본 연구는 수은독성에 대한 스쿠알렌의 방어효과를 알아보기위해 ICR계 웅성마우스$(25\sim30g)$를 수은단독 투여군, 수은-스쿠알렌 투여군으로 구분하였다. 신장의 조직학적 변화 여부를 위해 $HgCl_2$ (4.0mg/kg)를 1회 구강투여하였다. 스쿠알렌(200mg/kg)은 12시간 간격으로 투여하여 다음과 같은 결론을 얻었다. 신장은 체내축적이 가장 높은 장기로 관찰됨에 따라 신장을 전자현미경을 통하여 관찰한 결과 수은단독 투여군의 경우 핵은 응축현상, 사립체는 기질안의 능선 소실과 팽창, 조면소포체는 리보솜의 탈락과 수조내강의 팽대가 관찰되었다. 스쿠알렌 동시투여군의 경우 48시간 후부터 크고 둥근모양의 핵, 기다란 형태의 정상적인 사립체, 그리고 리보솜이 부착된 정상적인 조면소포체가 관찰되었다. 이상의 실험결과 스쿠알렌이 주요조직에서 수은의 침착을 억제시키며, 수은에 의한 신장의 조직학적 손상을 감소시키는데 효과적인 것으로 사료된다.
본 연구는 수은독성에 대한 스쿠알렌의 방어효과를 알아보기위해 ICR계 웅성마우스$(25\sim30g)$를 수은단독 투여군, 수은-스쿠알렌 투여군으로 구분하였다. 신장의 조직학적 변화 여부를 위해 $HgCl_2$ (4.0mg/kg)를 1회 구강투여하였다. 스쿠알렌(200mg/kg)은 12시간 간격으로 투여하여 다음과 같은 결론을 얻었다. 신장은 체내축적이 가장 높은 장기로 관찰됨에 따라 신장을 전자현미경을 통하여 관찰한 결과 수은단독 투여군의 경우 핵은 응축현상, 사립체는 기질안의 능선 소실과 팽창, 조면소포체는 리보솜의 탈락과 수조내강의 팽대가 관찰되었다. 스쿠알렌 동시투여군의 경우 48시간 후부터 크고 둥근모양의 핵, 기다란 형태의 정상적인 사립체, 그리고 리보솜이 부착된 정상적인 조면소포체가 관찰되었다. 이상의 실험결과 스쿠알렌이 주요조직에서 수은의 침착을 억제시키며, 수은에 의한 신장의 조직학적 손상을 감소시키는데 효과적인 것으로 사료된다.
The mouse for identifying the histological changes of kidney were also divided into the two groups; treated with only $HgCl_2$ (4 mg/kg), the group treated with $HgCl_2$ and squalene (200 mg/kg). The $HgCl_2$ treated only one time at first day. The squalene treated t...
The mouse for identifying the histological changes of kidney were also divided into the two groups; treated with only $HgCl_2$ (4 mg/kg), the group treated with $HgCl_2$ and squalene (200 mg/kg). The $HgCl_2$ treated only one time at first day. The squalene treated two times a day (12 hours interval) for every day. Each groups were divided into the five groups; 6, 12, 24, 48 and 72 hours after treated $HgCl_2$ and squalene. Historical changes of the kidneys were investigated by electron microscope. The group with only $HgCl_2$ showed that the nuclear membrane was shrinked, the inner membrane (cristae) of the mitochondria were destructed, and ribosomes on the rough endoplasmic reticulum were lost. The group treated with $HgCl_2$ and Squalene showed that the nuclear membrane was more rounded, the cristae of the mitochondria were almost normal shape, and more ribosomes on the rough endoplasmic reticulum were attached. Therefore , we concluded that squalene has significantly protective effects in kidney to harmful $HgCl_2$.
The mouse for identifying the histological changes of kidney were also divided into the two groups; treated with only $HgCl_2$ (4 mg/kg), the group treated with $HgCl_2$ and squalene (200 mg/kg). The $HgCl_2$ treated only one time at first day. The squalene treated two times a day (12 hours interval) for every day. Each groups were divided into the five groups; 6, 12, 24, 48 and 72 hours after treated $HgCl_2$ and squalene. Historical changes of the kidneys were investigated by electron microscope. The group with only $HgCl_2$ showed that the nuclear membrane was shrinked, the inner membrane (cristae) of the mitochondria were destructed, and ribosomes on the rough endoplasmic reticulum were lost. The group treated with $HgCl_2$ and Squalene showed that the nuclear membrane was more rounded, the cristae of the mitochondria were almost normal shape, and more ribosomes on the rough endoplasmic reticulum were attached. Therefore , we concluded that squalene has significantly protective effects in kidney to harmful $HgCl_2$.
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문제 정의
위와 같은 연구 보고를 통해 본 연구에서는 흰쥐의 수은오염에 SQ가 해독작용이 있음을 관찰하기 위하여 주요 침착장기인 신장의 조직학적 변화를 전자현미경을 통해 SQ의 효과를 밝히고자 하였다.
제안 방법
실험군은 HgCh 단독투여군과 SQ-HgCb 동시투여군으로 구분하여 30마리씩 총 60마리를 사용하였다. HgCh 투여는 HgCb를 2차 증류수에 희석시켜 4.0 ㎎/㎏을 구강투여 하였다. SQ 투여는 하루 2회 12시간 간격으로 200 ㎎/㎏을 지속적으로 구강투여 하였다.
0 ㎎/㎏을 구강투여 하였다. SQ 투여는 하루 2회 12시간 간격으로 200 ㎎/㎏을 지속적으로 구강투여 하였다. 각 실험군은 6, 12, 24, 48, 72시간 간격으로 신장의 피질부위를 1 ㎣ 크기로 세절하여 2.
SQ 투여는 하루 2회 12시간 간격으로 200 ㎎/㎏을 지속적으로 구강투여 하였다. 각 실험군은 6, 12, 24, 48, 72시간 간격으로 신장의 피질부위를 1 ㎣ 크기로 세절하여 2.5% glutaraldehyde 용액 (pH 7.4, 0.1 M cacodylate 완충액 , 4℃)에서 2시간 전고정 하였고, 동일 완충액을 사용하여 15분씩 3회 수세하였다. 1 % Osmium tetroxide (OsOQ 용액 (pH 7.
1 M cacodylate 완충액 , 4℃)에서 2시간 전고정 하였고, 동일 완충액을 사용하여 15분씩 3회 수세하였다. 1 % Osmium tetroxide (OsOQ 용액 (pH 7.4, 0.1 M cacodylate 완충액, 4℃)으로 2시간 후고정한 후, 동일 완충액으로 15분씩 3회 수세하였다. 저농도의 ethano] (50%)로부터 60%, 70%, 80%, 90%, 95% ethanol 계 열하에서 각 10분씩 2회 탈수하고 100% ethanol로 20분씩 3회 탈수시 켰다.
1 M cacodylate 완충액, 4℃)으로 2시간 후고정한 후, 동일 완충액으로 15분씩 3회 수세하였다. 저농도의 ethano] (50%)로부터 60%, 70%, 80%, 90%, 95% ethanol 계 열하에서 각 10분씩 2회 탈수하고 100% ethanol로 20분씩 3회 탈수시 켰다. Propylene oxide를 사용하여 25분씩 3회 치환하였으며, Epon mixure를 만들어 Propylene oxide와 1:1,1 : 2로 3시간씩 침투시켰으며 Epon mixure 원액에서 overnight 후 oven에 넣어 37℃에서 12시간,45℃에서 12시간, 60℃에서 48시간 열중합하여 포매하였다.
저농도의 ethano] (50%)로부터 60%, 70%, 80%, 90%, 95% ethanol 계 열하에서 각 10분씩 2회 탈수하고 100% ethanol로 20분씩 3회 탈수시 켰다. Propylene oxide를 사용하여 25분씩 3회 치환하였으며, Epon mixure를 만들어 Propylene oxide와 1:1,1 : 2로 3시간씩 침투시켰으며 Epon mixure 원액에서 overnight 후 oven에 넣어 37℃에서 12시간,45℃에서 12시간, 60℃에서 48시간 열중합하여 포매하였다. Epon block 을 1 wn로 박절하여 1% Toluidine blue로 염색한 후, 광학현미경으로 관찰하여 특정부위를 정하고 삭정한뒤 Diatome을 부착시킨 Ultramicrotome (MT-7000)A 로 6 nm의 초박절편을 만들어 Uranyl acetate와 Lead citrate로 이중염 색하여 투과전자현미 경 (JEOL, JEM100CXII)으로 가속전압 80kV하에서 관찰하였다.
Propylene oxide를 사용하여 25분씩 3회 치환하였으며, Epon mixure를 만들어 Propylene oxide와 1:1,1 : 2로 3시간씩 침투시켰으며 Epon mixure 원액에서 overnight 후 oven에 넣어 37℃에서 12시간,45℃에서 12시간, 60℃에서 48시간 열중합하여 포매하였다. Epon block 을 1 wn로 박절하여 1% Toluidine blue로 염색한 후, 광학현미경으로 관찰하여 특정부위를 정하고 삭정한뒤 Diatome을 부착시킨 Ultramicrotome (MT-7000)A 로 6 nm의 초박절편을 만들어 Uranyl acetate와 Lead citrate로 이중염 색하여 투과전자현미 경 (JEOL, JEM100CXII)으로 가속전압 80kV하에서 관찰하였다.
대상 데이터
실험동물은 삼육실험동물센터 (8~ 10주령, 25~30 g)에서 분양받은 외관상 건강한 ICR계 웅성 마우스를 사용하였고, Polycarbonate cage (40 x 25 x 17 cm)에 담아 온도 23±2℃, 습도 50 ±5%에 환경 조건을 유지 시킨 실험실의 animal cage (HB-404AS, 명진기계)에서 먹이와 음용수를 무제한 공급하여 사육하였다.SQ 는 세모 (주)제품, 조직내 미세구조의 관찰을 위한 HgCb는 Sigma (U.
실험동물은 삼육실험동물센터 (8~ 10주령, 25~30 g)에서 분양받은 외관상 건강한 ICR계 웅성 마우스를 사용하였고, Polycarbonate cage (40 x 25 x 17 cm)에 담아 온도 23±2℃, 습도 50 ±5%에 환경 조건을 유지 시킨 실험실의 animal cage (HB-404AS, 명진기계)에서 먹이와 음용수를 무제한 공급하여 사육하였다.SQ 는 세모 (주)제품, 조직내 미세구조의 관찰을 위한 HgCb는 Sigma (U.S.A.)제품을 사용하였다.
실험군은 HgCh 단독투여군과 SQ-HgCb 동시투여군으로 구분하여 30마리씩 총 60마리를 사용하였다. HgCh 투여는 HgCb를 2차 증류수에 희석시켜 4.
성능/효과
핵은 6시간대부터 12시간대까지는 약간의 변형이 관찰되었고 48시간대부터는 둥근모양의 정상소견을나타냈다. 사립체는 6시간대에서는 기다란 사립체가기저막 주름과 나란히 배열된 정상적인 형태를 이루고 있었고 12시간대에서 팽창된 둥근모양의 사립체가 관찰되었고 24시간대부터 밀도가 높은 기질과립이 관찰되었다.48시간대부터는 거의 정상군과 유사한 형태인 기다란 모양의 사립체가 많이 관찰되었다.
(2000)의 보고와 약간의 시간적 인 차이가 있으나 비슷한 결과를 보고하였다. 반면에 SQ 동시투여군에서는 핵은 48시간대에서 부터는 정상적인 형태인 크고 둥근핵 이 관찰되었고, 사립체도 48시간대부터 정상적인 형태인 기다란 모양으로 관찰되었으며 세포질안에서도 다양한 막구성물과 리보솜이 부착된 조면소포체가 관찰되었다. 이와 같이 조직학적 변화가 감소된 것은 SQ가 조직내의 중금속을 제거하여 배설 하는 효과가 있거나,조직내의 농축을 처음부터 억제 하기 때문인 것으로 사료된다.
본 실험에서는 수은투여후 72시간대에 주름막의 팽대가 관찰되었고 SQ 동시 투여군의 경우 48시간대부터 손상된 세포기관들의 재생이 관찰되어, Soleset al. (1983)의 보고와는 수은단독투여군에서는 비슷한 결과였으나 SQ 동시 투여군에서는 세포기관들의 재생이 훨씬 빠르게 관찰되어 SQ의 처리가 소기관의 재생에 효과가 있었다.
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