선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 것이다(13). 따라서 본 연구를 위해 얻어진 단瑯다당체의 변역증강활성을 측정하기 위하여, 생체외 면역활성 검정법으로 면역세포 증식시험(immune cell proliferation assay), 혼합 림프액 반응(mixed lymphocyte reaction, MLR), 면역세포 분열촉진(direct mitogenicit刃 시尊 T-cell 의존형 항체생성(协 vitro T-cell dependent antibody production) 능력측정을 실시하였다.
- 또한, 저분자량의 유기화합물은 세포독성에 의한 항암, 항균, 소염, 항부종 효과를 보일 뿐이어서, 본 연구의 고분자량의 단백다당체가 갖는 무독성(ICso > 100 ㎎/㎏) 과는 구별이 된다(6). 따라서, 본 논문에서는 부작용이 적고독성면에서 매우 안전하면서도, 인체 내 면역계의 기능을 강화시켜 항암효과를 나타내는 물질로 지분자량의 유기화합물이 아닌 고분자량의 단백다당체를 느릅나무로부터 선택적으로 분리하고, 그것이 갖고 있는 면역활성에 의한 항암 효과를 밝히는 연구에 대해 보고하고자 한다(8).
- 오히려 이 논문에서는 근피수침엑스가 체액성, 세포성 면역반응을 모두 저해하는 것으로 보고하고 있다. 본 논문에서는 유근피의 수용액 추출물로부터 단백다당체를 분리하고 단백다당체의 면역 활성에 의한 항앆효과를 보고하고자 한디..
제안 방법
- 단백다당체의 최종 농도가 1, 10, 100 户g/mL이 되도록 첨가한 후, 37℃, 5% CO2 조건의 배양기에서 3일간 배양한 다음에 세포분열시 乍-티미딘(thymidine)의 결합정도를 측정하였다. 면역세포 분열촉진(direct mitogenicity) 시험(16)은 BDF1 쥐의 비장세포(I X" 세포/mL)를 96-well plate에 well 당 200 씩 기하고 단백다당체의 최종 농도가 1, 10, 100 pg/rnL 이 되도록 첨가한 후 37℃, 5% CO2 조건의 배양기에서 3일간 배양하고 气〔-티미딘의 결합 정도를 측정하였다. T-cell 의존형 항체생성(沅 vitro T-cell dependent antibody production) 능력측정(17)에서는 BDF1 mouse에서 적출한 비장세포(I X2, 세포/mL)를 sRBC antigen으로 면역화 시켰으며, 이후 시료를 치리하여 시료에 의한 항체생성능력의 변화를 측정하였다.
- 5 mL/min의 유속을 유지시키며 분석하였다. 0.5 M 수산화나트륨 용액의 컬럼후 혼합기(0.5 mL/min)를 거쳐 전기화학검출기(Waters 464, U.S.A.)에 결합시켜 검출하였다. 이때, 표준용액으로는 각각의 단당류 용액(증류수에 글루크론산(glucuronic acid), 람노스(rhamnose), 아라비노스(arabinose), 글루코스(glucose), 갈락토스(galactose), 퓨코스(fucose), 자일로스(xylose), 라피노스 (raffinose), 만노스(mannose), 리-이보스(Hbose) 등을 0.
- )를 이용하였다. HPLC 분석을 위해 겔여과 컬럼 (Tosohaas TSK-Gel G-3000SW, 직경 7.5 itiiti, 길이 600 mm, Japan)을 사'용'하고, 20 mM 인산이 포함된 0.2 M 아세트산암모늄(pH 6.8) 용액을 이 동상으로 하고, 1.0 mL/min의 유속을 유지하면서 분석하였다. 겔여과컬럼에 덱스트란을 통과시켜 공부피(Vo)를 구하고, 각각의 표준물질(덱스트란을 제외한 겔여과 분자량 표지에 포함되어있는 6 종류의 물질들)을 통과시켜 용출부피(Ve)를 구한 후, 분자량 대 Ve/Vo에 의한 검량곡선을 작성하였다.
- 8 mL의 2 M 염산용액으로 처리하고, 10CTC에서 2내지 5시간 가수분해 반응 시킨 후, 탄산바륨으로 반응액을 중화시키고 원심분리하여 분리된 상층액을 HPLC의 시료로 시용하였다. HPLC(Wate 區 U.S.A.) 를 이용하여 분리컬럼 (Waters Carbohydrate, 직경 4.6 mm, 길이 250 mm, U.S.A.)을 시용하고, 75%(v/v) 아세토니트럴 수용액을 이동상으로하여 0.5 mL/min의 유속을 유지시키며 분석하였다. 0.
- 면역세포 분열촉진(direct mitogenicity) 시험(16)은 BDF1 쥐의 비장세포(I X" 세포/mL)를 96-well plate에 well 당 200 씩 기하고 단백다당체의 최종 농도가 1, 10, 100 pg/rnL 이 되도록 첨가한 후 37℃, 5% CO2 조건의 배양기에서 3일간 배양하고 气〔-티미딘의 결합 정도를 측정하였다. T-cell 의존형 항체생성(沅 vitro T-cell dependent antibody production) 능력측정(17)에서는 BDF1 mouse에서 적출한 비장세포(I X2, 세포/mL)를 sRBC antigen으로 면역화 시켰으며, 이후 시료를 치리하여 시료에 의한 항체생성능력의 변화를 측정하였다.
- 0 mL/min의 유속을 유지하면서 분석하였다. 겔여과컬럼에 덱스트란을 통과시켜 공부피(Vo)를 구하고, 각각의 표준물질(덱스트란을 제외한 겔여과 분자량 표지에 포함되어있는 6 종류의 물질들)을 통과시켜 용출부피(Ve)를 구한 후, 분자량 대 Ve/Vo에 의한 검량곡선을 작성하였다. 느릅나무추출 성분외 Ve를 측정하여 검량곡선 으로부터 Ve/Vo를 계산하여 추출성분의 분자량음 구하였다(9).
- 또한, 약물에 의한 독성 정도를 알아보기 위하여, 투여 당일부터 2일 간격으로 체중의 변화를 측정하였으며, 동시에 하루에 두 번 사망 여부를 관찰하여 살아있는 쥐의 수를 조사하였다. 그리고, 단珥다당체의 급성독성을 알아보기 위해 단백다당체의 패혈성 쇼크 모델에서의 급성독성 유발 정도를 검증 비교하였다 단백다당체의 농도는 쥐 한 마리 당 1, 3, 10, 30, 100 ㎎/㎏이 되도록 처리하였다. 대조물질로는 리포폴리사카라이드(LPS)를 3 mg/쥐 (150 ㎎/㎏)의 용량으로 멸균증류수에 희석하여 사용하였고, 실험 0일째에 단백다당체 및 LPS를 0.
- 느릅나무 추출물인 단백다당체의 면역활성에 의한 항암효능을 검증하기 위하여 B16 혹색종 이식 마우스 시험을 실시하였다(Figure 7). Figure 7의 결과를 보면 용매 대조 군은 15 일째에 사망 동물이 관찰되기 시작하였으며, 아드리아마이신을 처리한 양성대조군을 제외한 전 처리군에서 34일째를 전후해 모든 동물이 사망하였다.
- 느릅나무로부터 제조된 단백다당체의 분광학적 분식은 FT-IR(Bomem MB-104, Hartmann&Braun, Canada)과 lH-NMR (Avance300, Bruker, Swiss)을 사용하여 수행하였고, 분자량측정을 위해서는 HPLC(Waters, U.S.A.)를 이용하였다. HPLC 분석을 위해 겔여과 컬럼 (Tosohaas TSK-Gel G-3000SW, 직경 7.
- 겔여과컬럼에 덱스트란을 통과시켜 공부피(Vo)를 구하고, 각각의 표준물질(덱스트란을 제외한 겔여과 분자량 표지에 포함되어있는 6 종류의 물질들)을 통과시켜 용출부피(Ve)를 구한 후, 분자량 대 Ve/Vo에 의한 검량곡선을 작성하였다. 느릅나무추출 성분외 Ve를 측정하여 검량곡선 으로부터 Ve/Vo를 계산하여 추출성분의 분자량음 구하였다(9).
- 모델을 사용하였다. 단백다당체는 멸균 증류수에 희석하여 0.3, 1, 3, 10 ㎎/㎏의 농도로 조제하였다. 용매 대조 군은 멸균증류수를 사용하였고, 양성대조군으로는 아드리아마이신 (adriamycin, ADR) 1 ㎎/㎏을 사용하였다.
- 단백다당체의 최종 농도가 1, 10, 100 户g/mL이 되도록 첨가한 후, 37℃, 5% CO2 조건의 배양기에서 3일간 배양한 다음에 세포분열시 乍-티미딘(thymidine)의 결합정도를 측정하였다. 면역세포 분열촉진(direct mitogenicity) 시험(16)은 BDF1 쥐의 비장세포(I X" 세포/mL)를 96-well plate에 well 당 200 씩 기하고 단백다당체의 최종 농도가 1, 10, 100 pg/rnL 이 되도록 첨가한 후 37℃, 5% CO2 조건의 배양기에서 3일간 배양하고 气〔-티미딘의 결합 정도를 측정하였다.
- 2 mL을 이식하고, 4시간 경과 후 조제된 단백다당체 및 용매를 복강추사하였다 투여 횟수는 15일째까지 총 16회 투여하였고, 당일부터 2일 간격으로 체중의 변화를 측정하였다. 또한, 약물에 의한 독성 정도를 알아보기 위하여, 투여 당일부터 2일 간격으로 체중의 변화를 측정하였으며, 동시에 하루에 두 번 사망 여부를 관찰하여 살아있는 쥐의 수를 조사하였다. 그리고, 단珥다당체의 급성독성을 알아보기 위해 단백다당체의 패혈성 쇼크 모델에서의 급성독성 유발 정도를 검증 비교하였다 단백다당체의 농도는 쥐 한 마리 당 1, 3, 10, 30, 100 ㎎/㎏이 되도록 처리하였다.
- 용매 대조 군은 멸균증류수를 사용하였고, 양성대조군으로는 아드리아마이신 (adriamycin, ADR) 1 ㎎/㎏을 사용하였다. 먼저, 그룹당 쥐를 10마리로 나누고, 실험 0일째에 B16 흑식종 세포(1乂1必 세포/동물)를 복강으로 쥐당 0.2 mL을 이식하고, 4시간 경과 후 조제된 단백다당체 및 용매를 복강추사하였다 투여 횟수는 15일째까지 총 16회 투여하였고, 당일부터 2일 간격으로 체중의 변화를 측정하였다. 또한, 약물에 의한 독성 정도를 알아보기 위하여, 투여 당일부터 2일 간격으로 체중의 변화를 측정하였으며, 동시에 하루에 두 번 사망 여부를 관찰하여 살아있는 쥐의 수를 조사하였다.
- 면역세포 증식시험(immune cell proliferation assay)(13)은 특정병원체부재(specific pathogen free, SPF) balb/c 쥐로부터 비장을 취하여 면역세포를 분리하였고, 세포의 최종 농도가 2X106 세포/mL, 단백다당체의 최종 농도가 0.01, 0.1, 1, 10, 100, 200 以/mL 이 되도록 96-well plate 에 단백다당체 10 μL 와 세포액 90 μL를 처리하였다. 면역세포의 증식을 알아보기 위하여 단백다당체를 첨가하여, 375% CO2 조전의 배양기에서 3일간 배양한 휘 배양액에 MTS 용액(14) 20 를 처리한 후, 4시간 내에 490 nm에서 흡광도를 판독하여 관찰하였다.
- 1, 1, 10, 100, 200 以/mL 이 되도록 96-well plate 에 단백다당체 10 μL 와 세포액 90 μL를 처리하였다. 면역세포의 증식을 알아보기 위하여 단백다당체를 첨가하여, 375% CO2 조전의 배양기에서 3일간 배양한 휘 배양액에 MTS 용액(14) 20 를 처리한 후, 4시간 내에 490 nm에서 흡광도를 판독하여 관찰하였다. 이때, 양성데조군으로는 리포 폴리시키리-이드(lipopolysaccharide, LPS)를 동일한 농도 뱀위로 처리하여 사용하였다.
- 2 L를 가하여 상온에서 3 내지 5희 반복 추줄하였다. 상기 수용액 추출액을 초고속 원심분리기(Sorvall RC 26 Plus, DuPont)를 사용하여 (Rotor SLA-3000, 7, 200 g, 30분) 고형물을 분리하고 상등액을 취한 후, 아세톤과 상등액을 2:l(v/v) 외 비율로 흔합하여 단백다당체를 침전시켰다. 이렁게 침전된 단백 다당 체를 증류수로 용해시켜 0.
- 이때, 양성데조군으로는 리포 폴리시키리-이드(lipopolysaccharide, LPS)를 동일한 농도 뱀위로 처리하여 사용하였다. 아울러, 각 농도 범위에서 현미경(20Q배율)으로도 면역세포의 증식 정도를 확인하였다.
- 3, 1, 3, 10 ㎎/㎏의 농도로 조제하였다. 용매 대조 군은 멸균증류수를 사용하였고, 양성대조군으로는 아드리아마이신 (adriamycin, ADR) 1 ㎎/㎏을 사용하였다. 먼저, 그룹당 쥐를 10마리로 나누고, 실험 0일째에 B16 흑식종 세포(1乂1必 세포/동물)를 복강으로 쥐당 0.
- 면역세포의 증식을 알아보기 위하여 단백다당체를 첨가하여, 375% CO2 조전의 배양기에서 3일간 배양한 휘 배양액에 MTS 용액(14) 20 를 처리한 후, 4시간 내에 490 nm에서 흡광도를 판독하여 관찰하였다. 이때, 양성데조군으로는 리포 폴리시키리-이드(lipopolysaccharide, LPS)를 동일한 농도 뱀위로 처리하여 사용하였다. 아울러, 각 농도 범위에서 현미경(20Q배율)으로도 면역세포의 증식 정도를 확인하였다.
- )에 결합시켜 검출하였다. 이때, 표준용액으로는 각각의 단당류 용액(증류수에 글루크론산(glucuronic acid), 람노스(rhamnose), 아라비노스(arabinose), 글루코스(glucose), 갈락토스(galactose), 퓨코스(fucose), 자일로스(xylose), 라피노스 (raffinose), 만노스(mannose), 리-이보스(Hbose) 등을 0.2 내지 10 mg/mL의 농도로 용해시킨 용액)을 시용하여 표준 용량 곡선을 삭성하여, 느릅나무추출 단백다당체의 당의 구성성분을 비교 분석하였다.
- 상기 수용액 추출액을 초고속 원심분리기(Sorvall RC 26 Plus, DuPont)를 사용하여 (Rotor SLA-3000, 7, 200 g, 30분) 고형물을 분리하고 상등액을 취한 후, 아세톤과 상등액을 2:l(v/v) 외 비율로 흔합하여 단백다당체를 침전시켰다. 이렁게 침전된 단백 다당 체를 증류수로 용해시켜 0.5 내지 3.0 /jm 범위의 필터(Glass microfibre filters, Whatman International Ltd., England)를 거처 여액을 수득하고, 수득된 여액을 다시 배제 분자량이 5내지 10 kDa 인 투석 막 (Spectrapor, Spectrum Medical Industries, Inc., U.S.A.)을 거쳐 내부 분획을 수득하였다(Scheme 1). 이렇게 얻어진 내부분회을 동결건조하여, 백색의 최종 단백다당체 5.
- )을 거쳐 내부 분획을 수득하였다(Scheme 1). 이렇게 얻어진 내부분회을 동결건조하여, 백색의 최종 단백다당체 5.0 g을 6% 징도의 수율로 수득하였다(Figure 1).
대상 데이터
- 느릅나무추출 단백다당체의 면역활싱에 의한 항앆효능을 검증하기 위하여 B16 흑색종 이식 쥐를 이용하여 실험하였다- 실험동물은 대한실험동물센터(주)로부터 공급 받아 유지 관리되고 있는 특정병원체부재 쥐(암컷, 6주령, 18-22 g)를 사용하였다.
- 그리고, 단珥다당체의 급성독성을 알아보기 위해 단백다당체의 패혈성 쇼크 모델에서의 급성독성 유발 정도를 검증 비교하였다 단백다당체의 농도는 쥐 한 마리 당 1, 3, 10, 30, 100 ㎎/㎏이 되도록 처리하였다. 대조물질로는 리포폴리사카라이드(LPS)를 3 mg/쥐 (150 ㎎/㎏)의 용량으로 멸균증류수에 희석하여 사용하였고, 실험 0일째에 단백다당체 및 LPS를 0.2 niL/20 g씩 복강 주사하였다.
- 초재상(아산약업사, 데구)에서 구입한 건조된 느릅나무 (Ulmus j火況ia)의 뿌리 껍질을 잘게 자르거나 또는 분쇄기에서 조분쇄물로 만든 조편분말 84.7g에 증류수 1.2 L를 가하여 상온에서 3 내지 5희 반복 추줄하였다. 상기 수용액 추출액을 초고속 원심분리기(Sorvall RC 26 Plus, DuPont)를 사용하여 (Rotor SLA-3000, 7, 200 g, 30분) 고형물을 분리하고 상등액을 취한 후, 아세톤과 상등액을 2:l(v/v) 외 비율로 흔합하여 단백다당체를 침전시켰다.
이론/모형
- 사용하였다. 그리고, 단백다당체의 단백질 함량 측정을 위해 개선된 로우리법(modified Lowry method)((2)를 사용하였으며, 단백 다당체의 당외 구성성분을 분석하기 위하여 의 단비다당체를 0.8 mL의 2 M 염산용액으로 처리하고, 10CTC에서 2내지 5시간 가수분해 반응 시킨 후, 탄산바륨으로 반응액을 중화시키고 원심분리하여 분리된 상층액을 HPLC의 시료로 시용하였다. HPLC(Wate 區 U.
- 단백다당체의 총당함량을 측정하기 위하여, 페놀-황산법 (10)을 이용하였으며, 단백다당체의 신-성당 함량 측정은 우론산(uronic acid) 함량을 측정하는 카바졸법(11)을 사용하였다. 그리고, 단백다당체의 단백질 함량 측정을 위해 개선된 로우리법(modified Lowry method)((2)를 사용하였으며, 단백 다당체의 당외 구성성분을 분석하기 위하여 의 단비다당체를 0.
- 생체내 면역활성에 의한 항암효과를 보기 위해 B16 흑색종 모델을 사용하였다. 단백다당체는 멸균 증류수에 희석하여 0.
성능/효과
- Figure 4의 현미경 사진을 보면 단백다당체를 처리하지 않은 실헝에 비하여(Figure 4(a)) 단백다당체를 처리할 검우(Figwc 4(b)) 면역세포의 증식이 유도된 것을 뚜렷이 불 수 있다. 이러한 결과는 %-티미딘을 이용한 direct mitogenicity실험에서도 동일한 경향을 나타내었으며(Figure 5(b)) 시류의 농도가 증가할수록 높은 면역세포증식을 보여주었다. Figure 5(b)를 보면 음성데조군에 비해 단백 다당체의 농도介 100 阐mL일 때 상당히 높은 수준의 면역세포증식을 나타내었다.
- . 결과를 보면 느릅나무추출 단백 다당체는 100 ㎎/㎏의 농도까지 페혈성 쇼크 유사 증상이 관찰되지 않을 정도로 안전하였으나, 양성대조물질인 LPS 처리군(3 mg/마우스)의 경우 둘째 날에 패혈성 쇼크 진전, 행동 실조 등 제반 독성증상을 보이면서 6 마리 중 5 마리에서 패혈성 쇼크에 의한 사망 동물이 관찰되었다.
- Figure 7의 결과를 보면 용매 대조 군은 15 일째에 사망 동물이 관찰되기 시작하였으며, 아드리아마이신을 처리한 양성대조군을 제외한 전 처리군에서 34일째를 전후해 모든 동물이 사망하였다. 느릅나무 추출 단백다당체는 0.3, 1, 3, 10 ㎎/㎏의 농도에서 각각 113.0%, 131.2%, 139.2%, 107.9%의 유의성 있는 항암효과를 보였으며, 이 중 3 ㎎/㎏ 군에서 가장 강한 항암효과(약 140% 생촌연장 효과)가 있었다. 이때 양성 대조물질인 아드리아마이신은 177.
- 단백다당체를 SO에 용해시켜 1H-NMR 스펙트럼을 분석한 결과 3.5 내지 4.5 ppm에서 고분자의 다당류가 나타내는 당 성분 특유의 피크들이 나타나 느릅나무 추출물이 다당체가 함유된 딘백다당체임을 확인할 수 있었다 느릅나무 추출물의 화학적 조성을 분석한 결과 총당함량은 55.8-72.1% 였고, 총산성당 함량은 30.0-30.5%, 총단백짙 함량은 5.0~ 6.1%로 나타났다(Figure 2). 느릅나무 추출성분의 분자량은 50내지 500 kDa 범위의 분자량을 나타내었다.
- 단백다당체의 FT-IR 스펙트럼에서는 3446 cn「에서 당 성분에 존재하는 하이드록시 (-OH) 기가 강한 흡광도를 보였고, 1654 cn「에서 아미도카보닐(NHOO)기의 홉광도가 나타났다. 단백다당체를 SO에 용해시켜 1H-NMR 스펙트럼을 분석한 결과 3.
- 느릅나무 추출성분의 분자량은 50내지 500 kDa 범위의 분자량을 나타내었다. :!리고, 단백 다당체를 구성하는 당성운을 조사한 결과 글루크론산이 63.9%, 람노스가 14.8%, 아라비노스가 3.9%, 글루코스가 1.1%, 갈락토스가 15.5% 정도로 나타났다.
- 양성대조군으로 사용한 LPS 의 경우와 비교해보면 10 “입mL 이하의 낮은 농도범위에서는 LPS보다 낮은 증식 결과를 보여추지만 이보다 높은 농도에서는 LPS보다 더 높은 증식음 보여추었다. 이 결과는 느릅나무 추출 단백 다당체가 면역세포의 증식을 자극하는 믈칠(mitogen)로서 면역세포 외 증식을 유도함을 나타낸다.
- 전기 화함물들은 저분자량의 유기화합물로서 세포독성에 의한 항암효과 및 소염진통, 항부종 작용의 주성분인 것으로 밝혀졌다. 한편, 조승길 등(7)은 참느릅나무의 근피수침 엑스를 분리하여 이것이 갖고 있는 소염, 진통착용을 보고하였다.
- 단백다당체에 의한 생존 연장 효과는 면역증강에 의한 항암효과로서 나타난 결과이고, 아드리아마이신의 경우 암세포에 대한 세포독성에 의해 나타난 것이다. 한편 투여 익일부터 14일간 체중의 변화를 2일 간격으로 관찰한 결과 약물처리 후 14일째까지 특별한 체중의 감소는 관찰되지 않았다. Figure 8는 B16 혹색종 이식 마우스의 시.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.