) 세포주에서 나타났고, 면역침강법에 의해서 PAb1620은 8개의 세포주에서 야생형 p53 단백질을 인지하였고, PAb240은 4개의 세포주에서 돌연변이형 p53 단백질을 인지하였다. Northern blot 결과 2개의 세포에서 많은 양의 p53 mRNA발현을 보였고, 이것은 면역블롯의 결과와 일치하였다. 반면, 높은 p53 mRNA를 보이나, 야생형 p53 단백질의 반감기가 짧아 세포내에 적은 양의 p53 단백질이 존재하는 세포주도 있었다. 본 실험에서는 PCR-SSCP분석법과 면역침강법은 매우 연관된 결과를 보였다. 인간의 암조직과 암세포주에 대한 p53 유전자의 돌연변이유형과 빈도를 조사한 본 연구의 결과는 p53 유전자가 암의 진행과 발달에 중요한 기능을 담당함을 시사한다.
Mutations in the p53 tumor suppressor gene are the most common genetic alterations observed in human cancers. About 60% of human cancers contain mutations at the p53 locus and abnomal p53 protein product is overexpressed in the tumor cells. Based on the detection of widespread mutations in the p53 g...
Mutations in the p53 tumor suppressor gene are the most common genetic alterations observed in human cancers. About 60% of human cancers contain mutations at the p53 locus and abnomal p53 protein product is overexpressed in the tumor cells. Based on the detection of widespread mutations in the p53 gene, mutant p53 gene and its protein product may be potential future targets for tumor-specific diagnostic or therapeutic interventions. In this study, polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism(PCR-SSCP) was performed to investigate structural alteration of p53 gene. 36 primary breast tumors and 8 cancer cell lines were examined for mutations in exons 5 to 8 of the p53 tumor suppressor gene by PCR-SSCP analysis. Mutations of the p53 gene were detected in 11(30%) out of the 36 patients and in 4(50%) out of the 8 cell lines. Immunoprecipitation and western blotting with anti p53 monoclonal antibodies (PAb421,PAb240,PAb1620) were performed to detect expression and comformational change of the p53 protein in 8 cancer cell lines. Western blotting showed expression of p53 protein in 6 cell lines(75%). Immunoprecipitation with PAb240 showed the detection of p53 protein of mutant type in 4 cell lines and with PAb1620 detected the p53 protein of wild type in 8 cell lines. In Northern blot experiment, 2 cell lines expressed. a large amount of p53 mRNA and it was correlated with a high level of p53 protein in western blot. But one expressed high level of p53 mRNA but only low level of p53 protein existed in the cell, because wild type p53 protein has short half-life. Analysis of PCR-SSCP and immunoprecipitation showed very closely related results. This result suggested that mutation of p53 gene play important role in the development and progression of cancer.
Mutations in the p53 tumor suppressor gene are the most common genetic alterations observed in human cancers. About 60% of human cancers contain mutations at the p53 locus and abnomal p53 protein product is overexpressed in the tumor cells. Based on the detection of widespread mutations in the p53 gene, mutant p53 gene and its protein product may be potential future targets for tumor-specific diagnostic or therapeutic interventions. In this study, polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism(PCR-SSCP) was performed to investigate structural alteration of p53 gene. 36 primary breast tumors and 8 cancer cell lines were examined for mutations in exons 5 to 8 of the p53 tumor suppressor gene by PCR-SSCP analysis. Mutations of the p53 gene were detected in 11(30%) out of the 36 patients and in 4(50%) out of the 8 cell lines. Immunoprecipitation and western blotting with anti p53 monoclonal antibodies (PAb421,PAb240,PAb1620) were performed to detect expression and comformational change of the p53 protein in 8 cancer cell lines. Western blotting showed expression of p53 protein in 6 cell lines(75%). Immunoprecipitation with PAb240 showed the detection of p53 protein of mutant type in 4 cell lines and with PAb1620 detected the p53 protein of wild type in 8 cell lines. In Northern blot experiment, 2 cell lines expressed. a large amount of p53 mRNA and it was correlated with a high level of p53 protein in western blot. But one expressed high level of p53 mRNA but only low level of p53 protein existed in the cell, because wild type p53 protein has short half-life. Analysis of PCR-SSCP and immunoprecipitation showed very closely related results. This result suggested that mutation of p53 gene play important role in the development and progression of cancer.
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