1. 성장 시기에 따른 돌산 갓의 부위별 즙액 첨가에 의한 생리기능성 연구에서 세포독성은 갓 즙액 6% 첨가 시에 성장기간이 20일인 갓의 개량종 뿌리에서 78.2%로 가장 높게 나타났다. DPPH 방법에 의한 항산화활성 평가에서는 20일 자란 재래종 잎이 80.4%로서 가장 높게 나타났다. ACE 저해활성으로는 60일 자란 갓에서는 개량종 잎이 94.0%로서 가장 높은 것으로 나타났다. 따라서 돌산 갓의 부위별 첨가에 의한 생리기능성 평가에서 재래종과 개량종 사이에 큰 차이를 발견할 수는 없었으나 부위별로는 항암성은 뿌리에서, 항산화성과 ACE 저해활성은 잎에서 비교적 높게 나타났다. 2. 개량종 돌산갓으로 갓김치를 제조하고, 4, 10, 20, 30℃의 온도에서 발효하였다. 발효시기별 생리기능성의 추이와 선택 배지를 사용한 미생물의 경시적 변화에서 초기에는 저온균인 Leuconostoc 속이 대부분 우세하였으며, 적숙기 이후에는 Lactobacillus 속과 비슷한 수를 나타내었다. 4℃에서 발효시킨 경우, 30일까지 ...
1. 성장 시기에 따른 돌산 갓의 부위별 즙액 첨가에 의한 생리기능성 연구에서 세포독성은 갓 즙액 6% 첨가 시에 성장기간이 20일인 갓의 개량종 뿌리에서 78.2%로 가장 높게 나타났다. DPPH 방법에 의한 항산화활성 평가에서는 20일 자란 재래종 잎이 80.4%로서 가장 높게 나타났다. ACE 저해활성으로는 60일 자란 갓에서는 개량종 잎이 94.0%로서 가장 높은 것으로 나타났다. 따라서 돌산 갓의 부위별 첨가에 의한 생리기능성 평가에서 재래종과 개량종 사이에 큰 차이를 발견할 수는 없었으나 부위별로는 항암성은 뿌리에서, 항산화성과 ACE 저해활성은 잎에서 비교적 높게 나타났다. 2. 개량종 돌산갓으로 갓김치를 제조하고, 4, 10, 20, 30℃의 온도에서 발효하였다. 발효시기별 생리기능성의 추이와 선택 배지를 사용한 미생물의 경시적 변화에서 초기에는 저온균인 Leuconostoc 속이 대부분 우세하였으며, 적숙기 이후에는 Lactobacillus 속과 비슷한 수를 나타내었다. 4℃에서 발효시킨 경우, 30일까지 PES 배지의 Leuconostoc 속의 균 수가 우세하였다. 10℃에서는 4℃에 비해 주 발효 균 수가 많았다. 20℃는 발효 12일째에 최대의 균 수를 나타내어 적숙기임을 보여주었다. 마찬가지로 Leuconostoc 속과 Lactobacillus 속의 균 수의 차이는 크지 않았으나 Streptococcus 속과 Pediococcus 속은 상대적으로 낮은 수를 나타내었다. 30℃에서는 2일~4일째에 최대의 균 수를 나타내었으며, 그 이후에 감소하였다. 간암세포에 대한 항암활성은 갓김치 즙액의 농도가 높아질수록 높은 효과가 나타났고, 특히, 20℃에서 50일간 발효시킨 갓김치 즙액의 첨가에서 가장 높은 활성을 나타내었다. 또한, 온도가 높을수록 같은 발효 시간 내에 미생물 수가 많았으며, 생리활성 또한 높았다. 따라서, 갓김치 발효 중 생성된 미생물이 생리활성에 영향을 미치는 것으로 나타났다. 3. 20℃에서 발효된 적숙기의 갓김치로부터 우점균을 분리하고 농축하여, starter로 접종한 후 4℃와 10℃에서 발효시켰다. Starter 접종 농도가 높을수록 발효 진행 속도가 빨랐고 총균수와 생리 활성이 높게 나타났다. 1×10^(10) cells/mL의 starter를 첨가하여 4℃에서 발효한 갓김치는 항산화활성이 70%, ACE 저해활성이 52%, 가식 기간이 40일 연장되었고, 1×10^(10) cells/mL의 starter를 첨가하여 10℃에서 발효한 갓김치는 항산화활성이 75%, ACE 저해활성이 70%, 적숙기에 이르는 시간이 5~6일 연장되었다. 따라서 갓김치 발효 중에 유산균이 생리활성에 큰 영향을 줌을 확인하였다. 4. 높은 생리활성 물질 생산성과 관련 있는 유산균을 20℃에서 발효한 갓김치에서 순수 분리하여 Biolog system을 통하여 동정한 결과 Leuconostoc속은 Leuconostoc mesenteroides sp. mesenteroides, Leuconostoc gelidium 등이 분리되었으며, Lactobacillus속에는 Lactobacillus plantarum, Lactobacillus alimentarius, Lactobacillus raffinolactis, Lactobacillus delbruekii sp. lactis 등으로 확인되었다. Lactococcus 속에는 Lactococcus plantarum등이 동정되었고, Pediococcus속에는 Pediococcus pentosaceus, Pediococcus parvulus로 동정되었다. ACE 효과가 가장 높았던 strain Dolsan의 16s rDNA sequencing으로 얻은 정확한 동정명은 Weissella kimchii로서 99% 유전적으로 일치하였다. 5. 미생물 자체가 생산하는 군, 돌산갓 함유 물질에 미생물이 작용하는 군, 돌산갓의 함황물질 분해산물에 의한 군 등으로 나누어 생리활성의 원인물질을 탐구한 결과, 생리활성중 ACE 저해활성이 3가지 균주 배양액 모두 90% 이상의 높은 활성을 나타내었으며, 열처리한 군과는 큰 유의차는 없었다. 그러나 MRS 배지 자체의 ACE 저해활성도 매우 높아서 MRS 배지 자체의 활성을 고려하면 모두 10% 미만의 효과를 나타내었다. 또한, 돌산갓 함유물질에 유산균이 작용하여 생성된 산물에 의한 생리활성 연구에서 strain Dolsan 접종 배양액의 ACE 저해활성이 98.9%로 가장 우수하였으나 항산화와 항암활성은 시료의 전처리 과정에서 분자량이 큰 생리활성 물질이 많이 제거되었기 때문에 50%미만의 활성을 나타내었다. Myrosinase와 protease를 돌산갓에 처리하여 반응 후에 생리활성의 증가를 살펴본 결과, 항산화 효과와 ACE 저해활성의 상승효과는 미비하였다. 항암활성은 갓 즙액에 protease 처리한 군에서 46.7%, sinigrin에 protease 처리한 군에서는 48.2%로 protease를 처리한 군에서 높았다. 따라서 생리활성 물질의 탐구를 위하여 가장 생리활성의 증가를 보인 strain Dolsan 접종에 의한 배양액을 추출하여 항고혈압 활성 물질에 대한 분석을 행하였다. 6. 항고혈압 활성 물질을 분리하기 위하여, 돌산갓 즙액에 strain Dolsan을 접종한 배양액의 ACE 저해활성이 98%로서 가장 우수하였으므로 좀 더 상세한 확인을 위하여 배양액을 추출하여 HPLC column을 통하여 peak 별로 분리하였다. ACE 저해활성을 측정한 결과 갓즙액 strain Dolsan 배양액의 n-butanol 추출 분획물 중 상등액에서 ACE 저해활성이 94.8%로 높았으므로 이를 HPLC로 분리하였다. 분리결과 6개의 peak가 얻어 졌으며 TSKgel NH2-60 column을 사용하여 시료를 용출시켰을 때 peak 분리가 잘 이루어졌다. 특히, peak No. 3에서 항고혈압 활성이 우수했다. 이로서 돌산갓 즙액의 항고혈압 활성은 한가지 물질에 의한 것이 아니라 돌산갓 함유 물질에 미생물이 작용하여 생산해낸 대사산물로서 추정되었다.
1. 성장 시기에 따른 돌산 갓의 부위별 즙액 첨가에 의한 생리기능성 연구에서 세포독성은 갓 즙액 6% 첨가 시에 성장기간이 20일인 갓의 개량종 뿌리에서 78.2%로 가장 높게 나타났다. DPPH 방법에 의한 항산화활성 평가에서는 20일 자란 재래종 잎이 80.4%로서 가장 높게 나타났다. ACE 저해활성으로는 60일 자란 갓에서는 개량종 잎이 94.0%로서 가장 높은 것으로 나타났다. 따라서 돌산 갓의 부위별 첨가에 의한 생리기능성 평가에서 재래종과 개량종 사이에 큰 차이를 발견할 수는 없었으나 부위별로는 항암성은 뿌리에서, 항산화성과 ACE 저해활성은 잎에서 비교적 높게 나타났다. 2. 개량종 돌산갓으로 갓김치를 제조하고, 4, 10, 20, 30℃의 온도에서 발효하였다. 발효시기별 생리기능성의 추이와 선택 배지를 사용한 미생물의 경시적 변화에서 초기에는 저온균인 Leuconostoc 속이 대부분 우세하였으며, 적숙기 이후에는 Lactobacillus 속과 비슷한 수를 나타내었다. 4℃에서 발효시킨 경우, 30일까지 PES 배지의 Leuconostoc 속의 균 수가 우세하였다. 10℃에서는 4℃에 비해 주 발효 균 수가 많았다. 20℃는 발효 12일째에 최대의 균 수를 나타내어 적숙기임을 보여주었다. 마찬가지로 Leuconostoc 속과 Lactobacillus 속의 균 수의 차이는 크지 않았으나 Streptococcus 속과 Pediococcus 속은 상대적으로 낮은 수를 나타내었다. 30℃에서는 2일~4일째에 최대의 균 수를 나타내었으며, 그 이후에 감소하였다. 간암세포에 대한 항암활성은 갓김치 즙액의 농도가 높아질수록 높은 효과가 나타났고, 특히, 20℃에서 50일간 발효시킨 갓김치 즙액의 첨가에서 가장 높은 활성을 나타내었다. 또한, 온도가 높을수록 같은 발효 시간 내에 미생물 수가 많았으며, 생리활성 또한 높았다. 따라서, 갓김치 발효 중 생성된 미생물이 생리활성에 영향을 미치는 것으로 나타났다. 3. 20℃에서 발효된 적숙기의 갓김치로부터 우점균을 분리하고 농축하여, starter로 접종한 후 4℃와 10℃에서 발효시켰다. Starter 접종 농도가 높을수록 발효 진행 속도가 빨랐고 총균수와 생리 활성이 높게 나타났다. 1×10^(10) cells/mL의 starter를 첨가하여 4℃에서 발효한 갓김치는 항산화활성이 70%, ACE 저해활성이 52%, 가식 기간이 40일 연장되었고, 1×10^(10) cells/mL의 starter를 첨가하여 10℃에서 발효한 갓김치는 항산화활성이 75%, ACE 저해활성이 70%, 적숙기에 이르는 시간이 5~6일 연장되었다. 따라서 갓김치 발효 중에 유산균이 생리활성에 큰 영향을 줌을 확인하였다. 4. 높은 생리활성 물질 생산성과 관련 있는 유산균을 20℃에서 발효한 갓김치에서 순수 분리하여 Biolog system을 통하여 동정한 결과 Leuconostoc속은 Leuconostoc mesenteroides sp. mesenteroides, Leuconostoc gelidium 등이 분리되었으며, Lactobacillus속에는 Lactobacillus plantarum, Lactobacillus alimentarius, Lactobacillus raffinolactis, Lactobacillus delbruekii sp. lactis 등으로 확인되었다. Lactococcus 속에는 Lactococcus plantarum등이 동정되었고, Pediococcus속에는 Pediococcus pentosaceus, Pediococcus parvulus로 동정되었다. ACE 효과가 가장 높았던 strain Dolsan의 16s rDNA sequencing으로 얻은 정확한 동정명은 Weissella kimchii로서 99% 유전적으로 일치하였다. 5. 미생물 자체가 생산하는 군, 돌산갓 함유 물질에 미생물이 작용하는 군, 돌산갓의 함황물질 분해산물에 의한 군 등으로 나누어 생리활성의 원인물질을 탐구한 결과, 생리활성중 ACE 저해활성이 3가지 균주 배양액 모두 90% 이상의 높은 활성을 나타내었으며, 열처리한 군과는 큰 유의차는 없었다. 그러나 MRS 배지 자체의 ACE 저해활성도 매우 높아서 MRS 배지 자체의 활성을 고려하면 모두 10% 미만의 효과를 나타내었다. 또한, 돌산갓 함유물질에 유산균이 작용하여 생성된 산물에 의한 생리활성 연구에서 strain Dolsan 접종 배양액의 ACE 저해활성이 98.9%로 가장 우수하였으나 항산화와 항암활성은 시료의 전처리 과정에서 분자량이 큰 생리활성 물질이 많이 제거되었기 때문에 50%미만의 활성을 나타내었다. Myrosinase와 protease를 돌산갓에 처리하여 반응 후에 생리활성의 증가를 살펴본 결과, 항산화 효과와 ACE 저해활성의 상승효과는 미비하였다. 항암활성은 갓 즙액에 protease 처리한 군에서 46.7%, sinigrin에 protease 처리한 군에서는 48.2%로 protease를 처리한 군에서 높았다. 따라서 생리활성 물질의 탐구를 위하여 가장 생리활성의 증가를 보인 strain Dolsan 접종에 의한 배양액을 추출하여 항고혈압 활성 물질에 대한 분석을 행하였다. 6. 항고혈압 활성 물질을 분리하기 위하여, 돌산갓 즙액에 strain Dolsan을 접종한 배양액의 ACE 저해활성이 98%로서 가장 우수하였으므로 좀 더 상세한 확인을 위하여 배양액을 추출하여 HPLC column을 통하여 peak 별로 분리하였다. ACE 저해활성을 측정한 결과 갓즙액 strain Dolsan 배양액의 n-butanol 추출 분획물 중 상등액에서 ACE 저해활성이 94.8%로 높았으므로 이를 HPLC로 분리하였다. 분리결과 6개의 peak가 얻어 졌으며 TSKgel NH2-60 column을 사용하여 시료를 용출시켰을 때 peak 분리가 잘 이루어졌다. 특히, peak No. 3에서 항고혈압 활성이 우수했다. 이로서 돌산갓 즙액의 항고혈압 활성은 한가지 물질에 의한 것이 아니라 돌산갓 함유 물질에 미생물이 작용하여 생산해낸 대사산물로서 추정되었다.
Physiological activity in different parts of Dolsan leaf mustard(DLM) was investigated. To determine the physiological activity, DLM was crushed, filtered, centrifuged and then the supernatant was used as a sample. The sample was added into HepG2(Hepatocellular carcinoma, human, ATCC) culture broth ...
Physiological activity in different parts of Dolsan leaf mustard(DLM) was investigated. To determine the physiological activity, DLM was crushed, filtered, centrifuged and then the supernatant was used as a sample. The sample was added into HepG2(Hepatocellular carcinoma, human, ATCC) culture broth by the concentration of 1%, 3% and 6%. By adding of improved root juice (20th day) with concentration of 6%, the cytotoxicity against HepG2 was the highest about 78.2%. And antioxidative effects in different parts of DLM was measured by using the DPPH method. Antioxidative effects was higher in all leaves than other parts. In particular, antioxidative effects was the highest in leaves of traditional DLM at the 20th day of growth about 80.4%. In leaves of improved DLM at the 60th day growth, angiotensin converting enzyme(ACE) inhibitory effect was the highest about 94.0%. Consequently, there was not significant difference of physiological activity between improved and traditional DLM. However, the cytotoxicity against HepG2 was the highest in roots of DLM. And the antioxidative and ACE inhibitory effect in leaves of DLM were higher than those of other parts. Changes in antioxidative activity and ACE inhibitory activity in juice prepared from Dolsan leaf mustard Kimchi(DLMK) at various fermentation temperatures were investigated. Antioxidative activity of juice from optimally ripened DLMK at 20℃ and 30℃ showed 80% and 83%, respectively. Juice from fermented DLMK during 10 days at 30℃ showed 62% inhibitory activity against the ACE. In the juice fermented DLMK at 20℃~30℃, physiological activity was higher than that of the 4℃~10℃. In particular, optimally ripened DLMK at 30℃ showed the highest physiological activity. The physiological activity in DLMK juice at the fermentation period was increased significantly with increase in the growth of microbes. Consequently, a maximum physiological activity was shown at the maximum cell number. These results suggest that the microorganisms in DLMK juice would play an important role in the physiological activity. The microfloral changes of lactic acid bacteria during DLMK fermentation at 4, 10, 20 and 30℃ were compared by use of selective media. The patterns of microfloral changes in each bacterial group, Leuconostoc, Lactobacilli, Pediococci and Streptococci, were similar at different fermentation temperature. Among them, Leuconostoc and Lactobacilli showed high population at 4, 10, 20 and 30℃ than those of others. They were maximum cell number in optimum ripening period, and decreased slowly later. But, Pediococci and Streptococci were lowly population during throughout fermentation period. And the bacterial strains which had been isolated from the 4th day's DLMK fermented at 20℃ were inoculated as Kimchi starters, and then their effects were investigated during fermentation at 4 and 10℃. The physiological activity and total number of microbes increased in starter-inoculated DLMK on inoculated concentration from 1×10^(7) to 1×10^(10) cells/mL. The physiological activity and fermentation pattern of starter-inoculated DLMK(1×10^(10) cells/mL) was similar to fermented DLMK at 30℃. So, starter-inoculated DLMK(1×10^(10) cells/mL) have easily acidifications. To extend the storage period, the starter-inoculated DLMK was fermented at 4℃. However, the microbes of starter-inoculated DLMK grew slowly at 4℃. The level of physiological activity of starter-inoculated DLMK(1×10^(10) cells/mL) at 4℃ was similar to starter-inoculated DLMKs(1×10^(7), 1×10^(10) cells/mL) at 10℃. Consequently, the addition of starter into the DLMK preparation significantly increased the physiological activity of DLMK. It was isolated and identification bacteria in DLMK. Those strains of Leuconostoc, Lactobacilli, Pediococci and Streptococci were Leuconostoc mesenteroides sp. mesenteroides, Leuconostoc gelidium, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus alimentarius, Lactobacillus raffinolactis, Lactobacillus delbruekii sp. lactis, Lactococcus plantarum, Pediococcus pentosaceus, and Pediococcus parvulus. Especially, we isolated predominant strain from properly ripened DLMK at 20℃. We called it strain Dolsan. Phylogenetic analysis of 16S rDNA showed that strain Dolsan was member of the genus Weissella. And the nearlest phylogenetic relatives of isolated strain Dolsan was Weissella kimchii with 16S rDNA similarity of 99%. To investigate the physiological activity of metabolically changed materials, culture medium itself and DLM juice treated with various enzyme and microbes were researched. In case of lactic acid bacteria cultured medium itself, it was not showed remarkable increse of physiological activity. In case of DLM juice by add of strain Dolsan, ACE inhibitory activity among other physiologiacal activities was shown as maximal value by 94%. As DLM juice treated with various enzyme, anticancer and ACE inhibitory activity of DLM juice were increased by protease. But, antioxidative activity was very low. DLM juice by add of strain Dolsan was showed the highest ACE inhibitory acivity, so, its butanol extract(the culture of strain Dolsan) was separated and collected by HPLC. By HPLC, the peak number 3 showed the highest ACE inhibitory activity by 90.6% at the concentration of 100 ㎍/mL. But the other peaks showed lower activity than B. Resultly, it was suggested that the ACE inhibitory material was closely related with hydrolysis products of DLM juice by microoranism.
Physiological activity in different parts of Dolsan leaf mustard(DLM) was investigated. To determine the physiological activity, DLM was crushed, filtered, centrifuged and then the supernatant was used as a sample. The sample was added into HepG2(Hepatocellular carcinoma, human, ATCC) culture broth by the concentration of 1%, 3% and 6%. By adding of improved root juice (20th day) with concentration of 6%, the cytotoxicity against HepG2 was the highest about 78.2%. And antioxidative effects in different parts of DLM was measured by using the DPPH method. Antioxidative effects was higher in all leaves than other parts. In particular, antioxidative effects was the highest in leaves of traditional DLM at the 20th day of growth about 80.4%. In leaves of improved DLM at the 60th day growth, angiotensin converting enzyme(ACE) inhibitory effect was the highest about 94.0%. Consequently, there was not significant difference of physiological activity between improved and traditional DLM. However, the cytotoxicity against HepG2 was the highest in roots of DLM. And the antioxidative and ACE inhibitory effect in leaves of DLM were higher than those of other parts. Changes in antioxidative activity and ACE inhibitory activity in juice prepared from Dolsan leaf mustard Kimchi(DLMK) at various fermentation temperatures were investigated. Antioxidative activity of juice from optimally ripened DLMK at 20℃ and 30℃ showed 80% and 83%, respectively. Juice from fermented DLMK during 10 days at 30℃ showed 62% inhibitory activity against the ACE. In the juice fermented DLMK at 20℃~30℃, physiological activity was higher than that of the 4℃~10℃. In particular, optimally ripened DLMK at 30℃ showed the highest physiological activity. The physiological activity in DLMK juice at the fermentation period was increased significantly with increase in the growth of microbes. Consequently, a maximum physiological activity was shown at the maximum cell number. These results suggest that the microorganisms in DLMK juice would play an important role in the physiological activity. The microfloral changes of lactic acid bacteria during DLMK fermentation at 4, 10, 20 and 30℃ were compared by use of selective media. The patterns of microfloral changes in each bacterial group, Leuconostoc, Lactobacilli, Pediococci and Streptococci, were similar at different fermentation temperature. Among them, Leuconostoc and Lactobacilli showed high population at 4, 10, 20 and 30℃ than those of others. They were maximum cell number in optimum ripening period, and decreased slowly later. But, Pediococci and Streptococci were lowly population during throughout fermentation period. And the bacterial strains which had been isolated from the 4th day's DLMK fermented at 20℃ were inoculated as Kimchi starters, and then their effects were investigated during fermentation at 4 and 10℃. The physiological activity and total number of microbes increased in starter-inoculated DLMK on inoculated concentration from 1×10^(7) to 1×10^(10) cells/mL. The physiological activity and fermentation pattern of starter-inoculated DLMK(1×10^(10) cells/mL) was similar to fermented DLMK at 30℃. So, starter-inoculated DLMK(1×10^(10) cells/mL) have easily acidifications. To extend the storage period, the starter-inoculated DLMK was fermented at 4℃. However, the microbes of starter-inoculated DLMK grew slowly at 4℃. The level of physiological activity of starter-inoculated DLMK(1×10^(10) cells/mL) at 4℃ was similar to starter-inoculated DLMKs(1×10^(7), 1×10^(10) cells/mL) at 10℃. Consequently, the addition of starter into the DLMK preparation significantly increased the physiological activity of DLMK. It was isolated and identification bacteria in DLMK. Those strains of Leuconostoc, Lactobacilli, Pediococci and Streptococci were Leuconostoc mesenteroides sp. mesenteroides, Leuconostoc gelidium, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus alimentarius, Lactobacillus raffinolactis, Lactobacillus delbruekii sp. lactis, Lactococcus plantarum, Pediococcus pentosaceus, and Pediococcus parvulus. Especially, we isolated predominant strain from properly ripened DLMK at 20℃. We called it strain Dolsan. Phylogenetic analysis of 16S rDNA showed that strain Dolsan was member of the genus Weissella. And the nearlest phylogenetic relatives of isolated strain Dolsan was Weissella kimchii with 16S rDNA similarity of 99%. To investigate the physiological activity of metabolically changed materials, culture medium itself and DLM juice treated with various enzyme and microbes were researched. In case of lactic acid bacteria cultured medium itself, it was not showed remarkable increse of physiological activity. In case of DLM juice by add of strain Dolsan, ACE inhibitory activity among other physiologiacal activities was shown as maximal value by 94%. As DLM juice treated with various enzyme, anticancer and ACE inhibitory activity of DLM juice were increased by protease. But, antioxidative activity was very low. DLM juice by add of strain Dolsan was showed the highest ACE inhibitory acivity, so, its butanol extract(the culture of strain Dolsan) was separated and collected by HPLC. By HPLC, the peak number 3 showed the highest ACE inhibitory activity by 90.6% at the concentration of 100 ㎍/mL. But the other peaks showed lower activity than B. Resultly, it was suggested that the ACE inhibitory material was closely related with hydrolysis products of DLM juice by microoranism.
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