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제안 방법
- Folate conjugase는 rat serum(Harlan Bioproducts For Science, Indianapolis, USA)을 이용하였다. Protease 용액에 서는 내인성 folate 함량이 탐지되지 않았으나 a-amylase 용액과 rat serum에는 내인성 folate가 함유되어 있어 이를 acid-washed charcoal로 처리 하여 제거 하였다. 즉, a-amy- lase와 rat serum 용액에 1/10 부피의 charcoal을 넣어 얼음 위 에서 60분간 교반한 후 여과기(0.
- 본 연구대상자의 총 엽산 섭취량에 대한 누적기여도 90% 이 내에 해당하는 식 품 58종과 이에 는 해 당되 지 않으나 식 품 100 g당 100 Jig 이상의 엽산을 함유한다고 알려진 고엽 산함 유식품 12종을 더해 70종 식품의 엽산 함량을 분석하였다. 각 식품의 엽산 함량을 100 g당 Rg으로 나타내었으며 또한 1회 섭 취 분량(serving size)당 Ug으로도 표시 하였다. 1회 섭 취 분량은 한국인 영 양권장량(3)에 나와있는 기 준을 사용하였다.
- 천연 식품의 경우는 구입 장소를 달리 하여 한 품목당 2건의 시료를 구입 하였고, 가공식품의 경우는 제조회 사나 상품명을 달리 하여 역시 2건 의 시료를 구입하였다. 구매한 당일 시료 식품들을 일정 비율 의 0.1 M 인산완충용액 (1% sodium ascorbate 함유, pH 6.3) 으로 균질화하여 소액 분주하였고, 분석 시까지 -20℃에 보 관하였다. 이들 시료의 엽산 함량 분석은 Tamura 등(8)이 제안한 trienzyme(«-amylase, protease, folate conjugase) treatment법으로 처리한 후 Lactobacillus casei(L.
- 한국인 영 양권장량 부록(3)과 농촌진흥청 에서 발간한 식 품성분표(6)의 자료를 기본으로 하여 영양평가 프로그램(CAN- PRO, 한국영 양정 보센터, 서 울)에 엽 산영 양가표를 구축하였다. 동 자료들에 엽 산 함량이 표시 되 지 않은 식 품은 미 국의 USDA 식품성분표와 Kim이 보고한 한국인 상용식품의 엽 산 함량 분석 치 (5-7)를 이용하였다. 동 자료들에도 분석 치 가 없는 경우는 유사한 식품의 엽 산 함량을 차용하였으며 각 식 품의 생 것, 마른 것 또는 삶은 것에 관한 자료가 없는 경우는 수분 함량을 고려하여 수치를 보정해 이용하였다.
- 동 자료들에 엽 산 함량이 표시 되 지 않은 식 품은 미 국의 USDA 식품성분표와 Kim이 보고한 한국인 상용식품의 엽 산 함량 분석 치 (5-7)를 이용하였다. 동 자료들에도 분석 치 가 없는 경우는 유사한 식품의 엽 산 함량을 차용하였으며 각 식 품의 생 것, 마른 것 또는 삶은 것에 관한 자료가 없는 경우는 수분 함량을 고려하여 수치를 보정해 이용하였다.
- 식품섭취상태 자료로부터 앞서 설명한대로 구축한 엽산 영 양가표에 의해 엽 산 섭 취 량을 구하였고, 총 엽 산 섭 취 량에 대한 각 식품별 기여도를 산출하였다. 또한 이들 식품을 한 국인 영양권장량 부록의 식품성분표 상에 구분된 것과 같이 18개 식품군으로 나누어 각 식품군별 엽산 공급량과 기여도 를 구했다.
- 미생물학적 방법을 이용한 엽산 분석 : 위와 같이 trienzyme 처리를 한 시료를 96-well microplate에 50 HL씩 넣어, 0.1 M 인산완충용액으로 단계적으로 희석한 뒤, L. azsei 용액을 접종하여 37℃에서 18시간 동안 배양하였다. 표준용액으로 는 열에 불안정하며 또한 phosphate buffer와 상호작용 가능성이 있는 folic acid 대신에(11) 안정 한 환원 형 인 folinic acid (5-HCO-H厂PteGlu Calcium Salt; F7878, Sigma Chemical Co.
- , USA)를 사용하였다(12, 13). 배양이 끝난 후 96-well mi- croplate 의 혼탁도를 microplate reader (EL 800, BioTek Instruments, Inc., USA)를 이용하여 홉광도를 측정 했으며 표준용액의 흡광도와 비교하여 엽산 농도를 산출하였다.
- 본 연구대상자의 총 엽산 섭취량에 대한 누적기여도 90% 이 내에 해당하는 식 품 58종과 이에 는 해 당되 지 않으나 식 품 100 g당 100 Jig 이상의 엽산을 함유한다고 알려진 고엽 산함 유식품 12종을 더해 70종 식품의 엽산 함량을 분석하였다. 각 식품의 엽산 함량을 100 g당 Rg으로 나타내었으며 또한 1회 섭 취 분량(serving size)당 Ug으로도 표시 하였다.
- 식품섭취상태 자료로부터 앞서 설명한대로 구축한 엽산 영 양가표에 의해 엽 산 섭 취 량을 구하였고, 총 엽 산 섭 취 량에 대한 각 식품별 기여도를 산출하였다. 또한 이들 식품을 한 국인 영양권장량 부록의 식품성분표 상에 구분된 것과 같이 18개 식품군으로 나누어 각 식품군별 엽산 공급량과 기여도 를 구했다.
- 연구대상자의 일반사항은 질문지를 통한 직접 면접법으로 조사하였다. 식 품섭 취 상태 는 연구대 상자에 게 저 울 사용법 과 기록법을 교육하여 하루동안 섭취한 식품을 스스로 칭량하여 기록하게 하였다.
- 상동 연구에서는 채소류와 과실류를 포함한 266종의 상 용식품들을 Lactobacillus casei를 이용하여 미생물학적인 방법으로 분석하였다. 이 연구에서는 결합형으로 존재하는 엽 산을 유리 하기 위해 folate conjugase로 시료를 처리 했고, 산화되기 쉬운 엽산을 보호하기 위해 시료에 비타민 C를 첨가했다. 그런데 최근의한 연구(8)는 식품내 엽산이 단백 질이나 탄수화물 등과 얽혀있으므로 folate conjugase(EC3.
- 9명으로 두번째로 높았다. 이에 근거해 주요 출산 연령 범위인 25~34세를 중심으로 하여 연구대상자를 A군 (15~24세 ), B군(25~34세 ) 및 C군(35~49세 으로 구분하였다. 각 연령군별 대상자는 각각 17명, 37명 및 37명이었다.
- 이후 이들 세가지 효소를 이용하여 모유를 비롯한 여러 식품의 엽산 함량이 유의 하게 증가했다는 보고가 많았 다(9, 10). 이에 본 연구에서는 가임기 여성의 엽산 섭취에 기여한 주요 엽산급원식품을 조사하였고, 위의 세가지 효소 를 처리 하여 이들 식 품의 엽 산 함량을 미 생 물학적 인 방법 으 로 분석하였다.
- 식 품섭 취 상태 는 연구대 상자에 게 저 울 사용법 과 기록법을 교육하여 하루동안 섭취한 식품을 스스로 칭량하여 기록하게 하였다. 주말과 특별한 날을 제외한 주 중의 하루 를 선택하도록 하여 평상시의 식품섭취상태를 반영하도록 하였다.
- Protease 용액에 서는 내인성 folate 함량이 탐지되지 않았으나 a-amylase 용액과 rat serum에는 내인성 folate가 함유되어 있어 이를 acid-washed charcoal로 처리 하여 제거 하였다. 즉, a-amy- lase와 rat serum 용액에 1/10 부피의 charcoal을 넣어 얼음 위 에서 60분간 교반한 후 여과기(0.22 mm, Coming Glass Works, Coming, NY, USA)를 이용해 여과-멸균하였다. Alphaamylase 용액도 사용 직전에 동일한 방법으로 여과-멸균하였다.
- 한국인 영 양권장량 부록(3)과 농촌진흥청 에서 발간한 식 품성분표(6)의 자료를 기본으로 하여 영양평가 프로그램(CAN- PRO, 한국영 양정 보센터, 서 울)에 엽 산영 양가표를 구축하였다. 동 자료들에 엽 산 함량이 표시 되 지 않은 식 품은 미 국의 USDA 식품성분표와 Kim이 보고한 한국인 상용식품의 엽 산 함량 분석 치 (5-7)를 이용하였다.
대상 데이터
- Louis, USA)를 탈염증류수에 용해시켜 각각 100 mg/mL와 20 mg/mL 농도로 조제하여 사용하였 匸+. Folate conjugase는 rat serum(Harlan Bioproducts For Science, Indianapolis, USA)을 이용하였다. Protease 용액에 서는 내인성 folate 함량이 탐지되지 않았으나 a-amylase 용액과 rat serum에는 내인성 folate가 함유되어 있어 이를 acid-washed charcoal로 처리 하여 제거 하였다.
- 이에 근거해 주요 출산 연령 범위인 25~34세를 중심으로 하여 연구대상자를 A군 (15~24세 ), B군(25~34세 ) 및 C군(35~49세 으로 구분하였다. 각 연령군별 대상자는 각각 17명, 37명 및 37명이었다.
- 분석시료 구입 : 식품 시료의 구입은 광주시내의 재래시 장, 백화점 및 슈퍼마켓을 이용하였다. 천연 식품의 경우는 구입 장소를 달리 하여 한 품목당 2건의 시료를 구입 하였고, 가공식품의 경우는 제조회 사나 상품명을 달리 하여 역시 2건 의 시료를 구입하였다.
- 연구대상자는 1998년 6월 24일부터 11월 1일까지 광주광 역시에 거주하는비임신.비수유상태에 있는 15~49세 가임 기 여성 91명이었다.
- 분석시료 구입 : 식품 시료의 구입은 광주시내의 재래시 장, 백화점 및 슈퍼마켓을 이용하였다. 천연 식품의 경우는 구입 장소를 달리 하여 한 품목당 2건의 시료를 구입 하였고, 가공식품의 경우는 제조회 사나 상품명을 달리 하여 역시 2건 의 시료를 구입하였다. 구매한 당일 시료 식품들을 일정 비율 의 0.
- azsei 용액을 접종하여 37℃에서 18시간 동안 배양하였다. 표준용액으로 는 열에 불안정하며 또한 phosphate buffer와 상호작용 가능성이 있는 folic acid 대신에(11) 안정 한 환원 형 인 folinic acid (5-HCO-H厂PteGlu Calcium Salt; F7878, Sigma Chemical Co., USA)를 사용하였다(12, 13). 배양이 끝난 후 96-well mi- croplate 의 혼탁도를 microplate reader (EL 800, BioTek Instruments, Inc.
데이터처리
- 2)Values with different alphabets within the row are significantly different by Duncan's multiple range test at p<0.05.
- 2JValues with different alphabets within row are significantly different by Duncan's multiple range test at p<0.05.
이론/모형
- 3) 으로 균질화하여 소액 분주하였고, 분석 시까지 -20℃에 보 관하였다. 이들 시료의 엽산 함량 분석은 Tamura 등(8)이 제안한 trienzyme(«-amylase, protease, folate conjugase) treatment법으로 처리한 후 Lactobacillus casei(L. casei', ATCC 7469)를 이용한 미 생물학적인 방법 (11)으로 분석하였다. 구체적인 실험방법은 다음과 같았다.
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