혈전(Fibrin)은 thrombin이 fibrinogen을 변화시켜 혈소판, 혈액세포등을 둘러싼 결과 생기는 물질로, 출혈시 혈액응고에 관여한다. 이러한 반응으로 인해, 정상적인 상황에서는 지혈에 관여하는 요소로 작용하지만, 혈관내에서 비정상적으로 혈액응고반응이 일어나는 경우에 혈액의 원활한 순환을 방해하며, 혈전증, 색전증, ...
혈전(Fibrin)은 thrombin이 fibrinogen을 변화시켜 혈소판, 혈액세포등을 둘러싼 결과 생기는 물질로, 출혈시 혈액응고에 관여한다. 이러한 반응으로 인해, 정상적인 상황에서는 지혈에 관여하는 요소로 작용하지만, 혈관내에서 비정상적으로 혈액응고반응이 일어나는 경우에 혈액의 원활한 순환을 방해하며, 혈전증, 색전증, 심근경색, 뇌근색등 여러 질병을 유발한다. 현재, 여러 가지 혈전용해제가 연구되고 있는데, 가장 상용화되어있는 것은 tPA (tissue plasimogen activator), UK (urokinase), SK (streptokinase) 등이 있으며, 이들은 직접적으로 fibrin을 분해하지 못하고, plasminogen을 plasmin으로 활성화시켜 간접적인 방법으로 혈전을 분해시킨다. 또한 이와 같은 혈전치료제들은 UK를 제외한 나머지 것들은 경구투여가 불가능하며, 반감기가 짧고, 정제과정이 복잡하여 가격이 매우 높은 단점을 지니고 있다. 미생물에서 단백질을 분리, 정제하게 되면 정제과정이 단순하여 비용이 줄어든다는 것을 장점으로 들 수 있으며, 이러한 이점 때문에 현재 한국, 일본, 중국등 여러나라에서 혈전치료제에 대한 활발한 연구가 이루어지고 있다. 본 연구에서는 평소 상용적으로 섭취하고 있는 한국 전통발효식품인 젓갈에서 이러한 혈전용해효소을 분비하는 균주를 분리함으로써 젓갈의 유용성을 증명하고, 젓갈의 섭취만으로 혈전관련질병을 예방할 수 있는 기능성식품으로 다시 재평가 받기 위해 연구를 진행하고 있다. 젓갈에서 총 188개의 균주들을 분리하였으며, 0.3% fibrin이 함유된 평판배지를 사용한 결과, 혈전용해활성을 지니는 것들은 총 16 균주였다. 그 중, 가장 활성이 높았던strain 31을 API kit, 16S rRNA 염기서열분석으로 동정한 결과 각각 93.9%, 99.9%의 확률로 Bacillus lichemifomis로 동정되었다. 이 strain을 대상으로 차후의 실험을 진행하였다. 75% 유안침전, FPLC를 통해 효소을 분리, 정제한 후, SDS-PAGE와 Fibrin-zymography를 통해 확인하였으며 그 분자량은 약 37 kDa이었다. fibrin plate법과 fibrin 용액, 인공기질을 사용하여 활성을 측정한 결과, pH 9, 40℃에서 가장 큰 활성을 보였으며, 여러가지 단백질 저해제로 활성을 저해시켜본 결과, 1 mM PMSF에서 약 23%까지 활성을 저해시키는 것을 보아 이 효소는serine-type protease로 판단되어진다. 또한, fibinogen, thrombin, fibrin등을 직접적으로 분해하는 특성을 보였다. 정제한 protein으로 tryptic digestion mapping한 결과 Bacillopeptidase F와 가장 근접하였으며, internal sequence 결과, fibrinolytic activity를 가지는 부분은 peptidase_S8 부위로 subtilisin family에 속해있다.
혈전(Fibrin)은 thrombin이 fibrinogen을 변화시켜 혈소판, 혈액세포등을 둘러싼 결과 생기는 물질로, 출혈시 혈액응고에 관여한다. 이러한 반응으로 인해, 정상적인 상황에서는 지혈에 관여하는 요소로 작용하지만, 혈관내에서 비정상적으로 혈액응고반응이 일어나는 경우에 혈액의 원활한 순환을 방해하며, 혈전증, 색전증, 심근경색, 뇌근색등 여러 질병을 유발한다. 현재, 여러 가지 혈전용해제가 연구되고 있는데, 가장 상용화되어있는 것은 tPA (tissue plasimogen activator), UK (urokinase), SK (streptokinase) 등이 있으며, 이들은 직접적으로 fibrin을 분해하지 못하고, plasminogen을 plasmin으로 활성화시켜 간접적인 방법으로 혈전을 분해시킨다. 또한 이와 같은 혈전치료제들은 UK를 제외한 나머지 것들은 경구투여가 불가능하며, 반감기가 짧고, 정제과정이 복잡하여 가격이 매우 높은 단점을 지니고 있다. 미생물에서 단백질을 분리, 정제하게 되면 정제과정이 단순하여 비용이 줄어든다는 것을 장점으로 들 수 있으며, 이러한 이점 때문에 현재 한국, 일본, 중국등 여러나라에서 혈전치료제에 대한 활발한 연구가 이루어지고 있다. 본 연구에서는 평소 상용적으로 섭취하고 있는 한국 전통발효식품인 젓갈에서 이러한 혈전용해효소을 분비하는 균주를 분리함으로써 젓갈의 유용성을 증명하고, 젓갈의 섭취만으로 혈전관련질병을 예방할 수 있는 기능성식품으로 다시 재평가 받기 위해 연구를 진행하고 있다. 젓갈에서 총 188개의 균주들을 분리하였으며, 0.3% fibrin이 함유된 평판배지를 사용한 결과, 혈전용해활성을 지니는 것들은 총 16 균주였다. 그 중, 가장 활성이 높았던strain 31을 API kit, 16S rRNA 염기서열분석으로 동정한 결과 각각 93.9%, 99.9%의 확률로 Bacillus lichemifomis로 동정되었다. 이 strain을 대상으로 차후의 실험을 진행하였다. 75% 유안침전, FPLC를 통해 효소을 분리, 정제한 후, SDS-PAGE와 Fibrin-zymography를 통해 확인하였으며 그 분자량은 약 37 kDa이었다. fibrin plate법과 fibrin 용액, 인공기질을 사용하여 활성을 측정한 결과, pH 9, 40℃에서 가장 큰 활성을 보였으며, 여러가지 단백질 저해제로 활성을 저해시켜본 결과, 1 mM PMSF에서 약 23%까지 활성을 저해시키는 것을 보아 이 효소는serine-type protease로 판단되어진다. 또한, fibinogen, thrombin, fibrin등을 직접적으로 분해하는 특성을 보였다. 정제한 protein으로 tryptic digestion mapping한 결과 Bacillopeptidase F와 가장 근접하였으며, internal sequence 결과, fibrinolytic activity를 가지는 부분은 peptidase_S8 부위로 subtilisin family에 속해있다.
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