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문제 정의
- 따라서 본 연구에서는 생약재 중 각종 생리활성이 알려진 유백피의 항산화 효과를 검토하기 위하여 각종 용매로 추출한 유백피 추출물을 유지에 첨가하여 항산화 활성을 비교하고, 항산화 활성이 우수한 추출물을 용매별로 분획하여 항산화 활성과 기질 특이성을 측정하였다. 또한 생체내에서도 유백피의 항산화 효과를 살펴보기 위하여 흰쥐의 간 microsome을 사용하여 유도된 지질 과산화 반응에 대한 억제 효과를 측정하였다.
제안 방법
- Ethyl acetate 분획물의 효소적 지질 과산화 억제활성은 Fe'"-ADP/NADPH system내에서 측정하였다. 즉 50mM Tris-HQ (pH 7.
- 또한 생체내에서도 유백피의 항산화 효과를 살펴보기 위하여 흰쥐의 간 microsome을 사용하여 유도된 지질 과산화 반응에 대한 억제 효과를 측정하였다.
- 05%(w/w)씩 첨가하고 60℃에서 12일간 저장하면서 3일 간격으로 과산화물가{peroxide value)를 AOCS법 (18)에 따라 측정하였다. 또한 항산화제로 널리 알려진 a-tocopherol 과 BHA 는 0.01%(w/w) 씩 첨가하여 비교 측정하였다.
- 5 mL를 가한 후 3, 000 rpm으로 10분간 원심분리 하였다. 상징액 1 mL를 0.67% thiobaibituric acid(TBA) ImL와 혼합하고 끓는 물 속에서 20분간 가열하여 발색시킨 후 실온으로 냉각시켜 532 nm에서 흡광도를 측정하여 다음과 같은 식에 의하여 지질 과산화 억제율을 측정하였다.
- 시중에서 쉽게 구할 수 있고 지방산 조성이 다른 유지, 즉 lard, soybean oil, palm oil 및 com oil을 기질로 하여 유백피 물추출물로부터 분획한 ethyl acetate 분획물을 0.05%(w/w)가 되도록 첨가하고 김 등(17)의 방법에 따라 유탁액을 제조하여 60℃에서 저장하면서 과산화물가의 변화를 측정하였다.
- 위의 실험에서 항산화력을 가진 물추출물의 수율은 9.5%이었으며 이를 hexane, chloroform, buthanol 및 ethyl acetate 등의 극성을 달리하는 용매를 사용하여 분획후 동결건조하여 유백피 추출물의 항산화 측정방법과 동일한 방법으로 용매 분획별 과산화물가의 변화를 측정하였다.
- 유백피 물추출물로부터 분획한 ethyl acetate 분획물의 농도별 항산화 효과를 측정하기 위하여 0.03~0.10%(w/w)가되도록 김 등(17)의 방법에 따라 lard emulsion에 첨가하여 60℃에서 저장하면서 과산화물가의 변화를 측정하였다.
- Fe'"-ADP/NADPH system내에서 측정하였다. 즉 50mM Tris-HQ (pH 7.5) 1.6 mL에 시료용액 0.1 mL, 6주령의 Sprague-Dawley계 횐쥐 수컷으로부터 적출한 간 microsome 분획 0.1 mL, 80 μM FeCb 0.1 mL, 0.4 mM ADP 0.1 mL 및 0.4 mM NADPH 0.1 mL를 가하여 반응액을 조제하였다.
대상 데이터
- 정제하였고, 기타 식용유지류는 시판품을 구입하여 사용하였다. 또한 실험에 사용한 흰쥐의 간 microsome은 체중이 180~200 g인 6주령의 Sprague Dawley계 흰쥐 수컷을 사용하였다.
- 본 실험에 사용한 유백피는 대전 중앙시장의 건재상에서 구입하여 15-20 mesh로 분쇄하여 건조한 상태로 보관하여 사용하였으며, 돈지는 신장부위의 지방을 60℃에서 추출 . 정제하였고, 기타 식용유지류는 시판품을 구입하여 사용하였다.
- 추출 . 정제하였고, 기타 식용유지류는 시판품을 구입하여 사용하였다. 또한 실험에 사용한 흰쥐의 간 microsome은 체중이 180~200 g인 6주령의 Sprague Dawley계 흰쥐 수컷을 사용하였다.
데이터처리
- 실험의 통계분석은 Statistical Analysis System(21)을 이용하여 Duncan's multiple range test로 분석하였다.
이론/모형
- Ethyl acetate 분획물의 비효소적 지질 과산화 억제 활성은 Osawa 등(19)의 방법에 따라 Fe*7ascorbate system 내에서 측정하였다. 즉 50 mM Tris-Ha(pH 7.
- 조제된 각 system의 반응액은 Esterbauer 등(20)의 방법에 따라 잘 혼합하여 37C에서 1시간 반응시키고 3 M trichloroacetic acid (TCA)와 2.5 N HCl의 혼합용액 (1:1, v/v) 0.5 mL를 가한 후 3, 000 rpm으로 10분간 원심분리 하였다. 상징액 1 mL를 0.
- 정도의 온도에서 완전히 감압건고하여 유백피 추출물 시료로 사용하였다. 항산화력의 측정은 김 등(17)의 방법에 따라 돈지 10 g, 증류수 9 g, Tween 80과 span 80(1:1, w/w) 용액 1g을 혼합하여 10, 000 rpm에서 5분간 homogenizer(Heidolph, Germany)로 균질화한 후기질용액으로 사용하였으며 유백피의 각 용매 추출물은 0.05%(w/w)씩 첨가하고 60℃에서 12일간 저장하면서 3일 간격으로 과산화물가{peroxide value)를 AOCS법 (18)에 따라 측정하였다. 또한 항산화제로 널리 알려진 a-tocopherol 과 BHA 는 0.
성능/효과
- 0 meq/kg으로 나타났다. 그러나 유백피의 용매 추출물 0.05%(w/w)를 lard emulsion에 첨가한 경우 과산화물의 생성을 억제하였고, 그 억제활성은 water>ethyl acetate>methanol>ethanol 추출물의 순으로 나타났다. 이때 Duncan's multiple range test의 결과, 유백피 용매 추출물 첨가군과 무첨가군의 과산화물가는 모든 저장기간에서 유의차가 인정되었다(P<0.
- 다른 분획에 비하여 비교적 항산화 효과가 높았던 ethyl acetate 분획물의 첨가량을 달리하여 lasd emulsion에 첨가한 후 60C에서 저장하면서 3일 간격으로 과산화물가를 측정한 결과는 Fig. 3과 같다 무첨가군의 경우, 저장기간이 증가함에 따라 빠른 속도로 산화가 일어났으나 dhyl acetate 분획물을 0.03% 이상 첨가한 경우에는 무첨가군과 유의적인 차이를 나타내었고(p<0.05), 분획물의 첨가농도가 증가할수록 산화가 억제되었다. 즉, 0.
- 03% 이상의 ethyl acetate 분획물을 첨가한 경우에는 caffeic acid 첨가군보다 유의적인 차이가 인정되어(p<Q05) 효과적임을 알 수 있었다. 따라서 유백피 물추출물의 ethyl acetate 분획물은 비효소적 반응계 인 Fe++/ascorbate system 과 효소적 반응계 인 Fe+++-ADP/NADPH system 모두에서 항산화 활성이 있음을 확인하였으며 효소적인 반응계에서보다 비효소적 반웅계에서의 저해율이 더 큰 것으로 나타났다. 최(26)는 생약재료에서 추출한 항산화 성분들은 유리 라디칼과 malonaldehyde 둥이 지니고 있는 활성성분 또는 활성분자들과 상호작용에 의해 지질 과산화를 억제하고 발암과정에 개입하는 유리 라디칼을 제거한다고 하여 본 실험에 사용한 유백피 물추출물로부터의 ethyl acetate 분획물내 생체내 지질 과산화를 억제할 수 있는 물질이 함유되어 있을 것으로 사료된다.
- 05). 또한 천연항산화제인 tocopherol에 비해 월등히 효과적이었다(p<0.05).
- 4와 같다. 무첨가군의 경우, 예상했던 대로 데 가지의 기질(lard, palm oil, soybean oil 및 com oil) 모두에서 산화가 급격히 일어났으며, 특히 동물성 유지의 산화가 가장 빠르게 진행되었다.
- 1과 같다. 비효소적 반응계인 Fe++/ascorbate system의 경우, 무첨가군에서 생성된 malonaldehyde의 양을 100%로 보았을 때 지질 과산화 억제물질로 알려진 caffeic acid 첨가 시 malonaldehyde의 양이 18.1%로 무첨가군에 비해 약 6배 가량 적은 것으로 나타나 예상대로 강한 억제율을 나타내었고, ethyl acetate 분획물을 첨가한 경우에도 강력한 억제율을 나타내었으며 무첨가군과는 유의적인 차이가 인정되었다(P<0.05). 특히 0.
- 식물성 유지인 palm oil, soybean oil 및 com oil을 기질로 하였을 경우, ethyl acetate 분획물의 항산화 효과는 합성항산화제보다 약간 더 효과적이었으나 유의적인 차이는 인정되지 않았으며 천연항산화제인 tocopherol 보다는 월등히 높은 항산화 효과를 나타내어 ethyl acetate 분획물은 식용유지를 비롯한 고지방질 식품에 천연항산화제로써 적용할 수 있을 것으로 사료된다.
- 3%로 강한 억제율을 나타내었다. 유백피 물추출물의 ethyl acetate 분획물을 첨가한 경우에도 강력한 억제율을 나타내었으며 무첨가군과는 유의적인 차이가 인정되었다 (p<0.05). 특히 0.
- 또한 분획물간에 과산화물 형성 억제는 저장 3일까지는 유의차가 인정되지 않았다(p>O05). 저장 6일 이후 과산화물 형성 억제능은 ethyl aoetate>chloroform>hexane> water>buthanol 순으로 나타났으며, 저장 12일에는 각각 무첨가군의 과산화물 생성에 비해 93.6, 92.5, 78.0, 74.2 및 51.6%의 과산화물 형성 억제율을 나타내었다. 특히 물추출물로부터 chloroform과 ethyl acetate 분획물첨가군은 합성항산화제인 BHA 첨가군의 억제능과 비교해 볼 때 유의차가 인정되지 않을 정도로 강력한 산화억제 효과를 나타내었다(p>0.
- 특히 유백피를 물로 추출하여 lard emulsion에 첨가한 경우에는 다른 추출물 첨가군보다 산화 억제효과가 현저함을 알 수 있었다. 즉 저장 12일 이후 과산화물가는 18.2 meq/kg으로 합성항산화제인 BHA와 유의적인 차이가 없었고 (p>0.05), tocopherol 첨가군과 다른 주출물 첨가군에 비해 억제활성이 높은 항산화 활성이 있음을 확인하였다 최등(22)은 홍삼 및 백삼의 용매추출별 항산화 효과 실험에서 용매의 극성이 클수록 추출물의 항산화 작용이 강하다고 하여 본 실험에서 사용한 유백피 추출물의 항산화 효과와 일치하는 경향이었다.
- 05). 특히 0.03% 이상의 ethyl acetate 분획물을 첨가한 경우에는 caffeic acid 첨가군보다 유의적인 차이가 인정되어(p<Q05) 효과적임을 알 수 있었다. 따라서 유백피 물추출물의 ethyl acetate 분획물은 비효소적 반응계 인 Fe++/ascorbate system 과 효소적 반응계 인 Fe+++-ADP/NADPH system 모두에서 항산화 활성이 있음을 확인하였으며 효소적인 반응계에서보다 비효소적 반웅계에서의 저해율이 더 큰 것으로 나타났다.
- 05). 특히 0.05% 이상의 ethyl acetate 분획물을 첨가한 경우에는 caffeic acid 첨가군보다 효과적인 것을 알 수 있었다.
- 6%의 과산화물 형성 억제율을 나타내었다. 특히 물추출물로부터 chloroform과 ethyl acetate 분획물첨가군은 합성항산화제인 BHA 첨가군의 억제능과 비교해 볼 때 유의차가 인정되지 않을 정도로 강력한 산화억제 효과를 나타내었다(p>0.05).
- 05). 특히 유백피를 물로 추출하여 lard emulsion에 첨가한 경우에는 다른 추출물 첨가군보다 산화 억제효과가 현저함을 알 수 있었다. 즉 저장 12일 이후 과산화물가는 18.
- 6%이었다. 특히, 0.05% 이상의 ethyl acetate 분획물을 첨가할 경우 합성항산화제인 BHA와 유의적인 차이가 없는 것으로 나타났으며 (p>0.05) 천연항산화제인 tocq)herol 첨가군보다는 강한 항산화 효과를 나타내었다
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