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가설 설정
- 2)0 kGy and 10 kGy test materials were extract juices.
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제안 방법
- S9 mix 1 mL중의 조성 은 8 .Jimol MgCh - 6H2O, 33 Umol KC1, 5 nmol G-6-P, 4 nmol NADPH, 4 Umol NADH, 100 Umol sodium phosphate buffer(pH7.4) 및 45 UL S9 fraction으로 하여 단백질 함량을 L6mg/mL 되게 조제하였다. 처리 농도는 0.
- 각 플라스크당 제작된 표본 중 염색 상태가 양호한 1매씩을 선정하여, 1, 000배의 배율로 관찰, 계수하였다. 염색체이상의 형 태 판별 및 계수는 일본환경변이원학회(JEMS) 포유동물시험분과회(MMS) 판 '염색체이상 아틀라스'(15)에 따랐다.
- acephala) 및 신선초(AngeJia가ceiskei)를 이용하여 A사에서 상법으로 가공하였다. 감마선 조사는 가공 직후 한국 원자력 연구소 내 선원 10만 Ci, Co-60 감마선 조사시설을 이용하여 실온에서 분당 70 Gy의 선량율로 각각 1, 20 kGy의 총 흡수 선량을 얻도록 하였으며, 흡수선량 확인은 ceric cerous dos- imeter(USA)를 사용하였고 총 흡수선량의 오차는 ±0.2 kGy 였다. 감마선을 조사한 시료는 동결건조(SFDSF 12, Sam- won freezing engineering co.
- 감마선 조사를 위한 녹즙은 돌미나리 (Oemnt旋 stolonifera DC.), 당근(Daucus carota L.), 케 일(Brassica oleracea var. acephala) 및 신선초(AngeJia가ceiskei)를 이용하여 A사에서 상법으로 가공하였다. 감마선 조사는 가공 직후 한국 원자력 연구소 내 선원 10만 Ci, Co-60 감마선 조사시설을 이용하여 실온에서 분당 70 Gy의 선량율로 각각 1, 20 kGy의 총 흡수 선량을 얻도록 하였으며, 흡수선량 확인은 ceric cerous dos- imeter(USA)를 사용하였고 총 흡수선량의 오차는 ±0.
- 숫적 이상의 계수는 염색 체이상의 유무에 관계없이 염색체 수에 따라 diploid(DP, 23-36 동원 체), polyploid (PP, 37 < 동원 체 ) 및 핵내배화(ER, endoreduplication)로 분류, 100 중기 상당 관찰되는 빈도를 기 록하였다. 계수한 중기 상은 이 상이 없는 정상중기상과 1개 이상의 이상을 가진 이상 중 기상으로 대별하고, 각 플라스크에 대해 100개의 중기상당 관찰되는 이상중기상의 수 및 이상의 개수를 표시하였다. 결과의 판정은 시험물질 처리군에 있어서 이상중기상의 빈도가 음성대조군에 비해 확실히 증가하고 그 작용에 재현성이 있으며 용량의존성을 나타낼 경우 양성으로 판정 하였다.
- 이상은 염색체형 절단 및 교환과 염색분체형 절단 및 교환으로 대별해 계수하였으며, 이상을 가진 중기상(이상중기상) 의 빈도 및 염색체이상의 수는 gap을 포함한 경우와 제외한 경우를 병기하였다. 구조적 이상의 계수는 각 표본당 염 색 체가 잘 퍼진 100개의 분열중기상(23〜27 동원 체)에 대하여 염색체 수 및 염색체이상의 유무를 관찰하고, 염색체이상이 관찰되면 이상의 종류와 수 및 슬라이드 상의 위치를 기록하였다. 숫적 이상의 계수는 염색 체이상의 유무에 관계없이 염색체 수에 따라 diploid(DP, 23-36 동원 체), polyploid (PP, 37 < 동원 체 ) 및 핵내배화(ER, endoreduplication)로 분류, 100 중기 상당 관찰되는 빈도를 기 록하였다.
- 05 이하일 때 유의성이 있는 것으로 판정하였다. 또, 시험물질 처리군에 있어서 염색체이상을 가진 중기상의 빈도가 음성대조군에 비해 확실히 증가하고 그 작용에 재현성이 있으며 용량 의존성을 나타낼 경우 양성으로 판정하였다.
- 음성 대조군은 각 증류수 10011L, 그리 고 양성 대 조군은 대 사활성 계 미 적용 시 SA, 4 NQO 및 9-AA를, 대사활성 계 적용시 2-AA를 각각 10011L씩 가하여 같은 방법으로 실시하였다, 시험 결과는 각 농도군 당 3 plate로부터 얻은 colony수의 평 균과 표 준 편 차로 나타내 었고 복귀돌연변이 cokmy수가 농도의 존성 을보이 면서 용매대조군의 2배 이상인 경우를 양성으로 하였다. 또한 실험 에 사용된 시료와 돌연변이 유발물질의 농도는 예비실험을 통해 결정하였다.
- 활성 대사 효소계 적용 및 미적용 6시간 처리군의 경우 처리종료 시각에 처리 액을 제거하고 5 mL의 Ca'*과 Mg'* free Dul- becco's phosphate buffered saline(CMF D-PBS)로 세포층을 1회 세척한 후 신선한 배양액 5 mL를 분주하여 다시 배양을 시작하였다. 모든 플라스크에 대해 시험물질 처리 개시로부터 약 22시간 경과 후에 콜히친(최종농도 1UM)을 각 플라스크에 처리하여 2시간 경과 후 진탕법으로 중기세포를 수거, 공기 건조법 으로 염 색 체표본을 제 작하고 5% Giemsa액 으로염색하여 염색체이상을 계수하였으며 표본은 각 플라스크당 2매씩 제작하였다.
- 본 시험법은 배양세포에서의 염색체 이상의 검출을 목적으로 하는 시험 계로서 통상적으로 시험물질처 리 후 최초의 유사 분열 시에 세포를 분석한다.
- 이 상중 기상의 빈도에 대한 통계처리는 gap을 제외한 숫자만을 대상으로 실시하였으며, 각 중기상을 염색체이상이 없는 것 (normal metaphase, 정상중기상)과 1 개 이상의 이상을 포함한 것 (aberrant metaphase, 이상중기상)으로 나누고, 이상 중기 상의 빈도에 대해 다음과 같이 통계처리를 실시하였다. 숫적 이상에 대해서는 중기상을 DP, PP 및 ER로 분류하여 DP+ER의 빈도에 대 해 같은 방법 으로 실시 하였다. 통계 처 리는 SAS program을 이용하였으며, P value가 0.
- 구조적 이상의 계수는 각 표본당 염 색 체가 잘 퍼진 100개의 분열중기상(23〜27 동원 체)에 대하여 염색체 수 및 염색체이상의 유무를 관찰하고, 염색체이상이 관찰되면 이상의 종류와 수 및 슬라이드 상의 위치를 기록하였다. 숫적 이상의 계수는 염색 체이상의 유무에 관계없이 염색체 수에 따라 diploid(DP, 23-36 동원 체), polyploid (PP, 37 < 동원 체 ) 및 핵내배화(ER, endoreduplication)로 분류, 100 중기 상당 관찰되는 빈도를 기 록하였다. 계수한 중기 상은 이 상이 없는 정상중기상과 1개 이상의 이상을 가진 이상 중 기상으로 대별하고, 각 플라스크에 대해 100개의 중기상당 관찰되는 이상중기상의 수 및 이상의 개수를 표시하였다.
- 시 험 에 사용된 균주는 Salmonella typhimurium LT2를 친 주로 하는 S typhimurium TA98, TA100, TA1535, TA1537 로, 이들 균주는 사용에 앞서 Maron & Ames 원저(11)에 제시된 방법에 따라 유전적 특성을 확인하였다.
- 10 kGy로 적용시 켰을 때 in uifr。에서 유전독성 학적 안전성 평 가의 일환으로 Salmonella typhimurium 균주를 이용한 복귀 돌연 변 이 실 험 과 Escherichia coli PQ37 균주를 이 용한 SOS chromotest 및 CHL(Chinese hamster lung fibro blast) 세포를 이용한 염색체 이상시험을 수행하였다.
- 5 ml/lask로 하였다. 음성 대조군으로는 용매만을 처리하였으며 양성 대조군으로는 활성 대사 효소 계부 재시 EMS(Ethylmethanesulfonate)를, 활성대사효소계 존재 시 CPA(Cyclophosphamide . 田0)를 사용하였다. 시험에 사용한 Chinese hamster lung fibroblast(CHL) 세 포는 염 색체의 수가 25개이며, 1회 세포주기는 15시간으로서 염색체이상시험에 적합한 조건을 갖춘 세포로서 한국화학연구소로부터 기증받아 사용하였고 실험은 Ishidate 등(13) 및 Dean과 Danford(14)의 방법을 참고해 이에 준하여 실시하였다.
- 0 rrL와 혼합하여 minimal gli「 cose agar배지에 부어 고화시 킨 다음 37°C에서 48시간 동안 배양한 후 복귀돌연변이 집락수를 계수하였다. 음성 대조군은 각 증류수 10011L, 그리 고 양성 대 조군은 대 사활성 계 미 적용 시 SA, 4 NQO 및 9-AA를, 대사활성 계 적용시 2-AA를 각각 10011L씩 가하여 같은 방법으로 실시하였다, 시험 결과는 각 농도군 당 3 plate로부터 얻은 colony수의 평 균과 표 준 편 차로 나타내 었고 복귀돌연변이 cokmy수가 농도의 존성 을보이 면서 용매대조군의 2배 이상인 경우를 양성으로 하였다. 또한 실험 에 사용된 시료와 돌연변이 유발물질의 농도는 예비실험을 통해 결정하였다.
- 6 mL의 균 배양액을 분주하고 여기에 100 卩/assay의 시 료를 혼합한 다음, 37°C 에서 210 rpm으로 2시간 배양하였다. 이 때 첨가된 양성대조물질(돌연변이 원)의 사용량은 dose response test를 실시하여 최적의 농도를 설정한 후 사용하였다.
- 결과의 판정은 시험물질 처리군에 있어서 이상중기상의 빈도가 음성대조군에 비해 확실히 증가하고 그 작용에 재현성이 있으며 용량의존성을 나타낼 경우 양성으로 판정 하였다. 이 상중 기상의 빈도에 대한 통계처리는 gap을 제외한 숫자만을 대상으로 실시하였으며, 각 중기상을 염색체이상이 없는 것 (normal metaphase, 정상중기상)과 1 개 이상의 이상을 포함한 것 (aberrant metaphase, 이상중기상)으로 나누고, 이상 중기 상의 빈도에 대해 다음과 같이 통계처리를 실시하였다. 숫적 이상에 대해서는 중기상을 DP, PP 및 ER로 분류하여 DP+ER의 빈도에 대 해 같은 방법 으로 실시 하였다.
- 6 mL의 L medium을 현탁시켰다. 이 현탁액 0.2 mL를 취하여 Quillard어:와 Hofnung의 방법 (12)과 동일하게 각각의 효소 활성을 측정하였다. 활성 단위는 흡광도 X 1, 000/반응시 간(min)으로 나타냈으며 , R(ratio) 값은 p-galactosidase unit/alkaline phosphatase unit로 계산하였고, R(0)값을 1로 정 하였다.
- 염색체이상의 형 태 판별 및 계수는 일본환경변이원학회(JEMS) 포유동물시험분과회(MMS) 판 '염색체이상 아틀라스'(15)에 따랐다. 이상은 염색체형 절단 및 교환과 염색분체형 절단 및 교환으로 대별해 계수하였으며, 이상을 가진 중기상(이상중기상) 의 빈도 및 염색체이상의 수는 gap을 포함한 경우와 제외한 경우를 병기하였다. 구조적 이상의 계수는 각 표본당 염 색 체가 잘 퍼진 100개의 분열중기상(23〜27 동원 체)에 대하여 염색체 수 및 염색체이상의 유무를 관찰하고, 염색체이상이 관찰되면 이상의 종류와 수 및 슬라이드 상의 위치를 기록하였다.
- 먼저 세포농도는 2 X IO* cells/5 mL로 조절하여 약 3일간 배양하였다. 활성대사효소계 미적용 처리의 경우 두 개의 그룹으로 나누어, 배양액을 모두 제거한 후 신선한 배양액 4.5 mL를각 플라스크에 분주하여 1시간 이상 배양한 후 시험 물질 용액 (500 UL)를 분주하여 합계 5 mL이 되도록 하여 각각 6시 간 및 24시간 처리하였다. 활성대사효소계 적용6시간 처리 군의 경우 기존 배양액을 제거하고 신선한 배양액 2.
대상 데이터
- 2 kGy 였다. 감마선을 조사한 시료는 동결건조(SFDSF 12, Sam- won freezing engineering co., Korea)하여 분말화 시킨 후 실험에 사용하였다.
- 본 시 험 에 사용된 균주는 M이ecular Toxicology Inc. (Boone, NC, USA)에서 구입하여 형질을 확인한 후 한국화학연구소 안전성 센터에서 계대 배양 중인 것을 시험에 사용하였다. 유전형질이 확인된 균주들을 nutrient bro나i(Oxoid Ltd.
- 田0)를 사용하였다. 시험에 사용한 Chinese hamster lung fibroblast(CHL) 세 포는 염 색체의 수가 25개이며, 1회 세포주기는 15시간으로서 염색체이상시험에 적합한 조건을 갖춘 세포로서 한국화학연구소로부터 기증받아 사용하였고 실험은 Ishidate 등(13) 및 Dean과 Danford(14)의 방법을 참고해 이에 준하여 실시하였다. 먼저 세포농도는 2 X IO* cells/5 mL로 조절하여 약 3일간 배양하였다.
- 양성 대조물질로 sodium azide (SA, Sigma-Aldrich Cheme Gmbh, Inc., Steinheim, Germany)는 증류수에 용해하였으며, 4-nitroquinoline~l^oxide(4NQO, Sigma™Aldrich Cheme Gmbh, Inc., Steinheim, Germany), 9-aminoacridine(9-AA, Sigma-Aldrich Cheme Gmbh, Inc., Steinheim, Germany) 및 2-aminoanthracene(2-AA, Sigma-Aldrich Cheme Gmbh, Inc., Steinheim, Germany)는 DMSO(Aldrich Chemical Co., Inc., Milwa나kee, USA)에 용해하여 각 시험균주의 특성 에 맞추어 사용하였다.
데이터처리
- 숫적 이상에 대해서는 중기상을 DP, PP 및 ER로 분류하여 DP+ER의 빈도에 대 해 같은 방법 으로 실시 하였다. 통계 처 리는 SAS program을 이용하였으며, P value가 0.05 이하일 때 유의성이 있는 것으로 판정하였다. 또, 시험물질 처리군에 있어서 염색체이상을 가진 중기상의 빈도가 음성대조군에 비해 확실히 증가하고 그 작용에 재현성이 있으며 용량 의존성을 나타낼 경우 양성으로 판정하였다.
이론/모형
- SOS Chromotest는 Quillardet와 Hofnung의 방법(⑵에준하여 수행되 었다. 즉, L medium에 5xl08 CFU/mL 농도로 배양된 종배양액을 2%(v/v)가 되도록 접종하여 37°C에서 약 2시간 진탕배양(5X10시 CFU/mL) 하였다.
- 간 균질 액 (S9 fraction)은 Maron과 Ames의 방법 (11)에 따라 조제한 것 (단백질 함량 22.5 mg/mL 함유, Oriental Yeast Co, , Tokyo, Japan)을 사용하였다. S9 mix는 상기 S9 fraction 과 시판 cofactor(Wako Co.
- 시 험 물질의 처 리 는 각 농도군당 3개 plate를 사용하여 di rect plate incorporation 법으로 하였다. 복귀돌연변이 시 험은 S.
- 염색체이상의 형 태 판별 및 계수는 일본환경변이원학회(JEMS) 포유동물시험분과회(MMS) 판 '염색체이상 아틀라스'(15)에 따랐다. 이상은 염색체형 절단 및 교환과 염색분체형 절단 및 교환으로 대별해 계수하였으며, 이상을 가진 중기상(이상중기상) 의 빈도 및 염색체이상의 수는 gap을 포함한 경우와 제외한 경우를 병기하였다.
성능/효과
- 3) Sodium azide (SA), 4-nitroquinoline-1 -oxide (4-NQO), 9-aminoacridine (9-AA) and 2-aminoanthracene (2~AA) were used as positive controls for the corresponding strains.
- 3) Sodium azide (SA), 4-nitroquinoline-1 -oxide (4-NQO), 9-aminoacridine (9-AA) and 2-aminoanthracene (2~AA) were used as positive controls for the corresponding strains.
- 3) Sodium azide (SA), 4-nitroquinoline-1 -oxide (4-NQO), 9-aminoacridine (9-AA) and 2-aminoanthracene (2~AA) were used as positive controls for the corresponding strains.
- 3) Sodium azide (SA), 4-nitroquinoline-1 -oxide (4-NQO), 9-aminoacridine (9-AA) and 2-aminoanthracene (2~AA) were used as positive controls for the corresponding strains.
- 유발능을 조사한 결과는 Table 5〜8과 같다. 각 시험 에서 음성대조군의 IF값은 1.5이하였으며 양성대조 화합물에 의해 IF값이 현저히 증가하여 본 실험이 적합하게 행하여졌음을 알 수 있었다.
- 0〜 lExlScells/mL로 적 정 수준이었다. 각 시험 에서 음성대조군의 복귀 돌연변이 집 락수는 문헌치 (11) 의범위 이내였으며 양성대조 화합물에 의해 복귀돌연변이 집락 수가 현저히 증가하여 본 실험이 적합하게 행하여졌음을 알 수 있었다.
- Table 1 〜4와 같다. 감마선 조사 및 비조사된 돌미나리, 당근, 케일 및 신선초 녹즙의 예비시험결과에 따라 모든 시 료는 10, 000 Rg/plate를 최 고 농도로 설 정 하여 실 험 을 수행하였고, 시험에 사용한 4개 균주의 생균수는 흡광도에 의한 측정 결과 1.0〜 lExlScells/mL로 적 정 수준이었다. 각 시험 에서 음성대조군의 복귀 돌연변이 집 락수는 문헌치 (11) 의범위 이내였으며 양성대조 화합물에 의해 복귀돌연변이 집락 수가 현저히 증가하여 본 실험이 적합하게 행하여졌음을 알 수 있었다.
- 계수한 중기 상은 이 상이 없는 정상중기상과 1개 이상의 이상을 가진 이상 중 기상으로 대별하고, 각 플라스크에 대해 100개의 중기상당 관찰되는 이상중기상의 수 및 이상의 개수를 표시하였다. 결과의 판정은 시험물질 처리군에 있어서 이상중기상의 빈도가 음성대조군에 비해 확실히 증가하고 그 작용에 재현성이 있으며 용량의존성을 나타낼 경우 양성으로 판정 하였다. 이 상중 기상의 빈도에 대한 통계처리는 gap을 제외한 숫자만을 대상으로 실시하였으며, 각 중기상을 염색체이상이 없는 것 (normal metaphase, 정상중기상)과 1 개 이상의 이상을 포함한 것 (aberrant metaphase, 이상중기상)으로 나누고, 이상 중기 상의 빈도에 대해 다음과 같이 통계처리를 실시하였다.
- 결과적으로, 포유류 배 양세포를 이 용하여 방사선 조사 및 비 조사된 녹즙의 염색체 이상시험을 수행한 결과 대사활성계의 부재 및 존재하 모두 음성의 결과를 나타내어 이상의 실험 결과로 미루어 보아 녹즙의 위 생화를 위해 방사선 조사를 이용하는 방법은 포유동물 배양세포에 대해 직접 변이 원으로서 뿐만 아니라 간접변이원으로서도 작용하지 않는 안전한 방법이라 사료된다.
- 차이 를 보이 지 않았다. 따라서 감마선 조사된 녹즙의 SOS Chromotest 실험결과 감마선 조사한 시료 및 비조사 시료에 대하여 전 시험적용농도에서 돌연변이를 유발하지 않는 것으로 보아 감마선 조사에 의한 돌연변이원성은 없는 것으로 판단되었고, 감마선 조사된 녹즙이 직접변이원이나 간접 변이 원으로 작용하지 않음을 알 수 있었다. 이와 같은 결과는 감마선 조사된 장류의 SOS chrometest 실시 결과 유전독성학적으로 안전하다는 보고(19)와도 잘 일치하였다.
- 일반적으로 돌연변이원성의 판정은 음성대조구 복귀변이 집락수의 2배 이상인 경우를 양성으로 하므로 본 실험의 감마선 조사한 시료 및 조사하지 않은 시료에 대하여 전 시험적용농도에서 복귀변이를 유발하지 않는 것으로 보아 감마선 조사에 의한 돌연변이원성은 없는 것으로 판단되었다. 따라서 고선량으로 감마선 조사된 녹즙이 직접변이원이나 간접 변이 원으로 작용하지 않음을 알 수 있었다. 이와 같은 결과는 유전독성학적 변이원성시험에서 쇠고기의 감마선 조사가 돌연변이를 유발하지 않았다는 Kang 등(16)의 결과와 감마선 조사된 생약재가 유전독성학적으로 안전하였다는 Jo 등(17)의 보고 및 최근 감마선 조사된 장류의 몰추출 분획에 대한 Ames test 결과 유전독성학적으로 안전하였다는 연구결과 (18)와도 잘 일치하였다.
- 따라서 녹즙의 위 생화에 방사선 조사기술을 적용할 경우 상당한 효과가 기대되며, 이미 녹즙의 위생화를 위해 3~5 kGy의 감마선을 조사했을 경우 4°C에서 12일까지 생균수를 10° cfu/mL 이하로 유지시킬 수 있었고 녹즙의 total ascorbic acid와 탄닌의 함량이 증가되었으며, chlorophyll, carotenoid 의 함량 및 전자공여능, peroxidase의 활성은 감마선 조사에 의해 영향을 받지 않았다(10)는 긍정적 효과가 보고된 바 있으나 아직까지 안전성 평가에 대한 결과는 제시되지 못하고 있다.
- IF값을 나타내었다. 또 대사활성계를 도입한 즉 S-9 mixture를 첨가한 상태에서도 각각의 시험적용 농도에서 대조 구와 방사선 조사구 모두 1.5이하의 유사한 IF값을 보였다.
- 이 상시 험 을 수행 한 결과는 Table 9~ 12와 같다. 먼저 활성 대사 효소계 부재시의 경우, 6시간 처리군에 있어서 이상 중기 상 및 염색체이상의 빈도는 음성대조군, 2, 500 Hg/mL 처리군, 5, 000Ug/mL 처리군 및 10, 000Ug/mL 처리군 모두 0〜3 범위였으며, 시험물질을 처리한 모든 군에서 이상 중기 상의빈도는 음성대조군에 비해 통계학적으로 유의한 증가를 나타내지 않았다. 음성대조군의 polyploid의 빈도는 0.
- 음성대조군의 polyploid의 빈도는 0.0이 었으며 핵내배화는 관찰되지 않았고, 시험물질 처리군의 polyploid 및 핵내배화 빈도는 음성대조군에 비해 통계학적으로 유의한 증가를 보이 지 않았다. 한편 양성 대조군에 서 는 이 상중 기상의 빈도에서 통계 학적 으로 유의 하며 확실한 증가가 관찰 되었다 (p<0.
- 먼저 활성 대사 효소계 부재시의 경우, 6시간 처리군에 있어서 이상 중기 상 및 염색체이상의 빈도는 음성대조군, 2, 500 Hg/mL 처리군, 5, 000Ug/mL 처리군 및 10, 000Ug/mL 처리군 모두 0〜3 범위였으며, 시험물질을 처리한 모든 군에서 이상 중기 상의빈도는 음성대조군에 비해 통계학적으로 유의한 증가를 나타내지 않았다. 음성대조군의 polyploid의 빈도는 0.0이 었으며 핵내배화는 관찰되지 않았고, 시험물질 처리군의 polyploid 및 핵내배화 빈도는 음성대조군에 비해 통계학적으로 유의한 증가를 보이 지 않았다. 한편 양성 대조군에 서 는 이 상중 기상의 빈도에서 통계 학적 으로 유의 하며 확실한 증가가 관찰 되었다 (p<0.
- 재현성이 있으며 조작이 간단하고 단기 간에 많은 화학물질을 취급할 수 있는 장점이 있다. 일반적으로 돌연변이원성의 판정은 음성대조구 복귀변이 집락수의 2배 이상인 경우를 양성으로 하므로 본 실험의 감마선 조사한 시료 및 조사하지 않은 시료에 대하여 전 시험적용농도에서 복귀변이를 유발하지 않는 것으로 보아 감마선 조사에 의한 돌연변이원성은 없는 것으로 판단되었다. 따라서 고선량으로 감마선 조사된 녹즙이 직접변이원이나 간접 변이 원으로 작용하지 않음을 알 수 있었다.
- 시 험 물질 처 리 군의 polyploid 및 핵 내 배화 빈도는 음성대조군에 비해 통계학적으로 유의한 증가를 보이지 않았다. 한편 양성대조군에서는 이상중기상의 빈도에서 통계학적으로 유의 하며 확실한 증가가 관찰되 었다(p<0.01).
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