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문제 정의
- 따라서 본 연구에서는 향버 섯 의 이 러 생 리 활성 중 간 보호 효과를 검 토하고자 benzo(a)pyrene 투여로 급성 간독성을 유 발한 마우스의 간 조직 에서 향버 섯 메 탄올 추출물이 항산화 효소의 활성도와 과산화지질 함량의 변화및 해독효소계인 cytochrome P-450 1A1 isozyme 단백짚의 발현에 미치는 잉 향을 살펴보았다.
가설 설정
- 3)Values with a common superscript letter wi Lliin the same column are not significantly different (p<0.05).
제안 방법
- 그 상등익을 10, 000 xg로 20분간 원심분리하여 침 전물은 미토콘드리 아 분획으 로 catalase 활성 측정 에 사용하였고, 상등액은 다시 105,000 Xg에서 1시간 동만 초원심분리하여 cytosolic fraction과 microsomal fraction을 각각 얻었다. Cytosolic fractione- glutei thione peroxidase(GSH-Px)와 glutathione S-tansferase (GST), superoxide dismutase(SOD) 활성 측정 에, microsomal fractione cytochrome P-450 활성 고} cytochrome P-450 1A1 isozyme의 iminunoblot 분석에 사묭하었다.
- 본 실험에 사용한 향버섯은 김천 황악산에서 채취한 후 건 조하여 사용하였다. 건조된 향버섯의 자실체(50 g)를 먼저 분 쇄기로에서 15분 동안 분쇄한 다음, 10배의 메탄올올 가한 후 12시간 동안 3회 반복 추출하였으며, 그 상등액을 모아 여과한 다음 감압농축시 킨 후 동결 건조하여 메탄올 추출물 (6.6 g)을 제조하였다 시료는 식염수에 용해하여 사용하였다.
- 4)을 가하여 균질기로 마쇄시 킨 후, 4℃ 에서 GOOXg로 10분간 원심분리하였다. 그 상등익을 10, 000 xg로 20분간 원심분리하여 침 전물은 미토콘드리 아 분획으 로 catalase 활성 측정 에 사용하였고, 상등액은 다시 105,000 Xg에서 1시간 동만 초원심분리하여 cytosolic fraction과 microsomal fraction을 각각 얻었다. Cytosolic fractione- glutei thione peroxidase(GSH-Px)와 glutathione S-tansferase (GST), superoxide dismutase(SOD) 활성 측정 에, microsomal fractione cytochrome P-450 활성 고} cytochrome P-450 1A1 isozyme의 iminunoblot 분석에 사묭하었다.
- Cytochrome P-450의 활 성은 Omura와 SatoCl引으] 방법으로 측정하였으며, cytochrome P-450 1A1 isozyme의 immunoblot 분석 은 microsomal fraction을 20 μg의 단백질 농도로 준비하여 Laemmli 법(19)에 의해 전기영동한 후 western blottmg(20)하였다. 발 현된 단백질의 band에 대한 상대적인 강도는image analyzer (Fuji company, Japan, model BAS 1500)로 측정하였다. 단백질 정 량은 Lowry 둥(21)의 방법에 의하여 소 혈첨 알부민을 표준품으로 하여 측정하였다.
- 실험 동물은 평균 체중이 25-30 g인 ICR게 마우스(male) 를 사용하여 온도{盧±2℃), 습도(65±2%)와 명 암주기 (12시 간)가 자동적으로 조절되는 사육실에서 7일간 일반사료로 예 비사육하여 환경 에 적 응시 킨 후, 난괴 법 에 따라 군당 10마리 씩 4군으로 구분하여 실험하였다 각 실험군은 대조군(C), 향 버 섯 메 탄올 추출물 처리 군(S), 벤조피 렌 단독 처리 군(B) 및 향버 싯 메 탄올 추출물 처리 한 다음 벤조피 렌을 처리 한 군(SR) 으로 하였다. 예비실험을 토대로 향버섯 메탄올 추출물은 마 우스 kg당 10 mg으로 하여 5일간 1일 1회 잎정시간에 복강 주사하였으며 , benzoIGpyreneiOSrng/kg)은 DMSO에 용해 시켜 시료 추출물 투여한 다음 5일째에 1회 복강주사한 후 24시간 후 처치하였다.
- 실험 동물은 평균 체중이 25-30 g인 ICR게 마우스(male) 를 사용하여 온도{盧±2℃), 습도(65±2%)와 명 암주기 (12시 간)가 자동적으로 조절되는 사육실에서 7일간 일반사료로 예 비사육하여 환경 에 적 응시 킨 후, 난괴 법 에 따라 군당 10마리 씩 4군으로 구분하여 실험하였다 각 실험군은 대조군(C), 향 버 섯 메 탄올 추출물 처리 군(S), 벤조피 렌 단독 처리 군(B) 및 향버 싯 메 탄올 추출물 처리 한 다음 벤조피 렌을 처리 한 군(SR) 으로 하였다. 예비실험을 토대로 향버섯 메탄올 추출물은 마 우스 kg당 10 mg으로 하여 5일간 1일 1회 잎정시간에 복강 주사하였으며 , benzoIGpyreneiOSrng/kg)은 DMSO에 용해 시켜 시료 추출물 투여한 다음 5일째에 1회 복강주사한 후 24시간 후 처치하였다.
- 향버섯 메 탄올 추출물이 간독성 물질 인 B(a)P을 부여 한 마 우스에서 간 손상 억제 및 cytochrome P 450 1A1 발현에 미치는 명향을 살펴보았다. B(a)P투여로 인한 혈칩 ALT외- AST의 활성, 간조직 중의 lipid peroxide 함량, cytochrome P-450 함랑, SOD, catalase 그-리 고 GSHTPx의 활성이 유의적으로 증가하였으며 향버섯 메탄올 주춭물의 투여 시 이들 활성 및 함량이 유의적으로 감소하였다.
대상 데이터
- 본 실험에 사용한 향버섯은 김천 황악산에서 채취한 후 건 조하여 사용하였다. 건조된 향버섯의 자실체(50 g)를 먼저 분 쇄기로에서 15분 동안 분쇄한 다음, 10배의 메탄올올 가한 후 12시간 동안 3회 반복 추출하였으며, 그 상등액을 모아 여과한 다음 감압농축시 킨 후 동결 건조하여 메탄올 추출물 (6.
데이터처리
- 실험 결과는 통계 처리 하여 평 균치 와 표준편 차를 계 산하였으며, 각 실험군 간의 유의성 검정은 旷©05 수준에서 Duncan's multiple test를 이용하여 통계분식 하였다.
이론/모형
- 6)의 방법, glutatliione S-lransferase 활성은 Ha- big 등CL7) 의 방법으로 측정하였다. Cytochrome P-450의 활 성은 Omura와 SatoCl引으] 방법으로 측정하였으며, cytochrome P-450 1A1 isozyme의 immunoblot 분석 은 microsomal fraction을 20 μg의 단백질 농도로 준비하여 Laemmli 법(19)에 의해 전기영동한 후 western blottmg(20)하였다. 발 현된 단백질의 band에 대한 상대적인 강도는image analyzer (Fuji company, Japan, model BAS 1500)로 측정하였다.
- 혈청 중 aminotransferase으] 활성 도는 Reitman과 Frankel(13)의 방법 , superoxide dismutase의 활성 측정 은 Marklund와 Mar- khmd(14)의 방법, catalase의 활성은 Aebi(15)의 방법에 의 하이 측정하였다. Glutathione peroxidase의 횔-성은 Faglia와 Valentine(J.6)의 방법, glutatliione S-lransferase 활성은 Ha- big 등CL7) 의 방법으로 측정하였다. Cytochrome P-450의 활 성은 Omura와 SatoCl引으] 방법으로 측정하였으며, cytochrome P-450 1A1 isozyme의 immunoblot 분석 은 microsomal fraction을 20 μg의 단백질 농도로 준비하여 Laemmli 법(19)에 의해 전기영동한 후 western blottmg(20)하였다.
- 간 조직의 lipid peroxide 함량은 Ohkawa 듬(ID의 방법 , glutaUiione 함량은 EllmanC(2)의 방법으로 행하였다. 혈청 중 aminotransferase으] 활성 도는 Reitman과 Frankel(13)의 방법 , superoxide dismutase의 활성 측정 은 Marklund와 Mar- khmd(14)의 방법, catalase의 활성은 Aebi(15)의 방법에 의 하이 측정하였다.
- 발 현된 단백질의 band에 대한 상대적인 강도는image analyzer (Fuji company, Japan, model BAS 1500)로 측정하였다. 단백질 정 량은 Lowry 둥(21)의 방법에 의하여 소 혈첨 알부민을 표준품으로 하여 측정하였다.
- 간 조직의 lipid peroxide 함량은 Ohkawa 듬(ID의 방법 , glutaUiione 함량은 EllmanC(2)의 방법으로 행하였다. 혈청 중 aminotransferase으] 활성 도는 Reitman과 Frankel(13)의 방법 , superoxide dismutase의 활성 측정 은 Marklund와 Mar- khmd(14)의 방법, catalase의 활성은 Aebi(15)의 방법에 의 하이 측정하였다. Glutathione peroxidase의 횔-성은 Faglia와 Valentine(J.
성능/효과
- 향버섯 메 탄올 추출물이 간독성 물질 인 B(a)P을 부여 한 마 우스에서 간 손상 억제 및 cytochrome P 450 1A1 발현에 미치는 명향을 살펴보았다. B(a)P투여로 인한 혈칩 ALT외- AST의 활성, 간조직 중의 lipid peroxide 함량, cytochrome P-450 함랑, SOD, catalase 그-리 고 GSHTPx의 활성이 유의적으로 증가하였으며 향버섯 메탄올 주춭물의 투여 시 이들 활성 및 함량이 유의적으로 감소하였다. 반면, 간조직 중의 GSH 함량과 GST 활성 은 B(a)P만 투여 한 군에 비해 향버 섯 메 탄몰 추출물을 두여 시 다소 증가하였다.
- GSH 함량은 B군이 대조군에 비해 현저히 감소되었으며 SB군은 B군에 비하여 증가하는 경향을 나타내었다(Table 2). 이것은 B(aXP 투여 시 GSH을 기질로 사용하여 과산화수소를 제거하는 GSH-Px의 활성 증가로 인해 GSH 소모가 증가된 것으로 사료되며, B군에 비해 SB군이 증가한 것은 향버섯 메 탄올 추출물을 투여함으로서 과산화수소량의 생성이 적어 GSH-Px의 소모가 줄어들므로써 GSH의 소모량도 감소되어 나타난 결과로 사료된다.
- SOD 효소의 횔-성은 대조군에 비하여 B(a)P 단독 투여군 이 유의 적 으로 증가하였으나 향버 섯 메 탄올 추출물과을 루여한 군은 B(a)P 단독 투여군에 비해 약간 감소하는 경향을 나타내었다(Table 4).
- 반면 에 SB군은 AST와 ALT의 활성이 각가 유의적으로 감소하였다(Table 1). 따라서 향버섯 메탄올 추출물 의 전처리가 AST와 ALT의 활성을 감소시 켰으며 이는 향버섯 메탄을 추출물이 B(a)P에 의한 간세포 손상을 예방하는 효과가 있는 것으로 사료된다.
- 자] 쥐 의 간 microsome으로부터 10여 종의 cytochrome P-450의 isozyme0] 분리 되 었오미 , 이들 cytochrome P-싀50 isozyme 들은 서로 다른 기본구조와 기질특이성을 나타내며 서로 다 르기] 조철되는 것으로 보고되고 있다(32). 이 중 cytochj-ome P-450 1A1은 polycyclic aromatic hydrocarbone(PAH)와 ■반 음화여 유도되는 효소로서 B(a)P 루여 시 cytochrome P-450 1A1의 단백질 함량은 대조군에 비해 33% 증가하였으며 향 버 섯 메 탄올 추출물을 투여 함으로써 B(a)P 단독 투여 군보다 20% 감소되는 경향을 보였다(Fig. 1). 이는 싸리버섯 메탄올 추출물이 B(a)P 투여로 증가된 cytochrome P-450 1AI의 단백질 함량을 감소시렸다는 보고(33)와 일치하였다.
- 이러한 결과로 향버섯 메탄올 추출물이 &a)P에 의해 유 도된 간 독성을 해독시 키기 위해 cytochrome P-450 1AJ 의 protein level을 감소시키는데 관여한 것으로 사료된다
- 또한 immuno blotting 껼과로무터 B(a)P 투여에 의해 현저히 증가되었던 cytochrome P-450 1A1 isozyme 단백질 함량이 향비섯 메탄올 추출물의 투여로 감소됨을 확인하였匸}■. 이와 같은 결과로부터 향버 섯 메탄올 추출물은 B(a)P에 의한 간 손상에 대한 보 호 및 예방 효과를 가지는 것으로 사료된다.
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