We investigated the cytotoxic effects of roots and seeds Daucus carota L. on HepG2, HeLa, MCF7, SW626, C6 and NB41A3 cell lines by the MTT assay. Among extracts, the ethylacetate partition layer (DCMEA) of root of Daucus carota L. showed the strongest cytotoxic effects on HepG2, HeLa, C6 and NB41A3 ...
We investigated the cytotoxic effects of roots and seeds Daucus carota L. on HepG2, HeLa, MCF7, SW626, C6 and NB41A3 cell lines by the MTT assay. Among extracts, the ethylacetate partition layer (DCMEA) of root of Daucus carota L. showed the strongest cytotoxic effects on HepG2, HeLa, C6 and NB41A3 cell lines. On the other hand, methanol(DCM), n-ethylacetate(DCMEA) and n-butanol(DCMB) extract of the seeds of Daucus carota L. also showed significant cytotoxic activities for all six cell lines. $\beta$-carotene, a well-known main component of Daucus carota L. was also tested for its cytotoxic effect. However, in all six cell lines, $\beta$-carotene falied to show significant cytotoxicity. Therefore, the anticancer effect of DCMEA of root fo Daucus carota L. and DCM, DCMH, DCMEA and DCMB extracts of seeds may be caused by components other than $\beta$-carotene. Futher studies are under way to isolate the compounds responsible for the significant cytotoxic activity.
We investigated the cytotoxic effects of roots and seeds Daucus carota L. on HepG2, HeLa, MCF7, SW626, C6 and NB41A3 cell lines by the MTT assay. Among extracts, the ethylacetate partition layer (DCMEA) of root of Daucus carota L. showed the strongest cytotoxic effects on HepG2, HeLa, C6 and NB41A3 cell lines. On the other hand, methanol(DCM), n-ethylacetate(DCMEA) and n-butanol(DCMB) extract of the seeds of Daucus carota L. also showed significant cytotoxic activities for all six cell lines. $\beta$-carotene, a well-known main component of Daucus carota L. was also tested for its cytotoxic effect. However, in all six cell lines, $\beta$-carotene falied to show significant cytotoxicity. Therefore, the anticancer effect of DCMEA of root fo Daucus carota L. and DCM, DCMH, DCMEA and DCMB extracts of seeds may be caused by components other than $\beta$-carotene. Futher studies are under way to isolate the compounds responsible for the significant cytotoxic activity.
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문제 정의
으로 인류의 질병을치료하는새로운 지식이 전게되고있으며 나아가 분석적인 서양식 검색 방법이 접목되어 천연물로부터 새로운 항맘 및 암 예방 활성 물질 창출의 가능성이 높을 것으로 생각되고 있다. 본 연구는 우리 식 생활 주변에서 손쉽게 구할 수 있고 애용되고 있는 식품인 당근 싱분 중 생리활성 물질을 규명하고자 인체 암세포에 대한 세포독성 효과 즉, 항암성 여부를 알아보고자 본 연구를 시도하게 되었다. '
제안 방법
시료로 사용한 당근 CDaucuscarotaa L.) 뿌리와 씨 앗은 흐르는 물에 깨끗이 씻고, 일정한 크기로 자른 후 그늘에서 건王시킨 후 분쇄하여 -30"C의 냉돔고에 보관하있다 건圣된 시료 중 뿌리 ①CR)는 220 g에 methanol 1.5 L를넣고 추출하였으며, 당근 씨앗(DCS)의 경우 975 g에 metli- anol L5L를 가해 각각 3회씩 추출하여 회전식 진공 농축기로 농축한 후 동결건조하여 각 mathanol 추출물로 사용하였으며, methanol 추출물은 다시 n-hexane, ethy]- acetate, butanol 및 물가용무로 각 과징을 거쳐 분배 후취하고, 각 분可층은 농축하여 건조 시 킨 뒤 분말로 만들어 사용하였다.
였고, 각각의 시료는 DMSO에 녹여 100, 200, 300. 400 및 500 μg/well의 농도로 첨가하여 场시간 동안 다시 배양하였다 이 매양액예 MTT용액을 각각 100 虬씩 첨가하여 4시간 동안 매양 시킨 후, well 바닥에 형싱된 formazaii이 흩어지지 않게 조심스럽게 다루어 aspiraEr로 상등到을 제기하였다. 형성된 formazan 에 DMSO4 EtOII을 1 : 1로 혼합한 용可 1 mL씩 을 첨 가히.
비 교화기 위해 딩. 근으로부터 추출한 p-cai-otenceSig- ma사에서 구입하여 뽄 실험 추출물의 세포독성효과와 비교 측정하였다.Fig.
in 1佬广。세포독성에 관한 연구에서 사용되어온 dye exclusion Lest나 [3HJ-thymidine uptake assay와 비교 시 실험 조작이 매우 간편하고 재현성이 우수하여 세포 독성 여부 대량검색이나 초기 검색단계에 적담한 방빕으로 많이 이용되고 있다(14) 그러므로 본 연구에서는 각 세포주를 ixlOeEis/mL 되게 세포 수를 조정하여 24 well plale°l| 1 mL씩 분주하고, 羽시간 동안 배양(37℃, 5% CO2) 흔! 후 무처리 구인 control군에는 dimethylsiilfoxidefDM- SQ)로 독성 실험믈 히.였고, 각각의 시료는 DMSO에 녹여 100, 200, 300.
형성된 formazan 에 DMSO4 EtOII을 1 : 1로 혼합한 용可 1 mL씩 을 첨 가히. 여 충분히 녹인 lJV-specti_ophotomcter(PhannaciEi Biotech 8Q-2105 也)를 이욤화여 570 mn에서 흡광도 값을 측정하여 제 현싱 여부를 검 토한 후 첨 가 시료의 맘 세포주에 대한 세포독성 여부를 비교 분석하였다
)의 브A리오】- 씨앗은 98년에 수확한 것으로서 뿌리는 양산 임기 당근 밭에서, 씨앗은 동부한농 종묘에서 고입하였다. 이 시료들을 추출, 분획하여 가 암세포 주에 의한 에세포독성효고]-(cytotoxicity) 에 사용하였다. 추가 비교 실험을 통헤 당근으로부터 추출한 0-carotene을 Sigma사(St.
대상 데이터
당근 뿌리 (DaucLis carota L., DCR)를 음건 후 이 건소된 당근 220 g을 melhanE로 추출하여 추출물 74 97 g을 얻었다. 이 methanol 추출물(DCRM)을 n-hexane, etlivl- acetate 닟 butanol의 각 용매 별 계 톰 분획 에 의하여 분매하여 n-hexane분배층(DCRMH)은 2 85 g, ethylacetate 분베총①GRMEA)은 2.
본 실험에 사용한 딩근(Etocus carota L.)의 브A리오】- 씨앗은 98년에 수확한 것으로서 뿌리는 양산 임기 당근 밭에서, 씨앗은 동부한농 종묘에서 고입하였다. 이 시료들을 추출, 분획하여 가 암세포 주에 의한 에세포독성효고]-(cytotoxicity) 에 사용하였다.
본 연구에 사용한 암세포 주는 인체 간암세포인 HepG2 (human hepatocellular carcinonia), 유방암시포인 MCF7 (humanbreast adenocarcinoma pleual effusion), 난소암세포인 SW626(hQman ovary adenocarcinoma), 자궁경부임'세포인 HeLa(human cennese adenocarcinoma), 신경교종 세포인 C6(m°usc glioma) 및 신경 아세포■인 NB 41A3(mouse neuroblast)로서, 1999넌 3월 대전 소지] 한국과 학기 술원 생명 공학연구소로부터 분양받아 37℃, 5 % CO2 incubalor에서 刘먕하여 사용하였다.
이 시료들을 추출, 분획하여 가 암세포 주에 의한 에세포독성효고]-(cytotoxicity) 에 사용하였다. 추가 비교 실험을 통헤 당근으로부터 추출한 0-carotene을 Sigma사(St. Louis, USA)로 부터 구입하여 실험에 사용하였다.
성능/효과
100 Hg/mL. 200 μg/mL, 300 Ug/mL, 400 Ug/mL 및 500 蛇/mL씩 점차 증가시키면서 세포주에 첨가한 결과 당근 뿌리 (DCR)추출물에서 는 DCRMEA에서 가장 높은 세포듁싱효과를 나타내었고, 당근 씨앗(DCS) 추출물에서는 DCSMA을 제외한 DCSM, DCSMH, DCSMEA 및 DCSMB애 서 거의 비 슷하기 99.5%의 아주 높은 암시] 포 저해효과를 나타내었다
근으로부터 추출한 p-cai-otenceSig- ma사에서 구입하여 뽄 실험 추출물의 세포독성효과와 비교 측정하였다.Fig. 14에서 보듯이 본 실험에 사용했던 6종으] 암세王予인 HepG2, I-IcLa, MCF7, SW626, C6 및 NB 41 A3에 본 실험의 최종 농도인 500 pg/mL씩 -carotene음 첨가하였을 때 HepG2세포주에서는 304%의 세포독성효과를 보였으며, HeLa세포주에서는 8.5%. MCF 7세 포주에서는 23.
MTT assay를 통한 세포독성 효과 측정 걸 괴-, 당근 뿌리와 씨앗의 methanol 추춘룰과 각용미] 분내층의 첨가물의 농도가 증가함에 따라 사용흔} 6종의 암세포주에 대한 세 포독성 효과가 비볘 적으로 증가하였다. 특히 당근 뿌리추출액의 ethyiacelate층에서는 다른 용매츰과는 뚜렷이 구변-되므로써 6종류의 인제 맘세至주에 대해 높은 세포독섬 효과를 보였으며, 당근 씨앗에서는 실험에 사용한 6종의 암세포주에서 추출분의 농도가 50。μg/mL일 때 모두 DCSMA를 제외한 DCSM, DCSMH, DCSMEA 및 DC- SMB에서 공통적으로 99% 이상의 높은 세포 독성 효과를 보였다.
암세포주에서 추출분의 농도가 50。μg/mL일 때 모두 DCSMA를 제외한 DCSM, DCSMH, DCSMEA 및 DC- SMB에서 공통적으로 99% 이상의 높은 세포 독성 효과를 보였다. 본 실힘결 과와 비교하기 위해 당근으로부터 추출한 P-carotenci- 구입하고 동일한 조건 하에서 6종의 암세포주에 첨가하였을 때 본실험 결과에서 나타난 세포독성효과에 비해 그 효과는 아주 미약하였다.
6-Carotene의 경우 당근 추출물과 분배층을 사용한 몬 실험 결과에서 나타난 세포독성 효과와 비교헤 보았을 때. 당근 중 대표적 활성 물실로서는 이제까지 널리 알려진 provitamin A인 0-carotene이 아닌 디른 물질도 암세포 독성에 대한 활성효과가 있음을 본 실험을 통헤 유추할 수 있었다. 더우기 지용성 인 P- carotcnee benzene, chloroform 및 hexane 등 유기 용내에 만 녹는 지용성 물질로서, 당근 뿌리추출성분에서 볼 것과 같이 극성과 비극성 물질을 모두 추출해 내는 ethyl- acelatc층에서 아주 강한 세포독성효과를 보였으며 본 걸과이] 따르면, ethylacctate 층에 암세포포 생리활성 물질이 있는 것으로 생각되어진다.
1%, DCRMEA가 488%의 암세포 사멸효과를 보여 앞서 HepG2와 HcLh세포주의 세포독성효과 결과에 비해서는 아주 미으¥하였다. 또 당근 씨앗 추출물에서는 HepG2와 HcLa의 결과와 거의 비슷하여 DCSMA를 제외한 나머지 4개의 용미] 층에서는 95% 이상의 암세포 사멸 효과를 보였다.
8에 나타난 당근 뿌리를 첨가한 경우 DCRMEA의 농도를 100, 200, 300 gg/iiiL 가했올 메 MCF7 세 포주 결과와 비슷하게 세포독성 효과가 미 약하였 으나 500 Pg/mL 첨가시 약 64% 효과를 나타내었다. 또 당근 씨앗에서 는 DCSM, DCSMI-I 및 DCSMEA의 경우 각각 99%, 99 5% 및 98 6%의 세포독성효과를 보여 HepG2, HeLa 및 MCF7의 결과와 二L 효과가 거의 비슷하였으나, DCSAffi 의 경우는 HepGZ오】. HeLa 및 MCF7세포주에 비해서 약 80%로 二l 효과가 王금 미약하였다,
더우기 지용성 인 P- carotcnee benzene, chloroform 및 hexane 등 유기 용내에 만 녹는 지용성 물질로서, 당근 뿌리추출성분에서 볼 것과 같이 극성과 비극성 물질을 모두 추출해 내는 ethyl- acelatc층에서 아주 강한 세포독성효과를 보였으며 본 걸과이] 따르면, ethylacctate 층에 암세포포 생리활성 물질이 있는 것으로 생각되어진다. 또 당근 씨앗의 겅우에서도 극성과 비극성 용매에서 추출하고 분讯]되는 methanol, erlijdacetate, butanol 및 hexane층에서 아주 높은 시]포독성 효과를 나타내었으므로 본 실험 결과에서 보여준 각 추출물과 분배층에 새로운 세포독성효과를 가진 물질이 있음을 본 변구를 통헤 확인할 수 있었다
본 실힘결 과와 비교하기 위해 당근으로부터 추출한 P-carotenci- 구입하고 동일한 조건 하에서 6종의 암세포주에 첨가하였을 때 본실험 결과에서 나타난 세포독성효과에 비해 그 효과는 아주 미약하였다. 또한 간암 세포주인 HepG2룔 헌미경으로 관찰한 결과 각첨가물의 농도가 증가할수록 암세포의 수가 저하-되었고. 세포들의 부착능력이 없어 지민서 증식이 감소되었음을 육안으로 확인할 수 있었다
특히 당근 뿌리추출액의 ethyiacelate층에서는 다른 용매츰과는 뚜렷이 구변-되므로써 6종류의 인제 맘세至주에 대해 높은 세포독섬 효과를 보였으며, 당근 씨앗에서는 실험에 사용한 6종의 암세포주에서 추출분의 농도가 50。μg/mL일 때 모두 DCSMA를 제외한 DCSM, DCSMH, DCSMEA 및 DC- SMB에서 공통적으로 99% 이상의 높은 세포 독성 효과를 보였다. 본 실힘결 과와 비교하기 위해 당근으로부터 추출한 P-carotenci- 구입하고 동일한 조건 하에서 6종의 암세포주에 첨가하였을 때 본실험 결과에서 나타난 세포독성효과에 비해 그 효과는 아주 미약하였다. 또한 간암 세포주인 HepG2룔 헌미경으로 관찰한 결과 각첨가물의 농도가 증가할수록 암세포의 수가 저하-되었고.
15에서 보듯이 세포에 첨가물의 농도가 증가할수록 암세포의 그 수가 저하되었고. 세포의 부착 능력이 없어지먼서 암세포의 증식이 감소되었음을 확인할 수 있었다
또 당근 씨앗(DCS)에서는 HepGZ세포주와 같이 HeLa세포주에서도 물분배층을 .제외한 나머지 4개의 분배층 DCSM, DCSMH, DCSMEA 및 DGSMB에서 높은 암세포 사멸효과를 보였다.
C6오]- NI匏:LA3에 대한 당근 平리 의 DCRMEA 첨 가시 HcpG2, HeLa 및 SW626세 至주들에서와 같은 감한 독성효과를 나타내 있다. 즉 C6 와 NB4LA3의 두 세포주 모두 DCRMEA 첨 가시 99.7%의 세포 사멸효과를 보였으며 당근 씨앗에서는 두 세포주 모두 HcpG2, HeLa, MCF7 및 SW626의 세포독성 효과에서와 같이 DCSMA# 제외한 4개 총에서 아주 뫂은 암세포사멸 효과를 보였다. Fig.
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