자동화된 초고속 RT-PCR 마이크로칩 개발 : Development of an automated high-speed/high-performance reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) microchip원문보기
본 논문에서는 올리고-dT 자성입자와 측면방향 자기영동 기술을 사용하여 초고속 RNA 추출칩 및 RNA 추출 기능과 cDNA 합성 기능이 융합된 RT(reverse transcription)-마이크로칩을 소개한다. 초고속 RNA 추출칩은 상감 형성된 센자성 와이어에 유도된 고구배자장에 의해 RNA가 결합된 올리고-dT 자성입자를 분리함으로써 용해된 혈액으로부터 고속으로 RNA를 추출하였다. 유속이 20 ml/h까지 자성입자를 80% 이상의 효율로 분리할 수 있었으며, 분리시간은 총 1분 이내였다. 추출된 시료로부터 단백질에 대한 RNA 흡광비율(absorbance ratio of RNA to protein: A260/A280)이 1.7 이상임을 확인하였고, 따라서 추출된 RNA가 매우 순수함을 보였다. 추출된 RNA를 사용하여 cDNA 합성과 PCR을 수행하였으며, 이로부터 개발된 초고속 RNA 추출칩이 적은 양의 시료만으로 간편하며 빠르고 정교한 RT-PCR을 수행하는데 실용적임을 확인하였다. 나가가 개발된 RNA 추출 기술과 이후 유전자분석 과정인 cDNA 합성 기능이 융합된 RT-마이크로칩을 개발하였으며, 개발된 RT-마이크로칩은 RNA 추출칩으로부터 분리된 RNA를 칩상에서 바로 cDNA로 합성하였다. RT-마이크로칩의 성능평가를 위해 ...
본 논문에서는 올리고-dT 자성입자와 측면방향 자기영동 기술을 사용하여 초고속 RNA 추출칩 및 RNA 추출 기능과 cDNA 합성 기능이 융합된 RT(reverse transcription)-마이크로칩을 소개한다. 초고속 RNA 추출칩은 상감 형성된 센자성 와이어에 유도된 고구배자장에 의해 RNA가 결합된 올리고-dT 자성입자를 분리함으로써 용해된 혈액으로부터 고속으로 RNA를 추출하였다. 유속이 20 ml/h까지 자성입자를 80% 이상의 효율로 분리할 수 있었으며, 분리시간은 총 1분 이내였다. 추출된 시료로부터 단백질에 대한 RNA 흡광비율(absorbance ratio of RNA to protein: A260/A280)이 1.7 이상임을 확인하였고, 따라서 추출된 RNA가 매우 순수함을 보였다. 추출된 RNA를 사용하여 cDNA 합성과 PCR을 수행하였으며, 이로부터 개발된 초고속 RNA 추출칩이 적은 양의 시료만으로 간편하며 빠르고 정교한 RT-PCR을 수행하는데 실용적임을 확인하였다. 나가가 개발된 RNA 추출 기술과 이후 유전자분석 과정인 cDNA 합성 기능이 융합된 RT-마이크로칩을 개발하였으며, 개발된 RT-마이크로칩은 RNA 추출칩으로부터 분리된 RNA를 칩상에서 바로 cDNA로 합성하였다. RT-마이크로칩의 성능평가를 위해 실리카를 기반으로한 방법 및 자성입자를 이용한 기존의 방법과 실험적으로 비교되었고, 실험 결과를 통해 RT-마이크로칩은 기본의 방법보다 우수함이 확인되었다.
본 논문에서는 올리고-dT 자성입자와 측면방향 자기영동 기술을 사용하여 초고속 RNA 추출칩 및 RNA 추출 기능과 cDNA 합성 기능이 융합된 RT(reverse transcription)-마이크로칩을 소개한다. 초고속 RNA 추출칩은 상감 형성된 센자성 와이어에 유도된 고구배자장에 의해 RNA가 결합된 올리고-dT 자성입자를 분리함으로써 용해된 혈액으로부터 고속으로 RNA를 추출하였다. 유속이 20 ml/h까지 자성입자를 80% 이상의 효율로 분리할 수 있었으며, 분리시간은 총 1분 이내였다. 추출된 시료로부터 단백질에 대한 RNA 흡광비율(absorbance ratio of RNA to protein: A260/A280)이 1.7 이상임을 확인하였고, 따라서 추출된 RNA가 매우 순수함을 보였다. 추출된 RNA를 사용하여 cDNA 합성과 PCR을 수행하였으며, 이로부터 개발된 초고속 RNA 추출칩이 적은 양의 시료만으로 간편하며 빠르고 정교한 RT-PCR을 수행하는데 실용적임을 확인하였다. 나가가 개발된 RNA 추출 기술과 이후 유전자분석 과정인 cDNA 합성 기능이 융합된 RT-마이크로칩을 개발하였으며, 개발된 RT-마이크로칩은 RNA 추출칩으로부터 분리된 RNA를 칩상에서 바로 cDNA로 합성하였다. RT-마이크로칩의 성능평가를 위해 실리카를 기반으로한 방법 및 자성입자를 이용한 기존의 방법과 실험적으로 비교되었고, 실험 결과를 통해 RT-마이크로칩은 기본의 방법보다 우수함이 확인되었다.
This report introduces a high-speed RNA microextractor for the direct isolation of RNA from peripheral blood lysate using magnetic oligo-dT beads and an on-chip integrated reverse transcription (RT)-microchip, including two genetic functionalities for RNA extraction and cDNA synthesis. The microext...
This report introduces a high-speed RNA microextractor for the direct isolation of RNA from peripheral blood lysate using magnetic oligo-dT beads and an on-chip integrated reverse transcription (RT)-microchip, including two genetic functionalities for RNA extraction and cDNA synthesis. The microextractor separated RNA through lateral magnetophoresis, generated by a ferromagnetic wire array inlaid on a glass substrate. This RNA microextractor separated more than 80% of magnetic beads with a flow rate up to 20 ml/h, and the overall extraction procedure was completed within 1 min. The absorbance ratio of RNA to protein (A260/A280) was >1.7, indicating that the extraction technology yields nearly pure RNA. The feasibility of this technique was evaluated further for its applicability to reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) procedures by performing cDNA synthesis and PCR processes. The RT-microchip synthesized directly RNA to cDNA in cDNA synthesis microchamber, which is monolithically integrated in the RNA microextractor. To verify the superiority of the RT-microchip, RT-PCR amplification using cDNA harvested from the RT-microchip is performed and compared with results using typical RNA extraction methods such as silica column matrix and magnetic oligo-dT beads. The experimental result demonstrated that the RT-microchip technique is the most sensitive than the other methods.
This report introduces a high-speed RNA microextractor for the direct isolation of RNA from peripheral blood lysate using magnetic oligo-dT beads and an on-chip integrated reverse transcription (RT)-microchip, including two genetic functionalities for RNA extraction and cDNA synthesis. The microextractor separated RNA through lateral magnetophoresis, generated by a ferromagnetic wire array inlaid on a glass substrate. This RNA microextractor separated more than 80% of magnetic beads with a flow rate up to 20 ml/h, and the overall extraction procedure was completed within 1 min. The absorbance ratio of RNA to protein (A260/A280) was >1.7, indicating that the extraction technology yields nearly pure RNA. The feasibility of this technique was evaluated further for its applicability to reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) procedures by performing cDNA synthesis and PCR processes. The RT-microchip synthesized directly RNA to cDNA in cDNA synthesis microchamber, which is monolithically integrated in the RNA microextractor. To verify the superiority of the RT-microchip, RT-PCR amplification using cDNA harvested from the RT-microchip is performed and compared with results using typical RNA extraction methods such as silica column matrix and magnetic oligo-dT beads. The experimental result demonstrated that the RT-microchip technique is the most sensitive than the other methods.
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