발아현미 상황버섯의 항알레르기 효능입증 및 기전연구 / 유산균으로 발효한 발아쥐눈이콩 동충하초의 면역증진 효능입증 및 기전연구 Anti-allergic activity of Phellinus linteus grown on germinated brown rice in vitro and in vivo / Immunestimulatory effect of Cordyceps militaris grown on germinated Rhychosia nulubilis fermented with Pediococcus pentosaceus SC11 in vitro and in vivo.원문보기
Chapter 1. 상황버섯 (Phellinus linteus, PL)은 여러 가지 면역조절 효능을 가지고 있고 전통적인 약초로써 사용되었다. 본 연구는 발아현미상황버섯의 부탄올 추출물 (PBR-BuOH)의 항알레르기 효능을 ...
Chapter 1. 상황버섯 (Phellinus linteus, PL)은 여러 가지 면역조절 효능을 가지고 있고 전통적인 약초로써 사용되었다. 본 연구는 발아현미상황버섯의 부탄올 추출물 (PBR-BuOH)의 항알레르기 효능을 면역글로불린 E와 항원 (Immunoglobuin E/Atigen, IgE/Ag)로 알레르기 반응을 유도한 세포 및 동물 모델에서 확인하였다. IgE/Ag로 알레르기 반응을 유도한 RBL2H3호염구 세포에서 β-hexosaminidase의 방출량을 통해 탈과립률을 측정하였고 Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction (RT-PCR) 및 면역검출법 분석 (Immunoblotting analysis)을 통해 mRNA 및 protein 발현 분석을 진행하였다. 또한, 제 I형 과민면역반응인 국소 피부 아나필락시스 (passive cutaneous anaphylaxis, PCA)자극이 유도된 동물 모델에서 Evans blue dye와 hematoxylin & eosin staining (H&E staining)을 이용해 PBR-BuOH의 알레르기 반응 완화 효능을 분석하였다. 그 결과, PBR-BuOH은 IgE/Ag로 알레르기 반응이 유도된 RBL2H3 호염구 세포에서 TNF-a, IL-4 mRNA 발현과 FcεRI 수용체의 α- 및 β-사슬 mRNA 발현을 억제하였으며, FcεRI pathway 내 신호전달분자인 Fyn, Gab2, PI3K, Syk, 및 ERK1/2 kinase protein의 인산화를 감소시켰다. PCA 알레르기 동물 모델에서 Evans blue dye의 유출을 억제하고 조직학적 분석을 통해 귀 부종과 면역세포의 침윤을 통계적으로 유의하게 감소시키는 것을 확인하였다. 이러한 결과는 PBR-BuOH이 효과적인 항알레르기 기능성 식품, 건강보조제 혹은 약물의 소재로 사용될 수 있음을 시사한다.Chapter 2. (주)세포활성연구소사에서 제공한 소재는 발아시킨 쥐눈이콩에 동충하초 (Cordyceps militaris grown on germinated Rhychosia nulubilis, GRC)를 접종 및 배양한 신규 식품 소재이며, 면역조절 효능을 가지고 있다고 발표하였다. 본 연구에서는 cyclophosphamide (CY)가 처리된 면역력이 억제된 동물 모델을 사용하여 유산균으로 발효된 GRC의 면역증진 효능을 조사하였다. 발효에 사용한 유산균들 중에서 낙지 장아찌에서 분리된 Pediococcus pentosaceus SC11 (SC11)으로 발효한 GRC (GRC-SC11)는 RAW 264.7 대식세포에서 가장 많은 양의 산화질소 (Nitric oxide, NO)분비를 유도하였다. GRC에 SC11 유산균을 발효한 후 cordycepin과 β-glucan의 함량은 GRC보다 유의하게 증가함을 관측하였다. 또한, 면역력이 억제된 동물 모델에서 분리된 복강 대식세포에서 GRC-SC11을 투여한 군에서 NO의 분비량이 GRC 혹은 CY가 투여된 군과 비교하여 통계적으로 유의하게 증가하였다 (p < 0.05). 옵소닌화된 IgG-FITC 입자를 이용하여 면역력이 억제된 동물 모델에서 분리한 복강 대식세포에서 측정한 식균작용 활성은 GRC를 첨가한 군과 비교하여 GRC-SC11를 처리한 군에서 유의적으로 증가하였다 (p < 0.05). 그리고, GRC-SC11은 면역력이 억제된 동물 모델에서 분리된 비장세포 증식과 면역 기관 지표를 증가시켰다. GRC-SC11를 처리한 RAW 264.7 대식세포에서 인터페론 (Interferon, IFN)-γ 및 종양 괴사 인자 (tumor necrosis factor, TNF)-α와 같이 면역 활성조절에 관여하는 cytokine mRNA가 GRC를 처리한 군보다 더 많이 발현되는 것을 발견하였다. 이러한 결과는 GRC-SC11이 면역증진 효능을 가지고 있으며 면역력 저하된 환자나 어린이들에게 잠재적인 면역력 증진 효능 건강기능식품, 의약소재 또는 보충제로 사용될 수 있음을 시사한다.
Chapter 1. 상황버섯 (Phellinus linteus, PL)은 여러 가지 면역조절 효능을 가지고 있고 전통적인 약초로써 사용되었다. 본 연구는 발아현미 상황버섯의 부탄올 추출물 (PBR-BuOH)의 항알레르기 효능을 면역글로불린 E와 항원 (Immunoglobuin E/Atigen, IgE/Ag)로 알레르기 반응을 유도한 세포 및 동물 모델에서 확인하였다. IgE/Ag로 알레르기 반응을 유도한 RBL2H3 호염구 세포에서 β-hexosaminidase의 방출량을 통해 탈과립률을 측정하였고 Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction (RT-PCR) 및 면역검출법 분석 (Immunoblotting analysis)을 통해 mRNA 및 protein 발현 분석을 진행하였다. 또한, 제 I형 과민면역반응인 국소 피부 아나필락시스 (passive cutaneous anaphylaxis, PCA)자극이 유도된 동물 모델에서 Evans blue dye와 hematoxylin & eosin staining (H&E staining)을 이용해 PBR-BuOH의 알레르기 반응 완화 효능을 분석하였다. 그 결과, PBR-BuOH은 IgE/Ag로 알레르기 반응이 유도된 RBL2H3 호염구 세포에서 TNF-a, IL-4 mRNA 발현과 FcεRI 수용체의 α- 및 β-사슬 mRNA 발현을 억제하였으며, FcεRI pathway 내 신호전달분자인 Fyn, Gab2, PI3K, Syk, 및 ERK1/2 kinase protein의 인산화를 감소시켰다. PCA 알레르기 동물 모델에서 Evans blue dye의 유출을 억제하고 조직학적 분석을 통해 귀 부종과 면역세포의 침윤을 통계적으로 유의하게 감소시키는 것을 확인하였다. 이러한 결과는 PBR-BuOH이 효과적인 항알레르기 기능성 식품, 건강보조제 혹은 약물의 소재로 사용될 수 있음을 시사한다.Chapter 2. (주)세포활성연구소사에서 제공한 소재는 발아시킨 쥐눈이콩에 동충하초 (Cordyceps militaris grown on germinated Rhychosia nulubilis, GRC)를 접종 및 배양한 신규 식품 소재이며, 면역조절 효능을 가지고 있다고 발표하였다. 본 연구에서는 cyclophosphamide (CY)가 처리된 면역력이 억제된 동물 모델을 사용하여 유산균으로 발효된 GRC의 면역증진 효능을 조사하였다. 발효에 사용한 유산균들 중에서 낙지 장아찌에서 분리된 Pediococcus pentosaceus SC11 (SC11)으로 발효한 GRC (GRC-SC11)는 RAW 264.7 대식세포에서 가장 많은 양의 산화질소 (Nitric oxide, NO)분비를 유도하였다. GRC에 SC11 유산균을 발효한 후 cordycepin과 β-glucan의 함량은 GRC보다 유의하게 증가함을 관측하였다. 또한, 면역력이 억제된 동물 모델에서 분리된 복강 대식세포에서 GRC-SC11을 투여한 군에서 NO의 분비량이 GRC 혹은 CY가 투여된 군과 비교하여 통계적으로 유의하게 증가하였다 (p < 0.05). 옵소닌화된 IgG-FITC 입자를 이용하여 면역력이 억제된 동물 모델에서 분리한 복강 대식세포에서 측정한 식균작용 활성은 GRC를 첨가한 군과 비교하여 GRC-SC11를 처리한 군에서 유의적으로 증가하였다 (p < 0.05). 그리고, GRC-SC11은 면역력이 억제된 동물 모델에서 분리된 비장세포 증식과 면역 기관 지표를 증가시켰다. GRC-SC11를 처리한 RAW 264.7 대식세포에서 인터페론 (Interferon, IFN)-γ 및 종양 괴사 인자 (tumor necrosis factor, TNF)-α와 같이 면역 활성조절에 관여하는 cytokine mRNA가 GRC를 처리한 군보다 더 많이 발현되는 것을 발견하였다. 이러한 결과는 GRC-SC11이 면역증진 효능을 가지고 있으며 면역력 저하된 환자나 어린이들에게 잠재적인 면역력 증진 효능 건강기능식품, 의약소재 또는 보충제로 사용될 수 있음을 시사한다.
Chapter 2. Immunostimulatory effect of Cordyceps militaris fermented with Pediococcus pentosaceus SC11 isolated from salted small octopus (GRC-SC11) in cyclophosphamide-induced immune-suppressed mice.
Cordyceps militaris grown on germinated Rhychosia nulubilis (GRC) is reported to have many...
Chapter 2. Immunostimulatory effect of Cordyceps militaris fermented with Pediococcus pentosaceus SC11 isolated from salted small octopus (GRC-SC11) in cyclophosphamide-induced immune-suppressed mice.
Cordyceps militaris grown on germinated Rhychosia nulubilis (GRC) is reported to have many biological compounds for upregulating immune activities. In this study, we investigated the immune stimulatory activity of GRC fermented with lactic acid bacteria using cyclophosphamide (CY)-treated immunosuppressed mice model. Among lactic acid bacteria, GRC fermented with Pediococcus pentosaceus SC11 isolated from salted small octopus (GRC-SC11) induced the highest production of nitric oxide. The cordycepin and β-glucan of GRC-SC11 was increased significantly compared to that of unfermented GRC. The NO production of primary peritoneal macrphages from CY-treate mice was significantly increased by GRC-SC11 (p < 0.05). In addtion, the phagocytic activity in primary peritoneal macrophages from CY-treated mice measured by uptake of IgG-opsonized fluorescent particles was also stimulated compared to the GRC-treated group. Furthermore, GRC-SC11 increased the primary splenocyte cell proliferation and immune organ weight in CY-treated immunosuppressed mice. The level of interferon (IFN)-γ mRNA expression was significantly increased by GRC-SC11 in RAW264.7 macrophages (p < 0.05 vs. GRC), but the level of tumor necrosis factor (TNF)-α mRNA expression was slightly increased. These results indicated that GRC-SC11 had immune stimulatory activity and could be used as potential immune stimulation functional food, agent, or supplement for immune suppressed patients or children.Chapter 1. Anti-allergic activity of Phellinus linteus grown on germinated brown rice (PBR) in IgE/antigen stimulated RBL-2H3 cells and in mice with passive cutaneous anaphylaxis (PCA) reaction.
Phellinus linteus (PL) has been used as traditional herbal medicine, owing to immune regulatory activates including anti-allergic activity. Anti-allergic activity of Phellinus linteus grown on germinated brown rice (PBR) butanol fraction (PBR-BuOH) was examined using in vitro and in vivo Immunoglobulin E/Antigen (IgE/Ag)-induced allergic models. The release of β-hexosaminidase was evaluated in IgE/Ag-induced RBL2H3 cells. PBR BuOH inhibited IgE/Ag-induced degranulation in RBL2H3 cells (p < 0.01 vs. IgE/Ag-stimulated control). The anti-allergic effect of PBR-BuOH was checked using Reverse transcriptase chain reaction (RT-PCR) and immunoblotting analysis. The level of tumor necrosis factor (TNF)-α mRNA expression was significantly decreased by PBR-BuOH in IgE/Ag-induced RBL2H3 cells in dose-dependent manner (p < 0.05 vs. IgE/Ag control), but the level of Interleukin (IL)-4 mRNA expression was slightly decreased. Furthermore, FcεRI α- and β- chain mRNA expression was significantly decreased by PBR-BuOH in IgE/Ag-induced RBL2H3 cells in dose-dependent manner (p < 0.05 vs. IgE/Ag-stimualted control) To elucidate the anti-allergic mechanism of PBR-BuOH in RBL2H3 cells, we checked the level of signaling molecules. PBR-BuOH reduced the phosphorylated Fyn, Gab2, PI3K, Syk and ERK1/2 kinase protein expression. In addition, we checked the anti-allergic effect of PBR-BuOH on passive cutaneous anaphylaxis (PCA) murine model using Evans blue dye and hematoxylin and eosin (H&E) staining. PBR-BuOH suppressed the extravasation of Evans blue dye in mice with PCA symptoms. The histological analysis also indicated that PBR-BuOH significantly decreased the ear swelling and the infiltration of the immune cells in IgE/Ag-sensitized PCA mice, compared with non-treated control group (p < 0.001 vs. IgE/Ag-stimulated control group). These findings suggest that PBR-BuOH might act as an effective anti-allergic functional food, health supplement or drug.
Chapter 2. Immunostimulatory effect of Cordyceps militaris fermented with Pediococcus pentosaceus SC11 isolated from salted small octopus (GRC-SC11) in cyclophosphamide-induced immune-suppressed mice.
Cordyceps militaris grown on germinated Rhychosia nulubilis (GRC) is reported to have many biological compounds for upregulating immune activities. In this study, we investigated the immune stimulatory activity of GRC fermented with lactic acid bacteria using cyclophosphamide (CY)-treated immunosuppressed mice model. Among lactic acid bacteria, GRC fermented with Pediococcus pentosaceus SC11 isolated from salted small octopus (GRC-SC11) induced the highest production of nitric oxide. The cordycepin and β-glucan of GRC-SC11 was increased significantly compared to that of unfermented GRC. The NO production of primary peritoneal macrphages from CY-treate mice was significantly increased by GRC-SC11 (p < 0.05). In addtion, the phagocytic activity in primary peritoneal macrophages from CY-treated mice measured by uptake of IgG-opsonized fluorescent particles was also stimulated compared to the GRC-treated group. Furthermore, GRC-SC11 increased the primary splenocyte cell proliferation and immune organ weight in CY-treated immunosuppressed mice. The level of interferon (IFN)-γ mRNA expression was significantly increased by GRC-SC11 in RAW264.7 macrophages (p < 0.05 vs. GRC), but the level of tumor necrosis factor (TNF)-α mRNA expression was slightly increased. These results indicated that GRC-SC11 had immune stimulatory activity and could be used as potential immune stimulation functional food, agent, or supplement for immune suppressed patients or children.Chapter 1. Anti-allergic activity of Phellinus linteus grown on germinated brown rice (PBR) in IgE/antigen stimulated RBL-2H3 cells and in mice with passive cutaneous anaphylaxis (PCA) reaction.
Phellinus linteus (PL) has been used as traditional herbal medicine, owing to immune regulatory activates including anti-allergic activity. Anti-allergic activity of Phellinus linteus grown on germinated brown rice (PBR) butanol fraction (PBR-BuOH) was examined using in vitro and in vivo Immunoglobulin E/Antigen (IgE/Ag)-induced allergic models. The release of β-hexosaminidase was evaluated in IgE/Ag-induced RBL2H3 cells. PBR BuOH inhibited IgE/Ag-induced degranulation in RBL2H3 cells (p < 0.01 vs. IgE/Ag-stimulated control). The anti-allergic effect of PBR-BuOH was checked using Reverse transcriptase chain reaction (RT-PCR) and immunoblotting analysis. The level of tumor necrosis factor (TNF)-α mRNA expression was significantly decreased by PBR-BuOH in IgE/Ag-induced RBL2H3 cells in dose-dependent manner (p < 0.05 vs. IgE/Ag control), but the level of Interleukin (IL)-4 mRNA expression was slightly decreased. Furthermore, FcεRI α- and β- chain mRNA expression was significantly decreased by PBR-BuOH in IgE/Ag-induced RBL2H3 cells in dose-dependent manner (p < 0.05 vs. IgE/Ag-stimualted control) To elucidate the anti-allergic mechanism of PBR-BuOH in RBL2H3 cells, we checked the level of signaling molecules. PBR-BuOH reduced the phosphorylated Fyn, Gab2, PI3K, Syk and ERK1/2 kinase protein expression. In addition, we checked the anti-allergic effect of PBR-BuOH on passive cutaneous anaphylaxis (PCA) murine model using Evans blue dye and hematoxylin and eosin (H&E) staining. PBR-BuOH suppressed the extravasation of Evans blue dye in mice with PCA symptoms. The histological analysis also indicated that PBR-BuOH significantly decreased the ear swelling and the infiltration of the immune cells in IgE/Ag-sensitized PCA mice, compared with non-treated control group (p < 0.001 vs. IgE/Ag-stimulated control group). These findings suggest that PBR-BuOH might act as an effective anti-allergic functional food, health supplement or drug.
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