본 연구에서는 차가버섯(Inonotus obliquus)의 추출조건과 유효성분 추출수율 향상을 위하여 물 및 에탄올의 온도별 추출을 통해 다양한 생리활성을 검토하였으며, 면역활성증진에 기여하는 다당을 분리하고 구조적특성을 분석함으로써 차가버섯 추출물의 기능성식품소재화 가능성을 모색하며, 면역활성 다당의 특성을 파악하고자 하였다.
1. 차가버섯 온도별 열수 및 EtOH 추출물 생리활성평가에서는 에탄올추출보다는 물추출에서 수율이 증가하였으며, 가압 121℃ 열수추출물(IO-HW-121)에서 36.8%로 가장 높았으며, 폴리페놀함량과 ...
본 연구에서는 차가버섯(Inonotus obliquus)의 추출조건과 유효성분 추출수율 향상을 위하여 물 및 에탄올의 온도별 추출을 통해 다양한 생리활성을 검토하였으며, 면역활성증진에 기여하는 다당을 분리하고 구조적특성을 분석함으로써 차가버섯 추출물의 기능성식품소재화 가능성을 모색하며, 면역활성 다당의 특성을 파악하고자 하였다.
1. 차가버섯 온도별 열수 및 EtOH 추출물 생리활성평가에서는 에탄올추출보다는 물추출에서 수율이 증가하였으며, 가압 121℃ 열수추출물(IO-HW-121)에서 36.8%로 가장 높았으며, 폴리페놀함량과 항산화활성이 높았다. 면역증강활성은 90℃ 물 추출물(IO-HW-90)이 마이토젠과 장관면역활성이 높게 나타났으며, RAW264.7 cell에 대한 TNF-α억제능은 IO-HW-121이 가장 높았으며(17.0%), NO억제능은 IO-HW-90이 가장 높았다(56.2%).
2. IO-HW-90은 면역활성증진을 위하여 2개의 조다당 및 3개의 용매 가용획분으로 분리하여 생리활성을 평가하였다. IO-HW-90에 에탄올 침전하여 얻은 조다당획분(IO-CP-90)의 경우 수율, 항산화 성분 및 활성이 가장 높았으며, 면역증강활성으로는 IO-CP-90이 복강내 마크로파지를 20 μg/mL에서 유의적으로 높은 증식능(1.97배)을 나타냈으며, 비장세포에 대해서도 높은 마이토젠활성을 나타내었다(1.41배). Peyer's patch cell을 경유한 골수세포증식에 대한 장관면역활성으로도 1.79배의 증식을 유도하였다. LPS로 유도된 RAW 264.7cell에 대한 항염증활성으로도 TNF-α(11.1%)와 NO(80.1%)가 억제되었다.
생리활성이 높게 나타난 조다당획분으로 구성분 및 구성당을 검토한 결과 IO-CP-90은 중성당(82.35%), 산성당(17.86%)및 단백질(9.59%)의 함량으로 구성되어있음을 알 수 있었다.
3. 면역활성에 증가를 보인 조다당분획물 중 IO-CP-90을 이용하여 면역활성화 다당의 분리를 DEAE-Sepharose CL-6B column을 활용해 NaCl농도에 따라 분리하였으며, 항산화활성은 분리 시 감소되는 경향을 나타내었다. 면역증강활성으로는 0.1 M NaCl농도에서 분리한 IO-CP-90-II가 복강내 마크로파지를 가장 높게 증식하였으며(saline 대조군의 1.64배), 비장세포에 대한 마이토젠활성으로도 saline대조군에 대해 4.51배의 높은 활성을 나타내었으나, 장관면역에서는 IO-CP-90에서 다당분리 시 감소하는 경향을 나타내었다. 면역활성에 영향을 미친 IO-CP-90-II의 특성을 살펴본 결과, IO-CP-90-II는 중성당(92.78%), 산성당(4.44%) 및 단백질(2.78%)의 함량을 가지며, 구성당비율이 Glc, Gal와 Man(1:00:0.55:0.31)의 중성당 위주로 이루어지며, 분자량이 7 kDa에서 23 kDa의 분포범위를 가진 다당체이며, methylation analysis를 행한 결과, IO-CP-90-II는 6-linked Glc(41.41%)를 포함한 총 16종의 결합으로 구성되어 있었음을 알 수 있었다.
본 연구에서는 차가버섯(Inonotus obliquus)의 추출조건과 유효성분 추출수율 향상을 위하여 물 및 에탄올의 온도별 추출을 통해 다양한 생리활성을 검토하였으며, 면역활성증진에 기여하는 다당을 분리하고 구조적특성을 분석함으로써 차가버섯 추출물의 기능성식품소재화 가능성을 모색하며, 면역활성 다당의 특성을 파악하고자 하였다.
1. 차가버섯 온도별 열수 및 EtOH 추출물 생리활성평가에서는 에탄올추출보다는 물추출에서 수율이 증가하였으며, 가압 121℃ 열수추출물(IO-HW-121)에서 36.8%로 가장 높았으며, 폴리페놀함량과 항산화활성이 높았다. 면역증강활성은 90℃ 물 추출물(IO-HW-90)이 마이토젠과 장관면역활성이 높게 나타났으며, RAW264.7 cell에 대한 TNF-α억제능은 IO-HW-121이 가장 높았으며(17.0%), NO억제능은 IO-HW-90이 가장 높았다(56.2%).
2. IO-HW-90은 면역활성증진을 위하여 2개의 조다당 및 3개의 용매 가용획분으로 분리하여 생리활성을 평가하였다. IO-HW-90에 에탄올 침전하여 얻은 조다당획분(IO-CP-90)의 경우 수율, 항산화 성분 및 활성이 가장 높았으며, 면역증강활성으로는 IO-CP-90이 복강내 마크로파지를 20 μg/mL에서 유의적으로 높은 증식능(1.97배)을 나타냈으며, 비장세포에 대해서도 높은 마이토젠활성을 나타내었다(1.41배). Peyer's patch cell을 경유한 골수세포증식에 대한 장관면역활성으로도 1.79배의 증식을 유도하였다. LPS로 유도된 RAW 264.7cell에 대한 항염증활성으로도 TNF-α(11.1%)와 NO(80.1%)가 억제되었다.
생리활성이 높게 나타난 조다당획분으로 구성분 및 구성당을 검토한 결과 IO-CP-90은 중성당(82.35%), 산성당(17.86%)및 단백질(9.59%)의 함량으로 구성되어있음을 알 수 있었다.
3. 면역활성에 증가를 보인 조다당분획물 중 IO-CP-90을 이용하여 면역활성화 다당의 분리를 DEAE-Sepharose CL-6B column을 활용해 NaCl농도에 따라 분리하였으며, 항산화활성은 분리 시 감소되는 경향을 나타내었다. 면역증강활성으로는 0.1 M NaCl농도에서 분리한 IO-CP-90-II가 복강내 마크로파지를 가장 높게 증식하였으며(saline 대조군의 1.64배), 비장세포에 대한 마이토젠활성으로도 saline대조군에 대해 4.51배의 높은 활성을 나타내었으나, 장관면역에서는 IO-CP-90에서 다당분리 시 감소하는 경향을 나타내었다. 면역활성에 영향을 미친 IO-CP-90-II의 특성을 살펴본 결과, IO-CP-90-II는 중성당(92.78%), 산성당(4.44%) 및 단백질(2.78%)의 함량을 가지며, 구성당비율이 Glc, Gal와 Man(1:00:0.55:0.31)의 중성당 위주로 이루어지며, 분자량이 7 kDa에서 23 kDa의 분포범위를 가진 다당체이며, methylation analysis를 행한 결과, IO-CP-90-II는 6-linked Glc(41.41%)를 포함한 총 16종의 결합으로 구성되어 있었음을 알 수 있었다.
To investigate the pharmacological activity of Inonotus obliquus on extraction condition, I. obliquus was extracted using water (reflux at 50℃, 90℃ and under pressure at 121℃) or ethanol (reflux at 50℃, 70℃ and 90℃). When water extracts (IO-HW, 12.7～36.8%) were higher than ethanolic extracts (IO-E,...
To investigate the pharmacological activity of Inonotus obliquus on extraction condition, I. obliquus was extracted using water (reflux at 50℃, 90℃ and under pressure at 121℃) or ethanol (reflux at 50℃, 70℃ and 90℃). When water extracts (IO-HW, 12.7～36.8%) were higher than ethanolic extracts (IO-E, 1.9～2.7%) with increasing extraction temperature. IO-HW-121 by pressurized extraction showed the highest antioxidant activity. Meanwhile, IO-HW-90 (reflux) had more potent mitogenic and intestinal immune system modulating activity than IO-HW-121 whereas ethanolic extracts expressed no activity. Although all IO-HW and IO-E did not show the cytotoxicity against RAW 264.7 cell line at 0.1 mg/mL, IO-HW-121 significantly inhibited TNF-α and NO production as pro-inflammatory factors from LPS-stimulated RAW 264.7 cell.
To enhance the immuno-stimulating activity of IO-HW-90, IO-HW-90 was directly fractionated into crude polysaccharide (IO-CP-90, 21.1% yield of IO-HW-90), and IO-HW-90 was also prepared to crude polysaccharide from residue after MeOH reflux (IO-HW-90-M-CP, 21.7%). IO-CP-90 was the higher immuno-stimulating activity than IO-HW-90-M-CP. IO-CP-90 was the most significant immuno-stimulating activity, and showed the most effective to inhibit nitric oxide production from LPS-stimulated RAW 264.7 cell.
In addition, the active IO-CP-90 was further fractionated into a unadsorbed (IO-CP-90-I) and 7 adsorbed fractions (IO-CP-90-II～VIII) on DEAE-Sepharose CL-6B column to isolate immunostimulating polysaccharide. IO-CP-90-II showed the most potent macrophage stimulating activity and mitogenic activity. IO-CP-90-II mainly contained neutral sugar (92.78%) in addition to small amount of uronic acid (4.44%), protein (2.78%). Component sugar analysis showed that IO-CP-90-II consisted mainly of Glc, Gal and Man (molar ratio of 1.00:0.55:0.31). IO-CP-90-II was the molecular weight distribution of 7～23 kDa and methylation analysis showed that IO-CP-90-II was 6-linked Glc (41.41%) as a major linkage as well as 16 linkages.
These results suggest that crude polysaccharide from hot water extract of I. obliquus showed the most immuno-stimulating activity and anti-inflammatory activity at 90℃ reflux in any extraction conditions. In addition, IO-CP-90-II fractionated from IO-CP-90 was the most active polysaccharide and IO-CP-90-II was neutral polysaccharide involved Glc, Gal and Man.
To investigate the pharmacological activity of Inonotus obliquus on extraction condition, I. obliquus was extracted using water (reflux at 50℃, 90℃ and under pressure at 121℃) or ethanol (reflux at 50℃, 70℃ and 90℃). When water extracts (IO-HW, 12.7～36.8%) were higher than ethanolic extracts (IO-E, 1.9～2.7%) with increasing extraction temperature. IO-HW-121 by pressurized extraction showed the highest antioxidant activity. Meanwhile, IO-HW-90 (reflux) had more potent mitogenic and intestinal immune system modulating activity than IO-HW-121 whereas ethanolic extracts expressed no activity. Although all IO-HW and IO-E did not show the cytotoxicity against RAW 264.7 cell line at 0.1 mg/mL, IO-HW-121 significantly inhibited TNF-α and NO production as pro-inflammatory factors from LPS-stimulated RAW 264.7 cell.
To enhance the immuno-stimulating activity of IO-HW-90, IO-HW-90 was directly fractionated into crude polysaccharide (IO-CP-90, 21.1% yield of IO-HW-90), and IO-HW-90 was also prepared to crude polysaccharide from residue after MeOH reflux (IO-HW-90-M-CP, 21.7%). IO-CP-90 was the higher immuno-stimulating activity than IO-HW-90-M-CP. IO-CP-90 was the most significant immuno-stimulating activity, and showed the most effective to inhibit nitric oxide production from LPS-stimulated RAW 264.7 cell.
In addition, the active IO-CP-90 was further fractionated into a unadsorbed (IO-CP-90-I) and 7 adsorbed fractions (IO-CP-90-II～VIII) on DEAE-Sepharose CL-6B column to isolate immunostimulating polysaccharide. IO-CP-90-II showed the most potent macrophage stimulating activity and mitogenic activity. IO-CP-90-II mainly contained neutral sugar (92.78%) in addition to small amount of uronic acid (4.44%), protein (2.78%). Component sugar analysis showed that IO-CP-90-II consisted mainly of Glc, Gal and Man (molar ratio of 1.00:0.55:0.31). IO-CP-90-II was the molecular weight distribution of 7～23 kDa and methylation analysis showed that IO-CP-90-II was 6-linked Glc (41.41%) as a major linkage as well as 16 linkages.
These results suggest that crude polysaccharide from hot water extract of I. obliquus showed the most immuno-stimulating activity and anti-inflammatory activity at 90℃ reflux in any extraction conditions. In addition, IO-CP-90-II fractionated from IO-CP-90 was the most active polysaccharide and IO-CP-90-II was neutral polysaccharide involved Glc, Gal and Man.
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