[논문]비브리오 속의 단백질 분해능에 관한 연구

양지영; 한종흔; 이재우; 김수광; 차재호

비브리오 속의 단백질 분해능에 관한 연구
Study on the Proteolytic Activities of Pathogenic Vibrio sp. 원문보기

V. parahaemolyticus 종류들이 gelatin분해 확인 실험에서 큰 clear zone을 형성했고, V. alginolyticus 분리균주도 V. parahaemolyticus와 비슷한 clear zone을 형성했다. V. fluvialis KCTC 2473은 clear zone을 형성하지 못했다. Hemolytic activity측정 실험에서는 V. parahaemolyticus 분리균주(2)가 가장 활성이 크게 나타났고, V. parahaemolyticus ATCC 17802, V. parahaemolyticus 분리균주(1)과 V. mimicus ATCC 33653도 높은 활성을 나타냈으며, 나머지 다른 비브리오균은 활성이 나타나지 않았다. Azocasein분해 활성 실험에서는 V. parahaemolyticus ATCC 17802, 분리균주(1), 분리균주(2)는 200EU/m1전후로 활성이 높게 나타났고, 나머지는 110EU/ml전후로 활성이 상대적으로 낮게 나타났다.

Nine strains of pathogenic Vibrio sp. of clinical and environmental origin were examined for the degradation of gelatin, casein and hemolysin which is important to the virulence of this bacterium. Culture filtrates of all nine strains of Vibrio exhibited proteolytic activities. Especially, four strains of V. parahaemolyticus and one V. alginolyticus showed strong gelatin-degrading activity. In terms of hemolytic activity, three V. parahaemolyticus and V. mimicus showed strong $\beta$-hemolysis whereas those of strains of V. alginolyticus, V. fluvialis, V. vulnificus examined lacked this activity.

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문제 정의

따라서 본 연구에서는 미리 확보된 여러 가지의 비브리오균들 중 gelatin분해능, hemolytic activity, azocasein 분해 활성실험을 통해 그 양상을 조사하고자 하였다.

제안 방법

기확보된 균주에 대하여 단백질 분해능을 조사하기 위하여 gelatin 분해능, hemolytic activity, azocasein 분해 확인실험 등을 통해 높은 효소활성을 보이는 9개 균주를 비 교, 실험하였다.
02 M Tris-HCl 완충액에 azocasein을 1%되게 녹여 기 질용액을 조제한 후, 기질용액 480 에 효소액 120}니을 첨가하여 3bC에서 30분 동안 반응시켰다. 여기에 10% Trichloroacetic acid 600 pl을 가하여 반응을 정지시키고, 30분 동안 정치시킨 후 15,000 rpm에서 10분 동안 원심분 리하여 침전물을 제거시키고 얻은 상등액 800μ1에, 1.8N NaOH 200μ1를 첨가해 중화시킨 후 420nm에서 흡광도를 관찰하는 한편, blank tesl를 하여 본 실험과 420 nm에서의 흡광도의 차로써 활성을 측정하였다. 효소활성의 limit는 30 ℃에서 30분 동안 반응 후 420nm에서 흡광도가 0.

대상 데이터

본 연구에 사용한 tryptic soy agar는 Difco사의 제품을 사용하였으며, azocaseine Sigma사의 제품을 사용하였다. 그외 시약들은 1급이상의 것들을 사용하였다.
시험 균주로서는 부산대학교 미생물학과에 보존되어 있는V vulnificus ATCC 27562, V fluvialis KCTC 2473, V fumissii 분리 균주, V mimicus ATCC 33653, V parahaemolyticus 04와 부경대학교 식품공학과에 보존되여 V parahaemolyticus ATCC 17802, V parahaemolyticus 분 리균주(1), V parahaemolyticus 분리균주 (2), V alginolyticus분리균주를 사용하였다.
2와 같았다. 조사된 9종의 Vibrio속 균 주 중에서 4종의 V parahaemolyticuse- V para- Fig. 1. Proteolytic activity of Vibrio sp.

성능/효과

배양액으로부터 azocasein분해활성을 측정한 결과는 Table 1과 같았다. 조사된 9종 모두에서 azocaein분해활성이 검출 되었으며 106.6에서 210.1 EU/ml의 활성을 보여주고 있었 으며, 그 중 U paramaemolyticus 분리균주(2)가 210 EU/ ml, V paramaemolyticus ATCC 17802가 203.0 EU/ml로다른 균주에 비해 높은 활성을 보여 주었다.
1과 같았다. 조사된 9종의 Vibrio 속 균주 중에서 4종의 V pamhaemolyticus와 V alginolyticus에서 활성이 크게 나타났으며 V mimicus와 V furnissii에서도 중간정도의 활성을 보여주었고 V vulnificus 에서는 미약한 활성을 보여주었다. 조사된 9종의 Vibrio속 에서 유일하게 μ 乂印诂瓜에서만이 활성을 나타내지 않았다.
조사된 9종의 Vibrio 속 균주 중에서 4종의 V pamhaemolyticus와 V alginolyticus에서 활성이 크게 나타났으며 V mimicus와 V furnissii에서도 중간정도의 활성을 보여주었고 V vulnificus 에서는 미약한 활성을 보여주었다. 조사된 9종의 Vibrio속 에서 유일하게 μ 乂印诂瓜에서만이 활성을 나타내지 않았다.
이상과 같이 gelatirr분해능, 용혈능 그리고 azocasein 분 해능에 대한 병원성 비브리오균들의 특성을 Table 2에 나타내었다. 조사된 9종의 비브리오균들이 용혈능에서는 각각의 균마다 활성생산에 차이를 보여주었으며 단백질원으로서 gelatin 이나 azocasein을 분해하는 특성은 대부분 보여 주는 것으로 조사되었다.

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