선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 보고하였다(32). 따라서 노루궁뎅이 버섯 추출물이 cytochrome P-450 1A1 isozyme의 단백질 발현에 미치는 영향을 살펴보았다. 二!- 결과 Fig.
가설 설정
- 3)Values with a common superscript letter within the same coluinn are not significantly different (p<0.05).
- 3)Values with a common superscript letter within the same column are not significantly different (p<0.05).
제안 방법
- 이 간 균질액을 1차 원심분리(4℃, 600 xg, 10분)하여 핵 및 미 마셰분을 제거한 상등액을 2차 원심분리 (4℃, 10, 000 X g, 20분)하여 형 성 된 침 전물을 mitochondiial 분획으로catalase 활성 측정에 사용하였으며, 상등액을 다시 4℃, 105,000xg로 1시간 초원심분리한 후 cytosolic 분획과 microsomal 분획으로 사용하였다. Cytosolic 분획은 이utathione peroxidase(GSH-Px)오]- glutathione S-tansferase(GST), superoxide dismutase(SOD) 활성 측정 에 , microsomal 분획은 cytochrome P-450 활성 과 cytoclirome P 450 1A1 isozyme의 immunoblot 분석 에 사용하였다. 간조직 중 지 질과산화물괴- glutathione(GSH) 함량 측징 은 각각 Ohkawa 등의 방범 (10)과 Ellman의 방법 (11)에 준하여 행하였다.
- 따라서 본 연구에서는 노루궁뎅이 버섯의 생리활성 작용 중 간 보호작용을 알아보기 우】 해서, 마우스에 노루궁뎅이 버섯 메탄올 추출물을 전처리한 다음 benzo(a)pyrene을 투여하여 급성 간 손상을 유발시 킨 후 간조직 에서의 지 질과 산화물함량 및 항산화 효소 활성도의 변화를 측정 하고 cytochrome P450 1A1 isozyme의 단백질 함량 변화를 immuno blotting 으로 조사하였다.
- 실험 동물을 에 테 르로 마취 시 켜 복부 중앙선을 따라 개복한 다음 복부 대동맥으로부터 채혈하였다. 채취한 혈액은 실온에서 30분간 방치한 후 3, 000rpm에서 10분간 원심분리하고 혈청을 얻은 다음 ALT와 AST의 활성 측정 에 시-용하였다.
-
실험몽물
실험동물은 체중이 25-30 g되는 외견상 건강한 ICR계 웅성 마우스로 일정한 조건(온도: 18±2UC, 습도: 65 + 2%, 명 암: 12시 간 light/dark cycle) 에서 표준사료와 물을 충분히 공급하면서 7일간 적응시킨 후 난괴법 에 따라 각 군당 10마리씩 4군으로 구분하여 실험 하였다- 각 실험 군은 대조군(C), 노루궁뎅이 버섯 메탄올 추출물 처리군(S), 벤조피렌 단독 처리군 (B) 및 노루궁뎅이 버섯 메탄올 추출물을 전처리한 다음 벤조피렌을 처리한 군(SB)으로 하였匸土
- 예비실험을 토대로 노루궁뎅이 버섯 메탄올 추출물은 마우스 체중 kg당 25 mg 수준으로 생리식 염수에 녹여 1일 1회 일정시간에 5일간 복강 주사하였으며, 또한 급성 간 손상의유도는 시료 투여 5일째 에 B(a)P을 DMSO에 마우스 체중 kg당 0.5 mg 수준으로 녹여 1회 복강 주사하여 야기 시켰다. 실험동물은 실험 전 12시간 동안 믈만 주고 식이 공급을 중단하였으며 B(a)P 투여 24시간 경과 후에 처치하였다.
- 4)을 첨가한 후 마쇄하여간 균질엑을 만들었다. 이 간 균질액을 1차 원심분리(4℃, 600 xg, 10분)하여 핵 및 미 마셰분을 제거한 상등액을 2차 원심분리 (4℃, 10, 000 X g, 20분)하여 형 성 된 침 전물을 mitochondiial 분획으로catalase 활성 측정에 사용하였으며, 상등액을 다시 4℃, 105,000xg로 1시간 초원심분리한 후 cytosolic 분획과 microsomal 분획으로 사용하였다. Cytosolic 분획은 이utathione peroxidase(GSH-Px)오]- glutathione S-tansferase(GST), superoxide dismutase(SOD) 활성 측정 에 , microsomal 분획은 cytochrome P-450 활성 과 cytoclirome P 450 1A1 isozyme의 immunoblot 분석 에 사용하였다.
대상 데이터
- Each lane was loaded with 20 lig mice liver microsomes. Polyclonal Anti-Rat CYP1A1 (goat) antibody (diluted 1 - 1000) was used.
- 음건한 후 분쇄기로 분말화하있다. 노루궁뎅이 버섯 분말 (500 g)에 10배의 80% 메탄올로 8시 간씩 3회 교반 추출하고 40℃에서 3회 rotary evaporator로 감압농축시 킨 후 동길 건조하여 메탄올 추술물(140 g)로 사용하였다.
- 노루궁뎅이 버섯은 충남 수향 농원으로부터 구입한 것으로 음건한 후 분쇄기로 분말화하있다. 노루궁뎅이 버섯 분말 (500 g)에 10배의 80% 메탄올로 8시 간씩 3회 교반 추출하고 40℃에서 3회 rotary evaporator로 감압농축시 킨 후 동길 건조하여 메탄올 추술물(140 g)로 사용하였다.
데이터처리
- 실험 결과는 통계 처리 하여 평 균치 士표준편차로 나타내었으녀 , 각 실험 군간의 유의성 검정은 SAS program을 이용하여 5% 수준에서 Duncan's multiple range test로 확인하였다.
이론/모형
- GSH-Px의 활성은 Paglia와 Valentine의 방법 (15), GST 활성은 Habig 등의 방법 (16)으로 측정하였다. Cytochrome P-450 의 함량eQmura와Sato의 방법(17)으로측정하였으며, cytochrome P-450 1A1 isozyme의 immunoblot 분석은 microsomal 분획을 20 蛇의 단백질 농도로 준비하여 Laemml법 (18)에 의해 전기 영동한 후 western blotting(19)하였다. 단백질의 함량은 Lowry 등의 방법(20)에 따라 bovine serum albumin(Sigma사)을 표준품으로 하여 촉정하였다-
- 혈청 중 ALT 오+ AST의 횔성도는 Reitmar과 Frankel의 방법 (12), superoxide dismutase의 활성 측정은 Marklund오]■ Marklund의 방법 (13), catalase의 활성은 Aebi의 방법(14)에 의하여 측정하였다. GSH-Px의 활성은 Paglia와 Valentine의 방법 (15), GST 활성은 Habig 등의 방법 (16)으로 측정하였다. Cytochrome P-450 의 함량eQmura와Sato의 방법(17)으로측정하였으며, cytochrome P-450 1A1 isozyme의 immunoblot 분석은 microsomal 분획을 20 蛇의 단백질 농도로 준비하여 Laemml법 (18)에 의해 전기 영동한 후 western blotting(19)하였다.
- Cytosolic 분획은 이utathione peroxidase(GSH-Px)오]- glutathione S-tansferase(GST), superoxide dismutase(SOD) 활성 측정 에 , microsomal 분획은 cytochrome P-450 활성 과 cytoclirome P 450 1A1 isozyme의 immunoblot 분석 에 사용하였다. 간조직 중 지 질과산화물괴- glutathione(GSH) 함량 측징 은 각각 Ohkawa 등의 방범 (10)과 Ellman의 방법 (11)에 준하여 행하였다. 혈청 중 ALT 오+ AST의 횔성도는 Reitmar과 Frankel의 방법 (12), superoxide dismutase의 활성 측정은 Marklund오]■ Marklund의 방법 (13), catalase의 활성은 Aebi의 방법(14)에 의하여 측정하였다.
- Cytochrome P-450 의 함량eQmura와Sato의 방법(17)으로측정하였으며, cytochrome P-450 1A1 isozyme의 immunoblot 분석은 microsomal 분획을 20 蛇의 단백질 농도로 준비하여 Laemml법 (18)에 의해 전기 영동한 후 western blotting(19)하였다. 단백질의 함량은 Lowry 등의 방법(20)에 따라 bovine serum albumin(Sigma사)을 표준품으로 하여 촉정하였다-
- 간조직 중 지 질과산화물괴- glutathione(GSH) 함량 측징 은 각각 Ohkawa 등의 방범 (10)과 Ellman의 방법 (11)에 준하여 행하였다. 혈청 중 ALT 오+ AST의 횔성도는 Reitmar과 Frankel의 방법 (12), superoxide dismutase의 활성 측정은 Marklund오]■ Marklund의 방법 (13), catalase의 활성은 Aebi의 방법(14)에 의하여 측정하였다. GSH-Px의 활성은 Paglia와 Valentine의 방법 (15), GST 활성은 Habig 등의 방법 (16)으로 측정하였다.
성능/효과
- 따라서 노루궁뎅이 버섯 추출물이 cytochrome P-450 1A1 isozyme의 단백질 발현에 미치는 영향을 살펴보았다. 二!- 결과 Fig. 1에서와 같이 B(a)P 투여군의 cytochrome P-450 1A1 단백질 함량은 대조군에 비하여 현저히 증가하였으며 노루궁뎅이 버섯 메탄올 추출물을 투여한 후 B(a)P 투여한 군에서는 B(a)P 단독 투여한 군에 비하여 갑소하였다. 이는 싸리 버섯 메탄올 주출물이 cytochrome P-450 1A1의 단백질 함량을 감소시 킴으로써 B(a)P 투여 에의한 간 손상을 억제시켰다는 보고(33)와 일치하며 또한 마늘의 지 용성 성 분인 diallyl sulfide는 cytochrome P-450 2E1 을 억 제 하는 작용을 가져 발암불질 등에 의한 전자 친화적 인손상에 의한 지 질과산화를 억 제하는 특성을 나타낸 것으로 보고하였다(34).
- 27). 간조직 중 GSH 함량은 B(a)P 단독 투여군이 대조군에 비해 유의적으로 감소하였으며 , 노루궁뎅 이 버섯 메탄올 추출물을 두여 한 후 B(a)P을 투여 한 군은 B(a)P만 투여한 군에 비하여 증가하는 경향을 나타내 었다(Table 2). 이러한 결과는 B(a)P이 체내로 흡수되면서 조직에 산화적 스드레스 환경 을 유발하여 이를 해독하기 위한 GSH의 소모로 인해 체내 GSH가 감소하였으며 노루궁뎅이 버섯 메탄올 추출물의 투여로 체내의 GSH 소모를 덜어주어 그 함량이 중가된 것으로 사료된다.
- 특히 B(a)P이 체내에서 산화되어 생성된 diepoxide가 세포내의 GSH와 포합체를 형성 하는데 이때 GST가 이 반응을 촉진하고 이 포합체 는 신속하게 배설되어 해독된다고 알려져 있다(30). 간조직 중 GST 활성도는 B(a)P 단독 투여군이 대조군에 비하여 유의적으로 감소하였으며 , 노루궁뎅이 버섯 메탄올 추출물을 투여한 후 B(a)P을 투여 한 군은 B(a)P 단독 투여군에 비해 유의성 있게 증가하였다(Table 3). 이것은 노루궁뎅이 버섯 메탄올 추출물이 GST의 활성을 증가시켜 친전자성 외부물질에 GSH의 포합을 촉진시켜 배설되기 쉽도록 하므로써 B(a)P으로부터의 간 손상을 보호하는 것2로 사료된다.
- 이러한 간 장해유발물질을 투여하였을 때 ALT 및 AST 활성의 증가를 나타낸 것으로 보아 간 손상이 유발됨을 알 수 있었다. 그러나 노루궁뎅이 버섯 메탄올 추출물을 전처리함으로써 B(a)P 단독 투여군보다 혈 중 ALT 및 AST 활성이 감소된 결과로 보아 노루궁뎅이 버섯 메탄올 추출물이 B(a)P에 의한 간세포 손상에 보호작용이 있는 것으로 사료된다.
- 리고 항산화 효소인 SOD, catalase 및 GSH-Px의 활성이 유의적으로 감소하였으며 GSH 함량과 GST 활성은 증가하였다. 그리고 마우스의 간조직 에서 cytochrome P450 1A1 isozyme의 단백질 발현을 western blotting 으로 조사한 결과, B(a)P 두여로 대조군에 비해 현저히 증가한 단백질 발현이 노루궁뎅이 버섯 메탄을 추출물을 투여함으로써 감소됨을 확인하였다. 이상의 결과로 노루궁뎅 이 버섯 메탄올 추출물은 생 체 내에서 자유기로 인해 야기되는 간장의 산화적 손상을 효과적으로 억 제 할 수 있을 것으로 사료된다.
- B(a)P을 이용하여 유발한 간 장해에서 혈청 중의 ALT와 AST 활성에 미치는 노루궁뎅이 버섯 메탄올 추출물의 영 향은 Table 1과 같다. 노루궁뎅 이 버섯 메탄올 추출물 투여 군의 혈 청 ALT 및 AST 활성 도는 대조군과 유사하였으나 B(a)P 투여로 유의성 있는 활성증가를 나타내었匸h 반면 노루궁뎅이 버섯 메탄올 추출물을 투여한 후 B (a)P을 투여 한 군은 B(a)P 단독 투여 군보다는 유의성 있게 감소되었다 (Table 1).
- 노루궁뎅이 버섯의 간 손상 억제 작용을 확인하고자, B(a)P 투여로 간 독성이 유발된 마우스에서 과산화지질의 생성, 항산화에 관련된 효소 및 물질의 변화를 살펴 본 결과, B(a)P 투여로 인해 혈청 ALT와 AST의 활성 , 간조직 중의 과산화지질 함량, cytochrome P450 함량, SOD, catalase 그리고 GSH-Px의 활성이 유의적으로 증가하였고, GSH 함량과 GST 활성은 감소하였다. 반면 노루궁뎅이 버섯 메탄올 추출물의 전처리로 인해 ALT와 AST의 활성, 과산화지질 함량, cytochrome P450 함량 .
- 또한 catalase 및 GSH-Px 효소활성은 B(a)P 단독 투여군이 대조군에 비하여 유의성 있게 증가하였으며 노루궁뎅이버섯 메탄올 추출물을 투여 한 후 B(a)P을 투여 한 군은 B(a)P 단독 투여군에 비해 유의성 있는 감소를 나타내었다(Table 4). 이러한 결과는 노루궁뎅이 버섯 메탄올 추출물이 생체 내 자유 라디 칼외 생성을 억 제함으로써 항산화 효소인 catalase 및 GSH-Px 활성도를 낮춘 것으로 사료된다.
- 그.리고 항산화 효소인 SOD, catalase 및 GSH-Px의 활성이 유의적으로 감소하였으며 GSH 함량과 GST 활성은 증가하였다. 그리고 마우스의 간조직 에서 cytochrome P450 1A1 isozyme의 단백질 발현을 western blotting 으로 조사한 결과, B(a)P 두여로 대조군에 비해 현저히 증가한 단백질 발현이 노루궁뎅이 버섯 메탄을 추출물을 투여함으로써 감소됨을 확인하였다.
- 강력한 발암물질로 알려져 있다(22). 이러한 간 장해유발물질을 투여하였을 때 ALT 및 AST 활성의 증가를 나타낸 것으로 보아 간 손상이 유발됨을 알 수 있었다. 그러나 노루궁뎅이 버섯 메탄올 추출물을 전처리함으로써 B(a)P 단독 투여군보다 혈 중 ALT 및 AST 활성이 감소된 결과로 보아 노루궁뎅이 버섯 메탄올 추출물이 B(a)P에 의한 간세포 손상에 보호작용이 있는 것으로 사료된다.
- 그리고 마우스의 간조직 에서 cytochrome P450 1A1 isozyme의 단백질 발현을 western blotting 으로 조사한 결과, B(a)P 두여로 대조군에 비해 현저히 증가한 단백질 발현이 노루궁뎅이 버섯 메탄을 추출물을 투여함으로써 감소됨을 확인하였다. 이상의 결과로 노루궁뎅 이 버섯 메탄올 추출물은 생 체 내에서 자유기로 인해 야기되는 간장의 산화적 손상을 효과적으로 억 제 할 수 있을 것으로 사료된다. ,
- 이는 목이버섯 메탄올 추출물의 전처 리가 B(a)P 단독 투여군보다 cytochrome P-450 함량이 유의적으로 감소되었다는 보고와 일치하였다(25). 이상의 결과로 노루궁뎅이 버섯 메탄올 추출물은 cytochrome P-450의 함량을 억제시켜 간조직의 과산화지 질 생성 을 저하하고 간 보호효과를 나타낼 것으로 사료된다.
- 이러한 결과는 Chang 등(25)이 마우스에 B(a)P을 투여하였을 때 간조직 과산화 지질의 함량이 현저히 증가하였으나 목이버섯 추출물을 전처리하였을 때 증가 현상이 억제되 었다는 보고와 일치 하였다. 이상의 결과로 보아 노루궁뎅이 버 섯 메탄을 추출물 투여 로 B(a)P에 의해 유도되는 자유라디칼의 생성을 감소시킴으로서 지질과산화이 억제된 것으로 사료된다.
후속연구
- 이는 싸리 버섯 메탄올 주출물이 cytochrome P-450 1A1의 단백질 함량을 감소시 킴으로써 B(a)P 투여 에의한 간 손상을 억제시켰다는 보고(33)와 일치하며 또한 마늘의 지 용성 성 분인 diallyl sulfide는 cytochrome P-450 2E1 을 억 제 하는 작용을 가져 발암불질 등에 의한 전자 친화적 인손상에 의한 지 질과산화를 억 제하는 특성을 나타낸 것으로 보고하였다(34). 이상의 결과로 노루궁뎅이 버섯은 cytochrome P-450 1A1의 단백질 함량을 감소시켜 B(a)P에 의한 간 손상을 억제할 것으로 기대된다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.