제비꽃과의 다년생 식물로 자 화 지정 초라 불리는 Viola mandshurica는 우리나라 전역의 양지바르고 습기가 있는 지역에서 흔히 자라는 제비꽃으로 잘 알려져 있는 식물이다. 동의보감, 본초강목에 의하면 자 화 지정은 항균작용, 화농성피부질환, 여드름, 관절염 등에 효능이 있다고 한다. 본 실험은 위와 같이 생리활성이 좋은 제비꽃을 6개월간 발효시켜 그 상층 액을 헥 산, ...
제비꽃과의 다년생 식물로 자 화 지정 초라 불리는 Viola mandshurica는 우리나라 전역의 양지바르고 습기가 있는 지역에서 흔히 자라는 제비꽃으로 잘 알려져 있는 식물이다. 동의보감, 본초강목에 의하면 자 화 지정은 항균작용, 화농성피부질환, 여드름, 관절염 등에 효능이 있다고 한다. 본 실험은 위와 같이 생리활성이 좋은 제비꽃을 6개월간 발효시켜 그 상층 액을 헥 산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄 올 등과 같은 유기용매에 유효성분 물질을 추출하여 발효된 제비꽃의 강력한 생리 활성, 특히 미백 효과를 중점적으로 알아보았다. 우선 항산 화 효능을 검정할 수 있는 DPPH 자유 라디 칼 소거 능력과 NBT/Xanthine Oxidase 활성을 확인한 결과에서 각각의 유기용매 추출물 가운데 클로로포름 추출물(CEFV)에 강력한 유효성분이 있다는 것을 확인하였다. CEFV를 HPLC로 분석한 결과, 텍토리딘, 루테올린, 레스베라트롤, 헤스페레틴 등이 주성분으로 동정 되었으며, 이후 수행된 미백실험은 CEFV를 이용하여 진행하였다. 먼저 B16F10 흑색 종 세포에 CEFV에 대한 세포독성 실험을 한 결과, 100 ㎍/㎖의 농도까지는 독성이 없어 최대 농도를 100 ㎍/㎖로 처리를 하기로 하였다. 10, 50, 100 ㎍/㎖의 농도로 CEFV를 3일간 세포에 처리한 후, 펠렛의 색깔을 육안으로 관찰하였을 때, CEFV 농도 의존적으로 색이 밝아지는 것으로 나타났다. 또한 타이로신분해 효소 활성 정도에서도 CEFV 농도 의존적으로 활성이 점차 감소하는 것으로 나타났으며, 멜라닌 양을 측정한 결과 역시도 그에 비례하여 멜라닌의 양이 줄어드는 결과를 보였다. 세포 내의 타이로신 분해 효소의 양을 알아보기 위해, 자이모그래피 방법과 세포를 타이로신 분해 효소의 기질인 DOPA로 염색을 한 결과 역시, CEFV 농도 의존적으로 감소하는 경향을 보였다. 멜라닌 생합성에 관여하는 중요한 효소인, 타이로신 분해 효소 및 TRP1과 TRP2의 단백질과 mRNA 발현 량을 확인한 결과 이들의 발현 량이 CEFV 농도 의존적으로 감소하는 것을 알 수 있었다. 멜라닌 생성과 관련된 신호전달경로에서 CEFV가 어떻게 영향을 미치는지 알아보기 위해서 대표적인 ERK와 CREB 신호전달경로를 확인해 보았다. CREB의 경우 CEFV를 처리하면 CREB 인산화는 농도 의존적으로 활성화가 감소하는 결과를 보인 반면, ERK의 경우 CEFV를 처리하였을 때 인산화가 계속해서 유지되었다. 이것은 타이로신 분해 효소의 트랜스크립션 팩터인 MITF의 mRNA 발현 량을 감소시키거나 단백질 수준에서의 분해 작용을 촉진시키는 결과로 RT-PCR과 웨스턴 블롯 분석을 통하여 확인되었다. ERK 신호전달경로에 대해서 더 확실한 이해를 위해 ERK의 억제물질인 U0126을 처리한 결과, 예상대로 ERK 활성이 완벽하게 제어되어 MITF 단백질은 증가하였으며, 여기에 CEFV를 처리하면 소실되었던 ERK의 인산화가 활성화되어 MITF 단백질 수준은 감소하는 것을 알 수 있었다. 이상의 결과는 CEFV가 항 산화 작용과 미백 작용에 뛰어난 효능이 있다는 것을 확인시켜 준다.
제비꽃과의 다년생 식물로 자 화 지정 초라 불리는 Viola mandshurica는 우리나라 전역의 양지바르고 습기가 있는 지역에서 흔히 자라는 제비꽃으로 잘 알려져 있는 식물이다. 동의보감, 본초강목에 의하면 자 화 지정은 항균작용, 화농성피부질환, 여드름, 관절염 등에 효능이 있다고 한다. 본 실험은 위와 같이 생리활성이 좋은 제비꽃을 6개월간 발효시켜 그 상층 액을 헥 산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄 올 등과 같은 유기용매에 유효성분 물질을 추출하여 발효된 제비꽃의 강력한 생리 활성, 특히 미백 효과를 중점적으로 알아보았다. 우선 항산 화 효능을 검정할 수 있는 DPPH 자유 라디 칼 소거 능력과 NBT/Xanthine Oxidase 활성을 확인한 결과에서 각각의 유기용매 추출물 가운데 클로로포름 추출물(CEFV)에 강력한 유효성분이 있다는 것을 확인하였다. CEFV를 HPLC로 분석한 결과, 텍토리딘, 루테올린, 레스베라트롤, 헤스페레틴 등이 주성분으로 동정 되었으며, 이후 수행된 미백실험은 CEFV를 이용하여 진행하였다. 먼저 B16F10 흑색 종 세포에 CEFV에 대한 세포독성 실험을 한 결과, 100 ㎍/㎖의 농도까지는 독성이 없어 최대 농도를 100 ㎍/㎖로 처리를 하기로 하였다. 10, 50, 100 ㎍/㎖의 농도로 CEFV를 3일간 세포에 처리한 후, 펠렛의 색깔을 육안으로 관찰하였을 때, CEFV 농도 의존적으로 색이 밝아지는 것으로 나타났다. 또한 타이로신 분해 효소 활성 정도에서도 CEFV 농도 의존적으로 활성이 점차 감소하는 것으로 나타났으며, 멜라닌 양을 측정한 결과 역시도 그에 비례하여 멜라닌의 양이 줄어드는 결과를 보였다. 세포 내의 타이로신 분해 효소의 양을 알아보기 위해, 자이모그래피 방법과 세포를 타이로신 분해 효소의 기질인 DOPA로 염색을 한 결과 역시, CEFV 농도 의존적으로 감소하는 경향을 보였다. 멜라닌 생합성에 관여하는 중요한 효소인, 타이로신 분해 효소 및 TRP1과 TRP2의 단백질과 mRNA 발현 량을 확인한 결과 이들의 발현 량이 CEFV 농도 의존적으로 감소하는 것을 알 수 있었다. 멜라닌 생성과 관련된 신호전달경로에서 CEFV가 어떻게 영향을 미치는지 알아보기 위해서 대표적인 ERK와 CREB 신호전달경로를 확인해 보았다. CREB의 경우 CEFV를 처리하면 CREB 인산화는 농도 의존적으로 활성화가 감소하는 결과를 보인 반면, ERK의 경우 CEFV를 처리하였을 때 인산화가 계속해서 유지되었다. 이것은 타이로신 분해 효소의 트랜스크립션 팩터인 MITF의 mRNA 발현 량을 감소시키거나 단백질 수준에서의 분해 작용을 촉진시키는 결과로 RT-PCR과 웨스턴 블롯 분석을 통하여 확인되었다. ERK 신호전달경로에 대해서 더 확실한 이해를 위해 ERK의 억제물질인 U0126을 처리한 결과, 예상대로 ERK 활성이 완벽하게 제어되어 MITF 단백질은 증가하였으며, 여기에 CEFV를 처리하면 소실되었던 ERK의 인산화가 활성화되어 MITF 단백질 수준은 감소하는 것을 알 수 있었다. 이상의 결과는 CEFV가 항 산화 작용과 미백 작용에 뛰어난 효능이 있다는 것을 확인시켜 준다.
We studied about physiological activities of fermented Viola Mandshurica extracts. First of all, we extracted active constituent from 4 kinds of solvents, such as Hexane, Chloroform, Ethyl Acetate and Butanol. And we could find out Chloroform extract from fermented Viola mandshurica (CEFV) was the m...
We studied about physiological activities of fermented Viola Mandshurica extracts. First of all, we extracted active constituent from 4 kinds of solvents, such as Hexane, Chloroform, Ethyl Acetate and Butanol. And we could find out Chloroform extract from fermented Viola mandshurica (CEFV) was the most useful extract by DPPH assay which was method for testing anti-oxidant activity. So, we used to select CEFV for next steps experiments the only. CEFV was checked the strong material, because it made to increase the anti-oxidative activity by DPPH assay, but also XO/NBT assay. We have melanin which is made by melanocyte, for protecting our skin from ultra-violet lights, but there are too much melanin saved on the skin causes some skin diseases such as melasma, melanoma, and wrinkle. Melanogenic pathway, called melanogenesis, needs tyrosinase, the most important enzyme, for making melanin. We treated CEFV to B16F10 mouse melanoma cells for checking melanogenesis. CEFV treatment significantly decreased melanin content and tyrosinase activity in dose-dependent manner. To elucidate the mechanism of inhibitory effects of CEFV on melanogenesis, we performed RT-PCR and Western blotting for melanogenic enzymes such as tyrosinase, tyrosinase-related protein-1 (TRP-1), and TRP-2. CEFV strongly inhibited mRNA as well as protein expressions of tyrosinase, but had no effect on TRP-1 and TRP-2 expressions. Furthermore, CEFV significantly reduced the expression of microphthalmia-associated transcription factor (MITF), the major transcriptional factor in regulation of tyrosinase expression. CEFV induced the duration of ERK activation accompanied with decreased CREB phosphorylation, indicating that both ERK and CREB pathways are involved in melanogenic signaling pathway. Therefore, we suggest that CEFV induces the down-regulation of melanogenesis through ERK activation and ecreased CREB phosphorylation.
We studied about physiological activities of fermented Viola Mandshurica extracts. First of all, we extracted active constituent from 4 kinds of solvents, such as Hexane, Chloroform, Ethyl Acetate and Butanol. And we could find out Chloroform extract from fermented Viola mandshurica (CEFV) was the most useful extract by DPPH assay which was method for testing anti-oxidant activity. So, we used to select CEFV for next steps experiments the only. CEFV was checked the strong material, because it made to increase the anti-oxidative activity by DPPH assay, but also XO/NBT assay. We have melanin which is made by melanocyte, for protecting our skin from ultra-violet lights, but there are too much melanin saved on the skin causes some skin diseases such as melasma, melanoma, and wrinkle. Melanogenic pathway, called melanogenesis, needs tyrosinase, the most important enzyme, for making melanin. We treated CEFV to B16F10 mouse melanoma cells for checking melanogenesis. CEFV treatment significantly decreased melanin content and tyrosinase activity in dose-dependent manner. To elucidate the mechanism of inhibitory effects of CEFV on melanogenesis, we performed RT-PCR and Western blotting for melanogenic enzymes such as tyrosinase, tyrosinase-related protein-1 (TRP-1), and TRP-2. CEFV strongly inhibited mRNA as well as protein expressions of tyrosinase, but had no effect on TRP-1 and TRP-2 expressions. Furthermore, CEFV significantly reduced the expression of microphthalmia-associated transcription factor (MITF), the major transcriptional factor in regulation of tyrosinase expression. CEFV induced the duration of ERK activation accompanied with decreased CREB phosphorylation, indicating that both ERK and CREB pathways are involved in melanogenic signaling pathway. Therefore, we suggest that CEFV induces the down-regulation of melanogenesis through ERK activation and ecreased CREB phosphorylation.
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