유지방구로부터 분리 정제한 lipase의 활성과 안정성에 미치는 pH의 영향을 야자유와 균질유를 기질로 하여 조사하였다. 효소원으로 buttermilk를 사용하였을 경우는 반응온도 $37^{\circ}C$에서 야자유, 균질유 모두 pH 9.5에서 최대 활성을 나타내었으며, 전형적인 종형의 pH의 존곡선을 나타내었다. 그러나 반응온도 $0^{\circ}C$에서는 pH 10.0까지 활성이 증가하였다. 정제 lipase를 사용한 경우는 반응응도 $37^{\circ}C$에서 균질유를 기질로 사용하였을 때 종 모양의 곡선을 나타내었으며, 최대 활성은 pH 9.0에서 나타났다. 반응온도 $0^{\circ}C$에서는 pH 10.0까지 활성이 계속 증가하였다. BSA를 첨가한 야자유를 기질로 사용한 경우는 반응온도 $37^{\circ}C$, $0^{\circ}C$ 모두 최대 활성이 pH 9.5에 나타났으며, pH 10.0에서는 활성이 현저하게 저하하였다. 정제 lipase의 안정성에 미치는 pH의 증가에 따라 현저하게 저하하였다. pH 10.0에서 $37^{\circ}C$로 20분간 효소를 유지하였을 경우 lipase의 활성은 pH 8.5 때의 활성에 비하여 13%로 감소하였다. 그러나, $4^{\circ}C$에서 60분간 효소를 유지하였을 경우는 lipase 활성이 pH 7.5∼10.0의 범위에서 안정하였다.
유지방구로부터 분리 정제한 lipase의 활성과 안정성에 미치는 pH의 영향을 야자유와 균질유를 기질로 하여 조사하였다. 효소원으로 buttermilk를 사용하였을 경우는 반응온도 $37^{\circ}C$에서 야자유, 균질유 모두 pH 9.5에서 최대 활성을 나타내었으며, 전형적인 종형의 pH의 존곡선을 나타내었다. 그러나 반응온도 $0^{\circ}C$에서는 pH 10.0까지 활성이 증가하였다. 정제 lipase를 사용한 경우는 반응응도 $37^{\circ}C$에서 균질유를 기질로 사용하였을 때 종 모양의 곡선을 나타내었으며, 최대 활성은 pH 9.0에서 나타났다. 반응온도 $0^{\circ}C$에서는 pH 10.0까지 활성이 계속 증가하였다. BSA를 첨가한 야자유를 기질로 사용한 경우는 반응온도 $37^{\circ}C$, $0^{\circ}C$ 모두 최대 활성이 pH 9.5에 나타났으며, pH 10.0에서는 활성이 현저하게 저하하였다. 정제 lipase의 안정성에 미치는 pH의 증가에 따라 현저하게 저하하였다. pH 10.0에서 $37^{\circ}C$로 20분간 효소를 유지하였을 경우 lipase의 활성은 pH 8.5 때의 활성에 비하여 13%로 감소하였다. 그러나, $4^{\circ}C$에서 60분간 효소를 유지하였을 경우는 lipase 활성이 pH 7.5∼10.0의 범위에서 안정하였다.
Effects of Ph on the activity of lipase isolated from milk fat globules were investigated, using coconut oil and homogenized milk as substrate. With buttermilk as an enzyme source for coconut oil and homogenized milk substrates bell-shaped curve was observed at $37^{\circ}C$, having the h...
Effects of Ph on the activity of lipase isolated from milk fat globules were investigated, using coconut oil and homogenized milk as substrate. With buttermilk as an enzyme source for coconut oil and homogenized milk substrates bell-shaped curve was observed at $37^{\circ}C$, having the highest activity at pH 9.5. However, lipase activity at $0^{\circ}C$ continuously increased up to pH 10.0. With the purified lipase for homogenized milk substrate, the bell -shaped curve and the highest activity were observed at $37^{\circ}C$ and pH 9.0, respectively. Lipase activity at $0^{\circ}C$ increased up to pH 10.0. The addition of bovine serum albumin to the coconut oil shifted the optimum pH to pH 9.5 and the activity remarkably declined at pH 10.0. The effect of pH on the stability of purified lipase was depending on the temperature. Wehn the lipase kept at $37^{\circ}C$ for 20 minutes, it's activity remarkably declined as pH increased: the activity at pH 10.0 was declined by 13% of that pH 8.5. However, when the lipase kept at $4^{\circ}C$ for 60minutes, the activity was stable within the range of pH 7.5 to 10.0.
Effects of Ph on the activity of lipase isolated from milk fat globules were investigated, using coconut oil and homogenized milk as substrate. With buttermilk as an enzyme source for coconut oil and homogenized milk substrates bell-shaped curve was observed at $37^{\circ}C$, having the highest activity at pH 9.5. However, lipase activity at $0^{\circ}C$ continuously increased up to pH 10.0. With the purified lipase for homogenized milk substrate, the bell -shaped curve and the highest activity were observed at $37^{\circ}C$ and pH 9.0, respectively. Lipase activity at $0^{\circ}C$ increased up to pH 10.0. The addition of bovine serum albumin to the coconut oil shifted the optimum pH to pH 9.5 and the activity remarkably declined at pH 10.0. The effect of pH on the stability of purified lipase was depending on the temperature. Wehn the lipase kept at $37^{\circ}C$ for 20 minutes, it's activity remarkably declined as pH increased: the activity at pH 10.0 was declined by 13% of that pH 8.5. However, when the lipase kept at $4^{\circ}C$ for 60minutes, the activity was stable within the range of pH 7.5 to 10.0.
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문제 정의
본 연구는 원유의 저온저장중 발생하는 자연 발생적 지방분해에 관련이 있는 유지방구 유래 lipase의 활성과 안정성에 미치는 pH의 영향에 대하여 검토하였다.
제안 방법
기질의 조제에 사용한 pH 6.0~10.0의 각 완 충액을 각각 0.05M로 희석한 후 정제 lipase (0.006 mg/ml) 를 첨가하여 37℃ 에서 20분, 4℃에서 60분간 정치한 후 lipase활성을 측정하였다.
0)을 사용하여 기질 유화액과 동량 혼합한 것을 기질로 사용하였다. 시판의 균질화유를 사용할 경우에는 IN HC1 또는 IN NaOH를 사용하여 pH를 조정하였다. 야자유를 기질로 사용할 경우는 지방산 수용체로서 bovineserum albumin (BSA)을 각 완충액에 용해 (1% w/v) 하여 제조하였다.
유지방구로부터 분리 정제한 lipase의 활성 과 안정성에 미치는 pH의 영향을 야자유와 균질유를 기질로 하여 조사하였다. 효소원으로 buttermilk를 사용하였을 경우는 반응온도 37℃에서 야자유, 균질유 모두 pH 9.
정제 lipase의 안정성에 미치는 pH의 영향을알아보기 위하여 pH 7.5~ 10.0의 완충액에 lipase를 첨가하여 각 반응온도에서 일정시간 유지한 후 lipase활성을 측정하였다(Table 1). 37℃에서 20분간 유지시켰을 경우 활성 (pH 8.
조효소(버터밀크)를 사용하였을 때 lipase활성에 미치는 pH의 영향을 유지방(Fig. 1)과 야자유(Fig. 2)를 기질로 하여 조사하였다. 반응온도 37℃에서는 두 가지 기질 모두에서 pH 9.
대상 데이터
야자유를 기질로 사용할 경우, 유화 안정제로 arabic gum (Wako社)을 사용하여 金 등(1))의 방법에 따라 유화하였다. Tris-maleate acid 완충액 (0.3M, pH 6.0-7.0), Tris-HCl 완충액 (0.3M, pH 7.5~ 8.5), 그리고 glycine-NaOH 완충액 (0.3M, pH9.0~ 10.0)을 사용하여 기질 유화액과 동량 혼합한 것을 기질로 사용하였다. 시판의 균질화유를 사용할 경우에는 IN HC1 또는 IN NaOH를 사용하여 pH를 조정하였다.
기질은 야자유와 시판의 균질화유(시유: 유지방 3.6 %)를 사용하였다. 야자유를 기질로 사용할 경우, 유화 안정제로 arabic gum (Wako社)을 사용하여 金 등(1))의 방법에 따라 유화하였다.
정제 lipase는 金의 방법에 따라 크림에대하여 순도 3,126배로 분리 정제된 효소를 사용하였으며, 조효소는 lipase 정제에 사용한 버터밀크를 증류수에 투석한 다음 사용하였다.
효소액은 정제 lipase와 조효소를 사용하였다. 정제 lipase는 金의 방법에 따라 크림에대하여 순도 3,126배로 분리 정제된 효소를 사용하였으며, 조효소는 lipase 정제에 사용한 버터밀크를 증류수에 투석한 다음 사용하였다.
이론/모형
5ml를 첨가하여 2분간 교반하였다. 2시간이상 정치 후 상징액 중의 유리지방산 함량은 phenol-red 법'(2)에 의하여 측정하였다. 유리지 방산 함량은 palmitic acid를 표준용액으로 측정하여 시료 1ml에 함유되어 있는 palmitic acid의 양으로 환산하여 mM로 나타내었다.
6 %)를 사용하였다. 야자유를 기질로 사용할 경우, 유화 안정제로 arabic gum (Wako社)을 사용하여 金 등(1))의 방법에 따라 유화하였다. Tris-maleate acid 완충액 (0.
성능/효과
야자유를 기질로 사용하였을 경우는 (Fig. 4) , 반응온도 37℃, 0℃ 모두 pH 9.5에서 최대활성을 나타내었으며, pH 10.0에서 현저하게활성이 저하하였다.
Lipase의 안정성을 검토한 결과(Table 1) 4℃ 에서 처리하였을 때 lipase는 높은 pH에서도 안정하였으며, 최적온도(37℃)에서 처리한 lipase는 불안, 정한 결과를 나타내었다. 이와 같이 저온에 유지했던 lipase가 안정한 것은 반응온도 0℃ 에서 pH의 증가와 함께 활성이 증가한 결과의 원인 중 하나로 생각된다.
유지방구로부터 분리 정제한 lipase의 활성 과 안정성에 미치는 pH의 영향을 야자유와 균질유를 기질로 하여 조사하였다. 효소원으로 buttermilk를 사용하였을 경우는 반응온도 37℃에서 야자유, 균질유 모두 pH 9.5에서 최대 활 성을 나타내었으며, 전형적인 종형의 pH의존 곡선을 나타내었다. 그러나 반응온도 0℃에서는 pH 10.
후속연구
따라서 측정조건이 상이한각 연구자들의 연구결과를 단순 비교하는 것은문제가 있다고 하겠다. 또한 원유의 저온 저장중 발생하는 지방분해의 메카니즘을 구명하기 위해서는 저온에서의 lipase특성에 대하여 보다 많은 연구가 이루어져야 할 것으로 생각된다
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