선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 이와 같이 병원성 대장균은 설사질환의 대표적 원인균임에도 불구하고 국내의 병 - 의원에서는 대장균성 설사질환에 대하여 가볍게 취급하고 있는 것이 현 실정이다, 따라서 본 연구에서는 대장균성 설사에 관한 기초 역학자료의 일환으로 병원을 찾는 설사환자로부터 대장균을 분리하고 분리주에 대한 생화학적 특성' 혈청학적 분포, 독소 생산성 및 항생제 내성양상 등의 특성을 알아보고자 하였다.
제안 방법
- 이들 분리균주를 Edward와 Ewing의 방법 [2] 에 따라 Kligker iron agar (KIA, Difco) 사면배지에 접종하고 37℃, 하룻밤 배양하여 lactose 및 glucose 양성, H2S를 생산하지 않는 균주를 API 20E strip (bioMErieux)으로 동정하였다. 또한 E. coli 0157을 분 리하기 위하여 모든 분리균주를 MacConkey sorbito] agar (Difco)에 도말하고 37℃, 하룻밤 배양한 다음 sorbitol을 분해하지 않는 집락에 대하여 항혈청으로 screening 하였다,
- coli 분리주의 verotoxin에 대한 세포독성 시험은 Karmali 등[13]의 방법에 따라 분리균의 배양여액을 단층 배양한 Vero cells에 접종하고 37℃, 5% CO2 조건으로 3일 간 배양하면서 매일 cytopathic effects (CPE)를 현미경으로 관찰하였다. 배양 3일 후 세포를 50% 사멸 (CD50) 시키는 시료의 가장 높은 희석배수를 end point로하여 verotoxin 활성의 정도를 결정하였다. Cg의 판정은 Mary 등［14］의 방법에 따라 실시하였다,
- 본 실험에 사용한 병원성 대장균의 혈청형은 Table 1과 같다. 병원성 대장균 O 항혈청 (Denka Seiki Co, )을 이용하여 slide 응집반응으로 실시하였다. 분리균을 tryptic soy agar에 2회이상 활성화시킨 후 자란 S형 집락을 항원으로 이용하여 먼저 다가혈청과 응집반응을 실시하고 이어서 응 집된 다가혈청에 포함되는 단일 O혈청 각각과 응집반응을 실시하였다.
- 병원성 대장균 O 항혈청 (Denka Seiki Co, )을 이용하여 slide 응집반응으로 실시하였다. 분리균을 tryptic soy agar에 2회이상 활성화시킨 후 자란 S형 집락을 항원으로 이용하여 먼저 다가혈청과 응집반응을 실시하고 이어서 응 집된 다가혈청에 포함되는 단일 O혈청 각각과 응집반응을 실시하였다. 응집유무의 판정은 육안으로 분명하게 확인 되는 응집이 30초 이내에 일어나는 경우를 양성으로 판정 하고, 응집이 일어나지 않거나 늦게 일어나는 응집은 음성으로 판정하였다.
- 분리균을 tryptic soy agar에 2회이상 활성화시킨 후 자란 S형 집락을 항원으로 이용하여 먼저 다가혈청과 응집반응을 실시하고 이어서 응 집된 다가혈청에 포함되는 단일 O혈청 각각과 응집반응을 실시하였다. 응집유무의 판정은 육안으로 분명하게 확인 되는 응집이 30초 이내에 일어나는 경우를 양성으로 판정 하고, 응집이 일어나지 않거나 늦게 일어나는 응집은 음성으로 판정하였다.
- 환자의 분변을 MacConkey agar (Difco)에 직접 도말하고, 37℃에서 18-24시간 배양한 후 lactose를 분해한 집락을 하나 이상 선택하여 그람 염색을 실시하고, IMViC 시험 즉, indole 시험 양성, methyl red 시험 양성, Voges-Proskauer 시험 음성 및 citrate 이용능 시험에서 음성을 나타내는 분리균주를 E. coli라고 잠정 동정하였다. 이들 분리균주를 Edward와 Ewing의 방법 [2] 에 따라 Kligker iron agar (KIA, Difco) 사면배지에 접종하고 37℃, 하룻밤 배양하여 lactose 및 glucose 양성, H2S를 생산하지 않는 균주를 API 20E strip (bioMErieux)으로 동정하였다.
대상 데이터
- 1998년 1월부터 12월까지 설사증으로 지정병원(동아대 학병원, 고신의료원)에 내원한 환자 1, 239명의 분변을 공시 재료로 하였다.
- Verotoxin 독성시험을 위한 세포주는 수의과학 검역원 으로부터 분양받은 Vero cells (African green monkey kidney cells)을 사용하였고, 5% 우태아혈청과 100 U/㎖의 gentamicin 및 100 U/㎖의 penicillin 이 첨가된 minimal essential medium (MEM; Sigma)에 계대배양하면서 공시 하였다.
이론/모형
- 배양 3일 후 세포를 50% 사멸 (CD50) 시키는 시료의 가장 높은 희석배수를 end point로하여 verotoxin 활성의 정도를 결정하였다. Cg의 판정은 Mary 등［14］의 방법에 따라 실시하였다,
- E. coli 분리주의 verotoxin에 대한 세포독성 시험은 Karmali 등[13]의 방법에 따라 분리균의 배양여액을 단층 배양한 Vero cells에 접종하고 37℃, 5% CO2 조건으로 3일 간 배양하면서 매일 cytopathic effects (CPE)를 현미경으로 관찰하였다. 배양 3일 후 세포를 50% 사멸 (CD50) 시키는 시료의 가장 높은 희석배수를 end point로하여 verotoxin 활성의 정도를 결정하였다.
- 분리된 대장균의 약제감수성 시험은 Steers 등[15]의 방법에 따라 한천평판희석법을 사용하였다. 약제 감수성 시험의 기초배지로는 Mueller Hinton medium (Difco) 을 사용하였으며, 감수성 시험에 사용한 약제의 농도는 NCCLS [16]의 기준에 따랐으며, 종류는 Table 2와 같다.
- 분리된 대장균의 약제감수성 시험은 Steers 등[15]의 방법에 따라 한천평판희석법을 사용하였다. 약제 감수성 시험의 기초배지로는 Mueller Hinton medium (Difco) 을 사용하였으며, 감수성 시험에 사용한 약제의 농도는 NCCLS [16]의 기준에 따랐으며, 종류는 Table 2와 같다.
- coli라고 잠정 동정하였다. 이들 분리균주를 Edward와 Ewing의 방법 [2] 에 따라 Kligker iron agar (KIA, Difco) 사면배지에 접종하고 37℃, 하룻밤 배양하여 lactose 및 glucose 양성, H2S를 생산하지 않는 균주를 API 20E strip (bioMErieux)으로 동정하였다. 또한 E.
성능/효과
- 1. 부산시 관내의 설사환자 1, 239명의 분변으로부터 대장균을 문리한 결과 1, 239명중 621명의 환자분변으로부터 721주의 대장균을 분리 동정하였다,
- 2. 설사 환자의 월별 발생 분포는 8월에 131명으로 가장 높은 발생율을 나타낸 반면, 1월에 59명으로 가장 낮은 발생율을 보였다. 그러나 1월에 발생한 설사환자를 제외하고는 계절에 크게 관계없이 연중 지속적으로 고른 발생 분포를 나타내었다.
- 3. 혈첨형별 분포는 혈청형 044가 121주(16.8%)로서 가장 높은 분포도를 나타내었으며, 0153 (8.6%), 01(7.5%),0166(5.7%), 08과 086a(각각 47%), 0125(4.6%) 등의 순으로 높은 분포율을 나타내었다.
- 4. 분리된 721주의 대장균에 대하여 Vero cells을 이용한 생물학적인 verotoxin 생산능을 조사해 본 결과 36주(30%)의 대장균 배양 상충액이 단층배양된 Vero cells에 세포변성효과를 나타내어verotoxin 생산성이 의심되었다. Vero cells에 세포변성효과를 나타내는 균주 대부분의 혈청형은 병원성 대장균의 EHEC (enterohemorrhagic Escherichia coli) 군에 속하는 01, 06, 018, 0125, 0153이었으며, 이들 중 혈청형 018에 속하는 분리균이 8주로서 가장 많았다.
- 5. 항균제 내성시험 결과 amikacin에는 분리균 모두 감수성을 나타내었으며, colistin, erythromycin, penicillin G 등에는 분리균 모두 내성을 나타내었다. 공시약제에 대한 분리주의 내성유형은 14제 내성형(261%), 13제 내성형(22.
- 분리된 대장균 721주의 혈청형별 분포 및 분리균의 verotoxin 생산능을 조사한 결과는 Table 4와 같다. Farmer 와 Kelly [8]의 병원성 대장균의 분류에 따라 분리주를 분류한 결과, 721주중 499 (69.2%)주가 21종의 병원성 대장균으로 형별되었으며, 나머지 222주(30.8%)는 본 실험에서 사용한 43종의 병원성 대장균 항혈청으로 분류되지 않았다. 혈청형별 분포는 혈청형 044가 121주(16.
- 분리된 721주의 대장균에 대하여 Vero cells을 이용한 생물학적인 verotoxin 생산능을 조사해 본 결과 36주(30%)의 대장균 배양 상충액이 단층배양된 Vero cells에 세포변성효과를 나타내어verotoxin 생산성이 의심되었다. Vero cells에 세포변성효과를 나타내는 균주 대부분의 혈청형은 병원성 대장균의 EHEC (enterohemorrhagic Escherichia coli) 군에 속하는 01, 06, 018, 0125, 0153이었으며, 이들 중 혈청형 018에 속하는 분리균이 8주로서 가장 많았다.
- 0%)의 대장균 배양 상층액이 단층배양된 Vero cells에 세포변성 효과를 나타내었으며, 세포독성의 정도는 W2 CD50/nie 이상으로 나타나 이들 균주의 verotoxin 생산성이 의심되었다. Vero cells에 세포변성효과를 나타내는 균주 대부분의 혈청형은 병원성 대장균의 EHEC (enterohemorrhagic Escherichia coli) 군에 속하는 01, 06, 018, 0125, 0153이었으며, 이들 중 혈청형에 속하는 분리균이 8주로서 가장 많았다. 또한 공시된 항흴청에 분류되지 않은 균주중 12주가 Vero cells에 세포변성효과를 나타내어 이들 균주의 verotoxin 생산성에 대한 연구가 필요할 것으로 사료된다.
- 항균제 내성시험 결과 amikacin에는 분리균 모두 감수성을 나타내었으며, colistin, erythromycin, penicillin G 등에는 분리균 모두 내성을 나타내었다. 공시약제에 대한 분리주의 내성유형은 14제 내성형(261%), 13제 내성형(22.3%), 12제 내성형(17.3%), H제 내성형(14.8%), 10제 내 성형(8.5%), 9제 내성형(6.0%) 등의 순으로 높은 분포를 보였으며, 본 실험에 공시된 16종의 항생제에 대한 설사환자 유래 대장균의 내성유형은 총 125종류로 분류되었다. 특히 Am Cb Cl Co Cp Em Gm Mx Nb Pg St Tb Tc Tm의 14 제 내성형이 전체 분리균주의 24.
- 공시약제에 대한 분리주의 내성유형은 모든 균주가 최소 5종류 이상의 약제에 대하여, 최고 14종류의 약제에 대하여 내성을 나타내는 다양한 다제 내성형을 나타내었으며, 14제 내성형 (26.1%), 13제 내성형 (22.3%), 12제 내성형(17.3%), 11제 내성형 (14, 8%), 10제 내성형 (8.5%), 9제 내성형 (6.0%) 등의 순으로 높은 분포를 보였다. 특히 4종류의 14제 내성형 중 Am Cb Cl Co Cp Em Gm Mx Nb Pg St Tb Tc Tm의 내성형이 전체 분리균주의 24.
- 2와 같이 1세 이하의 유아와 10세 이하의 어린이가 633명으로 전체 설사환자의 50% 이상을 나타내어 어린이들의 설사증 예방을 위한 많은 노력이 이루어져야 할 것으로 사료된다. 또한 50대의 경우 123명, 40대의 경우 114명, 60대의 경우 99명, 30대의 경우 79명, 10대의 경우 74명, 20대의 경우 63명의 순으로 높은 발생율을 나타내었으며 70세 이상의 노인들은 54명으로 가장 낮은 발생율을 보였다.
- 본 연구에서 다제 내성형의 종류는 14제 내성이 4종류, 13제 내성이 15종류, 12제 내성형이 20종류, H제 내성형이 32종류, 10제 내성형이 25종류, 9제 내성형이 16종류, 8제 내성형이 7종류로 분류되었으며, 7제 내성형과 6제 내성형 및 5제 내성형은 각각 2종류로 나타나 본 실험에 공시된 16종의 항생제에 대한 설사환자 유래 대장균의 내성유형은 총 125종류로 분류되었다.
- 부산시 관내의 지정병원 2곳에 설사질환으로 내원한 환자 1, 239명의 분변으로부터 대장균을 분리한 결과, 대상환 자 총 1, 239명중 621명의 환자분변으로부터 721주의 대장 균을 분리하였으며, 대장균 0157은 분리되지 않았다. 이와 같이 설사환자 총 1, 239명 중 621명의 환자에서만 대장균 이 분리되어졌다는 사실은 최소한 병원을 찾는 설사환자의 절반정도가 병원성 대장균 이외의 다른 원인에 의한 설사증이라는 것을 추측해 볼 수 있다.
- 분리된 721주의 대장균에 대하여 Vero cells을 이용한 생 물학적인 verotoxin 생산능을 조사해 본 결과 36주(5.0%)의 대장균 배양 상층액이 단층배양된 Vero cells에 세포변성 효과를 나타내었으며, 세포독성의 정도는 W2 CD50/nie 이상으로 나타나 이들 균주의 verotoxin 생산성이 의심되었다. Vero cells에 세포변성효과를 나타내는 균주 대부분의 혈청형은 병원성 대장균의 EHEC (enterohemorrhagic Escherichia coli) 군에 속하는 01, 06, 018, 0125, 0153이었으며, 이들 중 혈청형에 속하는 분리균이 8주로서 가장 많았다.
- 그러나 1월에 발생한 설사환자를 제외하고는 계절에 크게 관계없이 연중 지속적으로 고른 발생 분포를 나타내었다. 연령별 발생분포는 1세 이하의 유아와 10 세 이하의 어린이가 633명으로 전채 설사환자의 50% 이상을 나타내었고, 50대의 경우 123명, 40대의 경우 114명, 60 대의 경우 99명, 30대의 경우 79명, 10대의 경우 74명, 20대의 경우 63명의 순으로 높은 발생율을 나타내었으며 70세 이상의 노인들은 R명으로 가장 낮은 발생율을 보였다.
- 0%) 등의 순으로 높은 분포를 보였다. 특히 4종류의 14제 내성형 중 Am Cb Cl Co Cp Em Gm Mx Nb Pg St Tb Tc Tm의 내성형이 전체 분리균주의 24.3%로 가장 높은 내성유형을 나타내어 설사환자에서 분리되는 대장균의 항균제에 대한 내성이 만연되어 있다는 것을 알 수 있다. 이러한 항균제에 대한 내성은 항균제의 오용이나 남용이 가장 큰 문제로 사료되는 바, 이에 대한 적극적인 대처 방안이 강구되어야 할 것으로 생각된다.
- 항균제 내성시험 결과 Ak에는 분리균 모두 감수성을 나타내어 설 등[17]이 각종 병원성 검체로부터 분리한 대장 균의 항균제 감수성 성적과 동일하였고, Ak, Pb 및 Cl을 제외한 13종의 항균제에 대하여 분리균의 50% 이상이 내성을 나타내었으며 특히 Co, Em, Pg 등에는 721주의 분리 균 모두 내성을 나타내어 항균제에 대한 병원성 대장균의 내성 정도가 심각하다는 것을 알 수 있다. 또한 “종의 공 시약제에 대한 분리균의 최소발육억제농도 (MIC)를 검정 한 결과 Am, Cb, Em, Mx, Pg 등의 약제에 대하여 분리균의 80% 이상이 100㎍/㎖ 이상의 높은 농도에서 MIC에 포함될 것으로 예측되어 치료약제로서의 이용성이 재고되어 야 할 것으로 나타났다 (결과미제시)-
후속연구
- Vero cells에 세포변성효과를 나타내는 균주 대부분의 혈청형은 병원성 대장균의 EHEC (enterohemorrhagic Escherichia coli) 군에 속하는 01, 06, 018, 0125, 0153이었으며, 이들 중 혈청형에 속하는 분리균이 8주로서 가장 많았다. 또한 공시된 항흴청에 분류되지 않은 균주중 12주가 Vero cells에 세포변성효과를 나타내어 이들 균주의 verotoxin 생산성에 대한 연구가 필요할 것으로 사료된다.
- 설사환자의 연령별 발생분포는 Fig. 2와 같이 1세 이하의 유아와 10세 이하의 어린이가 633명으로 전체 설사환자의 50% 이상을 나타내어 어린이들의 설사증 예방을 위한 많은 노력이 이루어져야 할 것으로 사료된다. 또한 50대의 경우 123명, 40대의 경우 114명, 60대의 경우 99명, 30대의 경우 79명, 10대의 경우 74명, 20대의 경우 63명의 순으로 높은 발생율을 나타내었으며 70세 이상의 노인들은 54명으로 가장 낮은 발생율을 보였다.
- 이리한 점에서 본 연구의 결과는 항균제의 오용이나 남용에 경각심을 줄 수 있는 홍보자료로서 뿐만아니라, 병원성 대장균에 의한 설사한자의 치료시에 항균제 선택의 유용한 자료가 될 수 있을 것으로 사료된다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.