선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 본 연구에서 는 임 신 중기 산모의 혈중 호모시 스테인과 엽산수준이 태아환경인 태반 세포에서의 DNA 메틸화에 미치는 영향울 전향적으로 평가하였다. 항산화제인 엽산의 혈중 농도가 낮아질수록 호모시스테인 농도는 증가하였으며, 호모시스테인의 농도가 증가할수록 태반세포 DNA 저 메틸화가 일어남울 확인하였다.
- 본 연구에서는 임신 24.28주 산모의 엽산과 호모시스테인 농도에 따른 태반세포 DNA 메 틸화를 MTFHR 677 유전다형성 군울 고려 하여 평 가하였다.
- 본 연구자의 이전연구에서 엽산의 결펍과 호모시스테인의 상승은 제태 기간과 출생 체중 감소에 영향울 미치는 것울 살펴보았으며 [24], 이러한 임신기간 중의 엽산 부족과 부정적 인 출생결과 사이 에 DNA 저메틸화가 관여할 것으로 생각할 수 있다. 산모에서의 DNA 메틸화에 대한 연구는 아직 이루어지지 않았으나 동물모델울 통해 자궁태반혈류의 불균형 이 DNA 메틸화와 연관이 되어 있음울 관찰한 연구[25]가있으며 이로 인한 DNA 저 메틸화는 출생 후 간 유전자 발현에 영향울 주어 대사관련 질환에 지속적으로 영향울 줄 것이라는 문제제기도 있다 [26], 따라서 본 연구에서는 임신기간 중의 혈중 엽산과 호모시 스테인 농도가 태 아생존의 환경인 태반에서의 DNA 메틸화에 미치는 영향울 살펴 보고자 하였다.
- 이러한 결과는 모체의 혈중 엽산과 호모시스테인 수준이 태반세포DNA 메틸화에 영향울 주며 이에 특정 유전자의 다형성이 상호작용함울 제시 하여 준다. 향후 산모룰 대상으로 엽산과 식이요인에 대한 지속적인 중재와관리가필요할 것으로 생각되며 이에 대한 후속 연구가 활발히 이루어져야 할것이다.
제안 방법
- 压。2를 10분간 처 리 하였다. 0.
- 1 moVL PBS 완충 용액으로 20분간 수세하고 10% Goat serum으로 1시 간 동안 Blocking 특이 반응을 억 제하였다. 5-methylcytosine(5-MC; Oncogene, USA)항체로 12시간 이상 반응시킨 후 PBS 용액으로 수세하고biotinylated 2nd antibody로 1시간 반응시킨 후 PBS 용액으로 15분간 수세 하였다. Avidin-biotin- peroxidase complexmplex Vector laboratory) 로 30분간 처리한 후 PBS 용액으로 15분간 수세하고 DAB로 10분간 발색하였다.
- 반응온도와 시 간은 95 "C 60초, annealing tenpemture 72 "C 60초로 수행하고 35회룰 반복하였다. 5니의 PCR산물울 l&mit의 제한효소(8U/, Takara Shuzo Co., Shiga, J阳an) 로 분해하여 Nucleotide 677 위치에서의 C 에서 T로의 치환울 확인하였다. 198-base pair PCR flagrant는 Hinfl 제한효소에 의해 175(와 23ba)se pair fragments 잘라졌고 증폭된 생성물은 25 se gel에 전기 영동하여 밴드룰 확인하였다.
- 5-methylcytosine(5-MC; Oncogene, USA)항체로 12시간 이상 반응시킨 후 PBS 용액으로 수세하고biotinylated 2nd antibody로 1시간 반응시킨 후 PBS 용액으로 15분간 수세 하였다. Avidin-biotin- peroxidase complexmplex Vector laboratory) 로 30분간 처리한 후 PBS 용액으로 15분간 수세하고 DAB로 10분간 발색하였다. Hematoxylene으로 대조염색하고 alcohol로 탈수 한 후 xylene으로 투명 화 하였다.
- Chandrika 등 [28]의 방법울 변형하여 태반조직의 DNA 메틸화룰 평가하였다. 분만 시 수집된 태반의 일부룰 분리하여 4% paraformaldehyde^- 0.
- 준비 된 DNA로 Polymerase Chain Reaction- (PCR)울 시 행하여 DNA룰 증폭시 켰다. PCR은 50 ng의 DNA, 200 mM dNTPs5 각 primer 0.3 mmol^ 政 PCR buffer 및 05 unit 의 T&q polymerase룰 사용하였으며 Sense; *TGA AGG AGA AGG TGT CTG CGG GA凯 antisense 5'・AGG ACG GTG GGT GAA GTG-3't PCR primer로 선택하였다. 반응온도와 시 간은 95 "C 60초, annealing tenpemture 72 "C 60초로 수행하고 35회룰 반복하였다.
- 28주의 산모룰 대상으로 임상 의사가 코호트에 대한 구체적인 설명 과 제 안울 하였다. 그 중 연구 참여 에동의 한 658명 의 산모룰 연구 대상으로 하여 산모 코호트룰 구축하고 임신 24.28주기간에 혈중 호모시스테인과 엽산 농도룰 측정하였다. 코호트 구성원 중 본 병원에서 출산하여 태반과 임신결과 정보 수집이 가능하였던 130명의 산모룰 본 연구의 대상으로 하였으며 임신성 고혈압 환자 4 명, 임신성 당뇨병 환자 17명, 다 태아룰 출산한 산모 2명울 제외하여 약 82%에 해당하는 107명의 산모룰 최종 분석 대상으로 하였다.
- 28주 기간의 외래 방문 시 훈련된 간호사가 인구학적 특성, 임신및 출산관련특성, 건강상태 등의문항울 포함한 구조화된 설문울 자가 기입식 설문에 근거하여 조사하였다. 또 한 분만 후 분만실 에 상근하는 간호사가 의무기록에 근거하여 임신주수, 신장, 체중, 임신 전후의 체중변화, 분만시 합병증, 다태아여 부등의 출산결과룰 수집하였다.
- 28주 산모 107 명울 연구 대상자로 하였으며 외래 방문 시 혈중 엽산, 호모시스테인 농도룰 측정하고 MTHFR 677 유전다형성울 평가하였다. 면역조직화학염색법으로 분만 후 수집된 태반조직에서 DNA메틸화룰 평가하였다.
- 면역조직화학염색으로 태반 조직 내 영양막세포에서 DNA 메틸화 발현을 평가하였다. 5-methylcytosine(5MC) 항체와 반응하여 적색으로 발현된 부분이 DNA 메틸화가 진행된 세포이며 청색으로 관찰되어지는 세포들은 항체와 반응이 일어나지 않아 Hematoxylene로만 대조염색 되어진 정상 세포이다(Figure 1).
- 분만 시 수집된 태반의 일부룰 분리하여 4% paraformaldehyde^- 0.5% glutaraldehyde 의 혼합고정액으로 고정한 후조직의 수분울 제거하기 위하여 alcohol 농도 상승 순으로 탈수하고 岑lene으로 투명화하였다. 조직에 파라핀울 침투시키고 포매하여 파라핀 불록울 제작하였다.
- 산모의 혈청 호모시스테인 농도가 태반 세포 DNA 메틸화에 미치는 영향을 다중회귀 분석모형으로 분석하였다. 산모의 연령, 체질량 지수, 임신 시 체중 변화를 보정하였을 때 혈청 호모시스테인이 증가할수록 태반세포 DNA 저메틸화가 초래되 었다.
- 산전 진찰울 위해 이화여자대학교 병원산부인과에 내원한 임신 24.28주 산모 107 명울 연구 대상자로 하였으며 외래 방문 시 혈중 엽산, 호모시스테인 농도룰 측정하고 MTHFR 677 유전다형성울 평가하였다. 면역조직화학염색법으로 분만 후 수집된 태반조직에서 DNA메틸화룰 평가하였다.
- 45 成 filter(HV type, Whatman)^. 여과한 후 autoimtiGii爬이or(Wa・ teis Cb. MA. USA)로 20 诚씩 Golumn에 주입하여 Fluorescence Detector(Waters 474- Watemteis Co. MA. USA)로 분석 하였다. 분석 시 EKdiation waw length 는 385 nm로 하였고, Emission wave lenght 는 315 mn로 결정 하였 다.
- 연구대상 산모의 정맥혈로부터 DM룰 추출하여 PCR-RFLP 기법울 시행하여 MTHFR 유전자다형성울 분석하였다, 산모의 혈액에서 QIA【叩 blood Kit(Qiagen, Hilden, Germany)룰 사용하여 DNA룰 추출한 후 분석시까지 -20 C에서 보관하였다. 준비 된 DNA로 Polymerase Chain Reaction- (PCR)울 시 행하여 DNA룰 증폭시 켰다.
- 연구대상산모의 임신 24.28주 기간의 외래 방문 시 훈련된 간호사가 인구학적 특성, 임신및 출산관련특성, 건강상태 등의문항울 포함한 구조화된 설문울 자가 기입식 설문에 근거하여 조사하였다. 또 한 분만 후 분만실 에 상근하는 간호사가 의무기록에 근거하여 임신주수, 신장, 체중, 임신 전후의 체중변화, 분만시 합병증, 다태아여 부등의 출산결과룰 수집하였다.
- 임신 24.28주 기간의 외래 방문 시 채취한 정맥혈울 혈청으로 분리하여 엽산과 호모시스테인 농도룰 분석하였다. 호모시 스테인 농도는 Araki 등 [27] 의 High Perforirance Liquid Chromatogi^)hy(HPLC)-fluorescence detection method룰 참고하여 분석 하였다.
- 조직에 파라핀울 침투시키고 포매하여 파라핀 불록울 제작하였다. 제작한 불록울 miGrotome울 이 용하여 5・7仰의 두께로 자른 후 Gelatin-coated slide glass에 올리 고 56 'C에서 건조시켜 조직표본을제작하였다.
- 5% glutaraldehyde 의 혼합고정액으로 고정한 후조직의 수분울 제거하기 위하여 alcohol 농도 상승 순으로 탈수하고 岑lene으로 투명화하였다. 조직에 파라핀울 침투시키고 포매하여 파라핀 불록울 제작하였다. 제작한 불록울 miGrotome울 이 용하여 5・7仰의 두께로 자른 후 Gelatin-coated slide glass에 올리 고 56 'C에서 건조시켜 조직표본을제작하였다.
- DIQdifferectial interference contrast)현미 경 (Zeiss) Axioskop 2, Germany)을 사용하여 면역 조직화학염색 결과를 관찰하였으며 메틸화가 일어 난 세포는 5-MC(methyl cytosine)항체와 반응하여 세포핵이 적색으로 발색됨을 확인하였다. 현미경상에서 X400 배의 배율로 관찰되는 전체 세포의 수를 측정하고 그 중 메틸화되어 적색으로 발색된 세포수를 측정하여 전체 세포 수를 메틸화가 일어 난 세포수로 나눈 측정비로 태반 조직 내 세포의 DNA 평가하였다.
- MTHFR 677 유전 다형성이 CC, CT, TT인 군에서 호모시스테인 농도와 DNA 메틸화 발현과의 연관성 분석을 위하여 산모의 연령, 체질량 지수, 임신 시 체중증가를 고려하여 partial correlations분석을 시 행하여 상관계수로 제시하였다. 혈중 호모시스테인 농도가 DNA 메틸화 발현에 미치는 영향을 분석 하기 위 하여 다중 회 귀분석 모델을 구축하였으며 산모의 연령, 체질량 지수, 임신 시 체중 증가 등을 모델에 포함하여 분석하였다.
- 호모시 스테인 농도는 Araki 등 [27] 의 High Perforirance Liquid Chromatogi^)hy(HPLC)-fluorescence detection method룰 참고하여 분석 하였다. 혈청 100 诚에 10% iri-n-butylphc^phine 용액 10 成룰 첨가한후 4 °C에서 30분간 반응시키고 10% Irichloroacetic add 1(1) 成룰 첨가하였다. 반응후3000Xg로 5분간4 °C에서 원심분리 한 후 상층액 100 诚에 1.
대상 데이터
- 20이년 8월부터 2003년 4월까지 산전 진찰울 위해 이화여 자대학교 병원 산부인과에 내원한 임신 24.28주의 산모룰 대상으로 임상 의사가 코호트에 대한 구체적인 설명 과 제 안울 하였다. 그 중 연구 참여 에동의 한 658명 의 산모룰 연구 대상으로 하여 산모 코호트룰 구축하고 임신 24.
- USA)로 분석 하였다. 분석 시 EKdiation waw length 는 385 nm로 하였고, Emission wave lenght 는 315 mn로 결정 하였 다. 엽 산은 Radioimmunoassay kit(Di agnostic Products Corporation, Los AngelaCA, USA)룰 이용하여 분석하였고 11曲舔習 변이계수는40%로 결정하였다.
- 28주기간에 혈중 호모시스테인과 엽산 농도룰 측정하였다. 코호트 구성원 중 본 병원에서 출산하여 태반과 임신결과 정보 수집이 가능하였던 130명의 산모룰 본 연구의 대상으로 하였으며 임신성 고혈압 환자 4 명, 임신성 당뇨병 환자 17명, 다 태아룰 출산한 산모 2명울 제외하여 약 82%에 해당하는 107명의 산모룰 최종 분석 대상으로 하였다.
데이터처리
- 기술통계분석으로 연구대상자의 일반적 특성을 파악하여 평균과 표준편차로 나타내 었다. MTHFR 677 유전 다형성이 CC, CT, TT인 군에서 호모시스테인 농도와 DNA 메틸화 발현과의 연관성 분석을 위하여 산모의 연령, 체질량 지수, 임신 시 체중증가를 고려하여 partial correlations분석을 시 행하여 상관계수로 제시하였다. 혈중 호모시스테인 농도가 DNA 메틸화 발현에 미치는 영향을 분석 하기 위 하여 다중 회 귀분석 모델을 구축하였으며 산모의 연령, 체질량 지수, 임신 시 체중 증가 등을 모델에 포함하여 분석하였다.
- SAS 통계 프로그램(V血ion 8.0)을 이 용하여 자료를 분석하였다. 기술통계분석으로 연구대상자의 일반적 특성을 파악하여 평균과 표준편차로 나타내 었다.
- 0)을 이 용하여 자료를 분석하였다. 기술통계분석으로 연구대상자의 일반적 특성을 파악하여 평균과 표준편차로 나타내 었다. MTHFR 677 유전 다형성이 CC, CT, TT인 군에서 호모시스테인 농도와 DNA 메틸화 발현과의 연관성 분석을 위하여 산모의 연령, 체질량 지수, 임신 시 체중증가를 고려하여 partial correlations분석을 시 행하여 상관계수로 제시하였다.
이론/모형
- 분석 시 EKdiation waw length 는 385 nm로 하였고, Emission wave lenght 는 315 mn로 결정 하였 다. 엽 산은 Radioimmunoassay kit(Di agnostic Products Corporation, Los AngelaCA, USA)룰 이용하여 분석하였고 11曲舔習 변이계수는40%로 결정하였다.
- 28주 기간의 외래 방문 시 채취한 정맥혈울 혈청으로 분리하여 엽산과 호모시스테인 농도룰 분석하였다. 호모시 스테인 농도는 Araki 등 [27] 의 High Perforirance Liquid Chromatogi^)hy(HPLC)-fluorescence detection method룰 참고하여 분석 하였다. 혈청 100 诚에 10% iri-n-butylphc^phine 용액 10 成룰 첨가한후 4 °C에서 30분간 반응시키고 10% Irichloroacetic add 1(1) 成룰 첨가하였다.
성능/효과
- 29) 이었고 이는 통계적으로 유위하였다. (p<0.05) 혈중 엽산과 호모시스테인은 음의 상관관계룰 보였으며 특히 MTHFR (677) TT 군에서 가장 강한 음의 상관관계룰 갖는 것으로 분석되었다. (『0.
- Hematoxylene으로 대조염색하고 alcohol로 탈수 한 후 xylene으로 투명 화 하였다. DIQdifferectial interference contrast)현미 경 (Zeiss) Axioskop 2, Germany)을 사용하여 면역 조직화학염색 결과를 관찰하였으며 메틸화가 일어 난 세포는 5-MC(methyl cytosine)항체와 반응하여 세포핵이 적색으로 발색됨을 확인하였다. 현미경상에서 X400 배의 배율로 관찰되는 전체 세포의 수를 측정하고 그 중 메틸화되어 적색으로 발색된 세포수를 측정하여 전체 세포 수를 메틸화가 일어 난 세포수로 나눈 측정비로 태반 조직 내 세포의 DNA 평가하였다.
- 2주 였다 (Table 1). MTHFR 677 CC 형 의 유전자를 가진 산모는 43명으로 40.2%였고 CT형 의 산모가 47명 으로 약 44%를 차지 하여 가장 높은 빈도를 보였다. TT형의 유전다형성을 가진 산모는 17명으로 전체의 16%를 차지 했다.
- 있다. MTHFR 유전자 다형성은 엽산과 상호작용하여 MTFHR 변이 형 군에서 엽산이 결펍된 경우에 호모시스테인 농도가 더욱 높게 나타남이 보고되었다 [31], 본 연구에서는 MTFHR 677 유전 다형 성군에서 엽산과 호모시스테인의 상관관계룰 분석하였울 때 동형 접합성 변이형 군인 TT형 군에서 엽산 농도가 낮울수록 혈중 호모시스테 인 농도가 상당히 증가하는 것으로 분석되 었다. 결과에서 표로 제시하지 는 않았지 만 MTFHR 677 유전 다형 성군에 따른 혈청 호모시스테인 농도평균울 비교하였울때8형 군에서 556伽侦 이었던 반면 변이형 군인 TT형 군에서는 64洒로 분석되 어 C allele룰 가진 8 와 CT형 군에 비해 TT형 군에서 호모시스테인의 농도룰 높이고 이는 DNA 저메틸화룰 초래할것으로 생각되어진다.
- MTHFR 유전자 다형성은 엽산과 상호작용하여 MTFHR 변이 형 군에서 엽산이 결펍된 경우에 호모시스테인 농도가 더욱 높게 나타남이 보고되었다 [31], 본 연구에서는 MTFHR 677 유전 다형 성군에서 엽산과 호모시스테인의 상관관계룰 분석하였울 때 동형 접합성 변이형 군인 TT형 군에서 엽산 농도가 낮울수록 혈중 호모시스테 인 농도가 상당히 증가하는 것으로 분석되 었다. 결과에서 표로 제시하지 는 않았지 만 MTFHR 677 유전 다형 성군에 따른 혈청 호모시스테인 농도평균울 비교하였울때8형 군에서 556伽侦 이었던 반면 변이형 군인 TT형 군에서는 64洒로 분석되 어 C allele룰 가진 8 와 CT형 군에 비해 TT형 군에서 호모시스테인의 농도룰 높이고 이는 DNA 저메틸화룰 초래할것으로 생각되어진다. 그러나 DNA 메틸화에서는 유전자다 형성에 따라 엽산의 활성도가 다르게 나타난다는 보고도 있다.
- 항산화제인 엽산의 혈중 농도가 낮아질수록 호모시스테인 농도는 증가하였으며, 호모시스테인의 농도가 증가할수록 태반세포 DNA 저 메틸화가 일어남울 확인하였다. 따라서 임신 중기의 증가된 호모시스테인 농도는 태아환경인 태반세포에서의 DNA 저메틸화룰 유도함울 보여주었다.
- 본 연구에서는 엽산 수준이 증가할수록 DNA 메틸화가 증가함울 보여주었으며 따라서 메틸화 과정 종 단일탄소 대사룰 포함한 엽산 등의 비타민 섭취가 보충되어지면 DNA 저메틸화 현상울 막울 수 있울 것으로 생각되어진다
- 본 연구에서도 MTFHR 유전자 다형성에 따라 엽산수준과 DNA 메틸화의 수준의 상관성울 살펴보았울 때 MTFHR 677 8 형보다 W”S 677(TT)형에서 엽산수준증가에 따른 DNA 메틸화가 증가함울 보여주었다. 이는 DNA 메틸화에 있어서 엽산의 영향에 대한 연구에 엽산수준과 단일 탄소 대사경로관련 유전자와의 상호작용이 고려돼야 함울 나타내주는 결과이다.
- 분석하였다. 산모의 연령, 체질량 지수, 임신 시 체중 변화를 보정하였을 때 혈청 호모시스테인이 증가할수록 태반세포 DNA 저메틸화가 초래되 었다. 회 귀 계수는 -2.
- 05) (Figure 2). 산모의 혈청 엽산농도와 호모시스테인 수준의 상관성 분석 결과 엽 산 농도가 증가할수록 혈중 호모시스테인 농도는 감소하였으며 硏는 MTHFR 677 모든 군에서 동일하였다. 각 군에서의 상관계수는 CC형 에서 1=0.
- 5-methylcytosine(5MC) 항체와 반응하여 적색으로 발현된 부분이 DNA 메틸화가 진행된 세포이며 청색으로 관찰되어지는 세포들은 항체와 반응이 일어나지 않아 Hematoxylene로만 대조염색 되어진 정상 세포이다(Figure 1).연구대상산모의 태반조직에서의 DNA 메틸화 평균은 32.4%로 관찰되었다.
- 엽산 농도와 태반세포 DNA 메틸화의 상관분석 에서 는산모의 혈청 엽 산 농도 감소와 태반세포의 DNA 저 메 틸화와의 연관성이 관찰되었으며 TT형 군에서 엽산 농도증가에 따른 DNA 메 틸화 수준이 가장 높았다 (TT: i=037, CT: 1=027, CO 1=022) (Figure” 산모의 연령, 체질량지수, 임신 시 체중 변화와 호모시스테인 농도룰 보정한 엽산과DNA 메틸화와의 상관계수는 0.17 이었다.
- 항산화제인 엽산의 혈중 농도가 낮아질수록 호모시스테인 농도는 증가하였으며, 호모시스테인의 농도가 증가할수록 태반세포 DNA 저 메틸화가 일어남울 확인하였다. 따라서 임신 중기의 증가된 호모시스테인 농도는 태아환경인 태반세포에서의 DNA 저메틸화룰 유도함울 보여주었다.
후속연구
- 본연구의 제한점으로DNA메틸화에 영향울 줄 수 있는 비 타민비타민 E仏메티오닌등과 같은 식 이 요인과 중금속노출, 환경요인으로서 음주, 홉연울고려하지 않고 엽산만울 노출 지표로서 하였다는데 있다. 향후 연구에서는 DNA 메틸화와 연관성이 있는 다른 변수둘울 고려한 모델울구축하여 이에 대한분석이 필요할 것으로 생각된다.
- 상호작용함울 제시 하여 준다. 향후 산모룰 대상으로 엽산과 식이요인에 대한 지속적인 중재와관리가필요할 것으로 생각되며 이에 대한 후속 연구가 활발히 이루어져야 할것이다.
- 큰 의미룰 갖는다. 향후 산모룰 대상으로 엽산과식 이요인에 대한 지속적인 중재와 관리 가필요할 것으로 생각되 며현재 진행되 고 있는 코호트룰 좀 더 확대하여 후속 연구가 활발히 이루어져야 할 것으로 판단된다.
- 향후 연구에서는 DNA 메틸화와 연관성이 있는 다른 변수둘울 고려한 모델울구축하여 이에 대한분석이 필요할 것으로 생각된다. 둘째로, 임상 의사가 코호트 등록에 대한 제안울 하였울 때 연구 참여에 동의 한 산모만울 연구대상자로 함으로서 선택 편견으로 인하여 일반화에 제한이 있울수 있다 ㈣
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.