선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 결명자의 효능에 관한 연구로서 혈압강하효과, 혈당강하효과, free radical 소거작용 등이 보고되고 있으나, 체내 지질대사에 미치는 영향에 관해서는 거의 연구가 되어 있지 않는 실정이다. 이에 본 연구에서는 결명자 에탄올 추출물이 고콜레스테롤 식이를 섭취한 흰쥐의 체내 지질함량에 어떠한 영향을 미치는지에 관해 조사하였다.
가설 설정
- 1)NS: not significant.
- 2)NS: not significant.
- 4)NS: not significant.
제안 방법
- 5 M EDTA를 가하여 빙 냉하에서 Teflon Potter-Elvehjem homogenizerJg. 마쇄하여 얻은 균질 액을 4"C, 20, 000 xg에서 10분간 원심분리 하여 postmitochondrial supernatant를 얻어 이 를 Glucose- 6 phosphate dehydrogenase]G6PDH)오)" malic enzyme(ME) 활성 측정 을 위 한 효소원으로 사용하였다. G6PDH활성 은 NA- DP가 glucose-6-phosphate를 산화시켜 생성된 NADPH의양을 측정 하는 Bergmeyer의 방법 (16)에 준하였으며 , ME 활성은 효소에 의해 환원된 NADPH의 생성율을 측정하는 O- choa의 방법(17)에 따라 분석하였다.
- 결명자의 에탄올 추출물이 고콜레스테롤 식이를 섭취한 흰쥐의 체내 지질함량에 미 치는 영향을 알아보기 위하여 정상식이군, 고콜레스테롤 대조군, 고콜레스테롤 식이에 결명자 에탄올 추출물을 각각 0.25%와 0.5%씩 첨가하여 공급하는 실험군으로 나누어 4주간 사육한 후 혈청 및 간장의 지질함량, glucose-6-phosphate dehydrogenase와 malic enzyme 활성변화, 혈청 AST, ALT활성 및 지질과산화물의 함량의 변화를 조사하였다. 체중증가량과 식이섭 취 량은 추출물을 공급한 실험군에서 높았으나, 식 이효율은 각 군간 차이 가 없었다.
- 5% 추출물 투여군으로 나누어 4주간 사육하였으며, 물과 실험식이는 자유롭게 공급하였다. 본 실험에 사용한 식이(Table 1)는 AIN-76 diet조성에 준하여 결명자 에탄올 추출물을 각각 0.25%, 0.5%되 게 첨 가하여 공급하였고, 체중은 매주 측정하였으며, 식이섭취량은 격일에 한번 측정하였다. 실험동물은 처치전 12시간동안 물만 주고 금식시켰으며, 에테르 마취호].
- 즉, 간 1 g에 1.15% KC19 mL을 가하여 Teflon Potter- El vehjem homogenizer로 마쇄 한 후 600<g에 서 10분간 원 심분리 하여 그 상층액을 과산화지질분석을 위 한 시료로 사용하였으며, 표준물질로서는 1, 1, 3, 3, -tetraethoxypropane을 사용하였다. 간조직 중의 지 질은 Fclch법 (19)으로 추출한후 분석 kit을 사용하여 총콜레스테롤과 중성지방의 함량을 측정하였다.
- 에 개복한 후 복부대동맥으로부터 채혈하고 간을 적출하여 식 염수로 씻은 후 trimming하여 무게를 측정한 후 측정 시까지 -70°C에서 보관하였다. 채취한 혈액은 실온에서 1시간 이내로 방치시킨 다음 lOOOXg에서 10분간 원심분리하여 혈청을 얻어 분석에 사용하였다.
- 혈청중 지질함량 및 ALT, AST활성의 측정은 (주)신양화학의 kit을 이용하여 분석하였다. 즉, 총콜레스테롤은 Choles- tezyme-V, 중성지방은 Triglyzyme-V, 유리콜레스테롤은 SICDIA L F-CHO, HDL-콜레스테롤은 HDL-C555, 유리 지방산은 NEFA-zyme-S로 함량을 측정 하였으며, AST및 ALT 는 Reitman과 Frankel의 방법(15)에 준한 혈청 지오티, 지피티 측정세트를 사용하여 측정하였다.
대상 데이터
- NADP와 glucose-6-phosphate는 Boehringer Mann- heim사로부터 구입하였고 1, 1, 3, 3-tetraethoxypropane은 Sig- ma사로부터 , 혈 청 지 질 및 효소활성 측정 에 사용한 kit는 (주) 신양화학으로부터 구입하여 사용하였으며, 나머 지 시약은 일급이상의 것을 사용하였다.
- 실험 재료로 사용한 결명자는 1998년 경북 고령산을 구입하였다. NADP와 glucose-6-phosphate는 Boehringer Mann- heim사로부터 구입하였고 1, 1, 3, 3-tetraethoxypropane은 Sig- ma사로부터 , 혈 청 지 질 및 효소활성 측정 에 사용한 kit는 (주) 신양화학으로부터 구입하여 사용하였으며, 나머 지 시약은 일급이상의 것을 사용하였다.
- 실험동물은 6주령된 Sprague Dawley계 수컷 흰쥐를 대한바이오링크(주)로부터 구입하여 1주일간 기본식이로 적응시킨 후, 난괴 법 에 의 해 정 상군, 1% cholesterol 첨 가군, 0.25% 추출물 투여 군, 0.5% 추출물 투여군으로 나누어 4주간 사육하였으며, 물과 실험식이는 자유롭게 공급하였다. 본 실험에 사용한 식이(Table 1)는 AIN-76 diet조성에 준하여 결명자 에탄올 추출물을 각각 0.
데이터처리
- 1)Values are means ± SE (n=8) and those in the same row not sharing common superscript letters are significantly different at P<0.05 by Duncan's multiple range test.
- 1)Values are means ± SE (n=8) and those in the same row not sharing common superscript letters are significantly different atp<0.05 by Duncan's multiple range test.
- 2)Values are means ± SE (n=8) and those in the same row not sharing common superscript letters are significantly different at p<0.05 by Duncan's multiple range test.
- 5)Values are means ± SE (n=8) and those in the same row not sharing common superscript letters are significantly different at p<0.05 by Duncan's multiple range test.
- 실험결과는 SAS를 이용하여 실험군당 평균 士 표준 오차로나 타내었으며 각 군의 유의 차 검 정은 분산분석을 한 후 a = 0.05 수준에서 Duncan의 다중비교법에 의해 검증하였다.
이론/모형
- 마쇄하여 얻은 균질 액을 4"C, 20, 000 xg에서 10분간 원심분리 하여 postmitochondrial supernatant를 얻어 이 를 Glucose- 6 phosphate dehydrogenase]G6PDH)오)" malic enzyme(ME) 활성 측정 을 위 한 효소원으로 사용하였다. G6PDH활성 은 NA- DP가 glucose-6-phosphate를 산화시켜 생성된 NADPH의양을 측정 하는 Bergmeyer의 방법 (16)에 준하였으며 , ME 활성은 효소에 의해 환원된 NADPH의 생성율을 측정하는 O- choa의 방법(17)에 따라 분석하였다.
- 각 효소원의 단백질 양은 Lowry법(20)에 의 해 정량하였고, 표준품으로는 bovine serum albumin을 사용하였다.
- 15% KC19 mL을 가하여 Teflon Potter- El vehjem homogenizer로 마쇄 한 후 600<g에 서 10분간 원 심분리 하여 그 상층액을 과산화지질분석을 위 한 시료로 사용하였으며, 표준물질로서는 1, 1, 3, 3, -tetraethoxypropane을 사용하였다. 간조직 중의 지 질은 Fclch법 (19)으로 추출한후 분석 kit을 사용하여 총콜레스테롤과 중성지방의 함량을 측정하였다.
- 과산화지 질의 분석은 Ohkawa 등(18)의 방법 에 따라 분석하였다. 즉, 간 1 g에 1.
- kit을 이용하여 분석하였다. 즉, 총콜레스테롤은 Choles- tezyme-V, 중성지방은 Triglyzyme-V, 유리콜레스테롤은 SICDIA L F-CHO, HDL-콜레스테롤은 HDL-C555, 유리 지방산은 NEFA-zyme-S로 함량을 측정 하였으며, AST및 ALT 는 Reitman과 Frankel의 방법(15)에 준한 혈청 지오티, 지피티 측정세트를 사용하여 측정하였다.
성능/효과
- 0.5% 결명자 추출물을 투여한 군의 ME활성은 고콜레스테롤 대조군에 비하여 유의하게 감소하여 정상식이 군과 비슷하였다. G6PDH활성 역시 결명자 에탄올 추출물 첨가 군에서 고콜레스테롤 식이.
- 간장의 glucose-6-phosphate dehydroge- nase와 malic enzyme 활성 을 측정 한 결과, 결명자 추출물 군에서는 대조군에 비하여 활성이 유의하게 감소하였으며, 추출물의 첨 가농도가 높을수록 현저 하였다. ALT, AST활성 역시 결명자 추출물군은 고콜레스테롤 대조군에 비하여 감소하는 경향이었고, 간장 조직중의 지질과산화물 함량도 결명자 추출물을 첨 가함에 따라 통계적 유의 차는 없었으나 감소하는 경향이었다.
- ALT활성도 통계적 유의 차는 없었으나 AST활성 과 동일한 경 향을 나타내었다. AST와 ALT 활성은 고지방식이나 알콜 등으로 지방간이 유발되었거나 간독성 물질에 의 해 간세포가 손상되 어 이들 효소가 방출되 어혈 중의 효소활성도가 높아지 게 되는데(36) 본 실험의 결과로 볼 때 고콜레스테롤 식이로 인한 간의 손상을 결명자 에탄올 추출물이 완화시켜주는 역할을 하는 것으로 사료된다. 실제 결명자 에탄올 추출물은 사염화탄소로 독성을 유발시 킨 흰쥐에 있어서 간장내 증가된 ALT, AST, ALP, 7 -GTP등 간 기능 관련 효소활성를 현저하게 감소시킴으로서 사염화 탄소 유발 독성을 감소시 키는 것으로 보고되 어 있다(37).
- 실제 결명자 에탄올 추출물은 사염화탄소로 독성을 유발시 킨 흰쥐에 있어서 간장내 증가된 ALT, AST, ALP, 7 -GTP등 간 기능 관련 효소활성를 현저하게 감소시킴으로서 사염화 탄소 유발 독성을 감소시 키는 것으로 보고되 어 있다(37). 간 조직 중의 지질과산화물의 함량을 보면 고콜레스테롤식이 대조군은 정상식이군에 비하여 15% 정도 증가하였으나, 결명자 에탄올 추출물의 급여로 인하여 감소하여 정 상식 이군보다도 오히 려 낮은 값을 나타내 었다. Choi 등(3®은 결명 자의 메탄올 추출물에서 free radical 소거 작용이 있음을 보고하였고, Kim 등(39)은 결명자 에탄올추출물과 nor-rubrofusarin이 free radical 소거 작용 및 reactive oxygen radical에 의 한 산화적스트레스 억제활성이 있다고 보고하였다.
- 간장중의 총 콜레스테롤과 중성지방의 함량은 고콜레스테롤 식이에 의하여 유의하게 증가하였으나 결명자 추출물을 첨가함으로서 증가된 간장 지질함량은 유의하게 감소하였다. 간장의 glucose-6-phosphate dehydroge- nase와 malic enzyme 활성 을 측정 한 결과, 결명자 추출물 군에서는 대조군에 비하여 활성이 유의하게 감소하였으며, 추출물의 첨 가농도가 높을수록 현저 하였다. ALT, AST활성 역시 결명자 추출물군은 고콜레스테롤 대조군에 비하여 감소하는 경향이었고, 간장 조직중의 지질과산화물 함량도 결명자 추출물을 첨 가함에 따라 통계적 유의 차는 없었으나 감소하는 경향이었다.
- 결명자 추출물군의 혈청 총콜레스테롤, 유리 콜레스테롤, 중성지방 및 유리지방산 함량은 대조군에 비하여 감소하는 경향이었다. 간장중의 총 콜레스테롤과 중성지방의 함량은 고콜레스테롤 식이에 의하여 유의하게 증가하였으나 결명자 추출물을 첨가함으로서 증가된 간장 지질함량은 유의하게 감소하였다. 간장의 glucose-6-phosphate dehydroge- nase와 malic enzyme 활성 을 측정 한 결과, 결명자 추출물 군에서는 대조군에 비하여 활성이 유의하게 감소하였으며, 추출물의 첨 가농도가 높을수록 현저 하였다.
- 체중증가량과 식이섭 취 량은 추출물을 공급한 실험군에서 높았으나, 식 이효율은 각 군간 차이 가 없었다. 결명자 추출물군의 혈청 총콜레스테롤, 유리 콜레스테롤, 중성지방 및 유리지방산 함량은 대조군에 비하여 감소하는 경향이었다. 간장중의 총 콜레스테롤과 중성지방의 함량은 고콜레스테롤 식이에 의하여 유의하게 증가하였으나 결명자 추출물을 첨가함으로서 증가된 간장 지질함량은 유의하게 감소하였다.
- 한편, HDL-콜레 스테롤은 항동맥경화의 지표로서 콜레스테롤을 말초혈관으로부터 간으로 운반하여 동맥 경화를 막는 방향으로 콜레스테롤을 이동시 켜 관상동맥 질환에 대한 방어 작용을 한다고 알려져 있다(23-28). 고콜레스테롤 대조군의 HDL-콜레스테롤 함량은 정상군에 비하여 약 50%정도 감소하였으나 결명자 추출물을 첨가함으로써 대조군에 비 하여 증가하는 경향을 나타내었다. Table 4에는 간장중의 총 콜레스테롤과 중성지방의 함량을 나타내었다.
- 고콜레스테롤 대조군의 혈청 총콜레스테롤 함량은 정 상군에 비하여 약간 증가하였고, 결명자 에탄올 추출물 군에서 감소하는 경 향이 었으며, 특히 0.5% 추출물군은 정 상군의 함량과 비슷한 수준으로 감소하였으나 통계적 유의차는 없었다. 혈청 유리콜레스테롤은 고콜레스테롤 식이를 섭취함에 따라 유의하게 증가하였고 결명자 추출물군에서는 대조군에 비하여 유의하게 감소하였으며, 결명자 에탄올 추출물의 첨가량이 증가할수록 감소하여 dose response를 나타내었다.
- Table 4에는 간장중의 총 콜레스테롤과 중성지방의 함량을 나타내었다. 고콜레스테롤 식이 대조군의 간장 총 콜레스테롤 함량은 정상군에 비하여 유의하게 증가하였으나, 결명자 추출물을 0.25% 첨가함으로써 유의하게 감소하였다. 중성 지 방 함량도 총 콜레스테 롤과 마찬가지 로 0.
- 3 Karmen unit로 높아졌다. 그러나 0.25% 결명자 에탄올 추출물을 공급하였을 때에 AST활성은 대조군에 비 하여 감소하는 경 향을 나타내 었고, 0.5% 추출물 투여 군에서 는 정 상식 이 군과 거의 동일한 수준으로 감소하였다. ALT활성도 통계적 유의 차는 없었으나 AST활성 과 동일한 경 향을 나타내었다.
- G6PDH활성 역시 결명자 에탄올 추출물 첨가 군에서 고콜레스테롤 식이.대조군에 비하여 유의하게 감소되었으며 , G6PDH와 ME 모두 추출물의 첨 가농도가 높을수록활성 이 더 낮은 것으로 나타났다. Cho 등(33, 34)은 고콜레스테롤식 및 고지방식을 섭취한 흰쥐에서 기장 메탄올 추출물이 G6PDH와 ME의 활성을 유의 하게 감소시 켰으며, 기장의 이러한 활성은 식이섬유가 아닌 다른 유효화합물에 기인할 것으로 추측하였다.
- 즉 간조직 중의 G6PDH나 ME의 활성 을 낮추는 인자는 비 정상적 인 지 방대사와 관련된 위 험 인자를 줄이 게 되는 것이 다. 본 실험결과 결명자에는 고콜레스테롤 식이섭취시 G6PDH 와 ME의 활성을 억제하는 유효성분이 존재하며, 결명자 에탄올 추출물에 의한 이들 효소활성의 감소가 혈액 및 간장의 지질 함량저하에도 관여하였을 것으로 생각된다.
- 일반적으로고 콜레스테롤 식이를 섭취한 흰쥐에서는 간장중에 중성지 질 및 콜레스테롤 등이 축적되어 간중량의 증가를 초래하며 또한 과량의 콜레스테롤이 간장으로 유입되었으나 지질 수용체와 결합하여 lipoprotein의 형태로 배출되지 못하면 간에 축적되어 지방간을 유발시킬수 있다(21, 22). 본 실험에서도 간 조직의 중량은 정상군에 비하여 고콜레스테롤 대조군에서 크게 증가하였고 결명 자 추출물군에서도 높은 값을 나타내었으나 체중에 대한 간중량비는 4군 모두 거의 비슷하였다. 따라서 본 실험조건에서 나타난 결명자 추출물 투여에 따른 체중증가 및 간중량의 증가는 사료섭 취 량의 증가에 기 인한 것으로 판단되 며 향후 paired-fed 실험 이 필요하다고 사료된다.
- 총 식이섭취량은 정상군에 비하여 고콜레스테롤 대조군이 약간 높은 경 향이었으며 결명자 추출물군은 대조군에 비하여 유의하게 높게 나타났다. 사료섭취량에 대한 체중증가량으로 환산한 식 이 효율은 각 군 거 의 비 슷한 값을 나타내었고 0.5% 추출물군에서는 오히려 낮은 값을 나타내어 결명자 추출물군에서 체중증가량이 높은 경향을 보였던 것은 사료 섭취량의 증가에 의한 것으로 판단되었다. 일반적으로고 콜레스테롤 식이를 섭취한 흰쥐에서는 간장중에 중성지 질 및 콜레스테롤 등이 축적되어 간중량의 증가를 초래하며 또한 과량의 콜레스테롤이 간장으로 유입되었으나 지질 수용체와 결합하여 lipoprotein의 형태로 배출되지 못하면 간에 축적되어 지방간을 유발시킬수 있다(21, 22).
- 혈청 유리콜레스테롤은 고콜레스테롤 식이를 섭취함에 따라 유의하게 증가하였고 결명자 추출물군에서는 대조군에 비하여 유의하게 감소하였으며, 결명자 에탄올 추출물의 첨가량이 증가할수록 감소하여 dose response를 나타내었다. 유리 지 방산도 유리 콜레 스테롤과 유사한 경 향을 나타내 었으나 통계적 유의차는 없었으며 혈청 중성지방 함량도 결명자 추출물을 첨가함에 따라 대조군에 비하여 감소하는 경향이었고 05% 추출물 첨 가군은 21% 감소하였다. 한편, HDL-콜레 스테롤은 항동맥경화의 지표로서 콜레스테롤을 말초혈관으로부터 간으로 운반하여 동맥 경화를 막는 방향으로 콜레스테롤을 이동시 켜 관상동맥 질환에 대한 방어 작용을 한다고 알려져 있다(23-28).
- Choi 등(3®은 결명 자의 메탄올 추출물에서 free radical 소거 작용이 있음을 보고하였고, Kim 등(39)은 결명자 에탄올추출물과 nor-rubrofusarin이 free radical 소거 작용 및 reactive oxygen radical에 의 한 산화적스트레스 억제활성이 있다고 보고하였다. 이러한 점을 고려해볼 때 결명자의 항산화 효과가 결명자 추출물에 의한 과산화지 질 생 성 을 감소시 키 고 AST 및 ALT활성 을 감소시 키 는한 요인으로 작용한 것으로 판단되었다.
- 체중증가량은 군 간의 통계 적 유의 차는 없었으나 결명 자 추출물군이 가장 높았고 정 상군과 고콜레스테롤 대조군은 비슷한 값을 나타내었다. 총 식이섭취량은 정상군에 비하여 고콜레스테롤 대조군이 약간 높은 경 향이었으며 결명자 추출물군은 대조군에 비하여 유의하게 높게 나타났다. 사료섭취량에 대한 체중증가량으로 환산한 식 이 효율은 각 군 거 의 비 슷한 값을 나타내었고 0.
- 5% 추출물군은 정 상군의 함량과 비슷한 수준으로 감소하였으나 통계적 유의차는 없었다. 혈청 유리콜레스테롤은 고콜레스테롤 식이를 섭취함에 따라 유의하게 증가하였고 결명자 추출물군에서는 대조군에 비하여 유의하게 감소하였으며, 결명자 에탄올 추출물의 첨가량이 증가할수록 감소하여 dose response를 나타내었다. 유리 지 방산도 유리 콜레 스테롤과 유사한 경 향을 나타내 었으나 통계적 유의차는 없었으며 혈청 중성지방 함량도 결명자 추출물을 첨가함에 따라 대조군에 비하여 감소하는 경향이었고 05% 추출물 첨 가군은 21% 감소하였다.
후속연구
- 본 실험에서도 간 조직의 중량은 정상군에 비하여 고콜레스테롤 대조군에서 크게 증가하였고 결명 자 추출물군에서도 높은 값을 나타내었으나 체중에 대한 간중량비는 4군 모두 거의 비슷하였다. 따라서 본 실험조건에서 나타난 결명자 추출물 투여에 따른 체중증가 및 간중량의 증가는 사료섭 취 량의 증가에 기 인한 것으로 판단되 며 향후 paired-fed 실험 이 필요하다고 사료된다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.