[국내논문]도라지 추출물 첨가에 의한 돌나물의 항발암 상승효과 Enhancement of Anticarcinogenic Effect by Combination of Sedum sarmentosum Bunge with Platycodon grandiflorum A. Extracts원문보기
본 연구는 다른 산채류에 비해 칼슘이 칼슘이 특히 많은 우수한 식품으로 예부터 물김치나 겉절이 무침, 돌나무 김치로 많이 이용되어온 돌나물의 암세포 증식억제 및 암예방 효과를 검색하고 나아가 도라지 추출물과의 암세포 증식억제 상승효과를 보기 위하여 실시하였다. 돌나물의 암세포 증식억제 효과를 MTT assay로 실험한 결과, 3종의 암세포주(HepG2, HeLa, MCF-7) 모두 돌나물의 ethylether 분획층(SSMEE)에서 아주 높은 암세포 증식억제 효과를 보였으며, ethylacetate 분획층(SSMEA)에서도 유의적인 암세포 증식억제 효과를 나타내었다. 또한, 돌나물 분획물의 암예방 QR유도 활성을 HepG2 세포주를 이용하여 실험한 결과, 다른 분획층에 비해 비극성 용매층인 ethylether 분획층(SSMEE)과 hexane 분획층(SSMH)에서 유의적으로 QR유도 활성을 증가시키는 것으로 나타났다. 한편, 돌나물과 도라지와의 일정비 조합을 통해 상승효과를 본 결과, $IC_{50}$/이 되는 도라지의 butanol층 (PGMB)dfm 일정량 첨가했을 때 용매별 돌나물의 분획층 모두에서 암세포 증식억제를 상승시키는 효과를 나타내었고, 암예방 QR 유도활성 효과도 훨씬 상승하였으므로, 돌나물 조리시 유사한 부재료를 사용하는 도라지의 성분을 일정량 첨가하여 겉절이 무침이나 김치로 이용될 때 돌나물 성분의 생리활성 효과가 더욱 상승될 것으로 사료되며, 이후 돌나물의 생리활성 물질 구조 및 기전 규명에 유익한 자료가 될 것으로 사료된다.
본 연구는 다른 산채류에 비해 칼슘이 칼슘이 특히 많은 우수한 식품으로 예부터 물김치나 겉절이 무침, 돌나무 김치로 많이 이용되어온 돌나물의 암세포 증식억제 및 암예방 효과를 검색하고 나아가 도라지 추출물과의 암세포 증식억제 상승효과를 보기 위하여 실시하였다. 돌나물의 암세포 증식억제 효과를 MTT assay로 실험한 결과, 3종의 암세포주(HepG2, HeLa, MCF-7) 모두 돌나물의 ethylether 분획층(SSMEE)에서 아주 높은 암세포 증식억제 효과를 보였으며, ethylacetate 분획층(SSMEA)에서도 유의적인 암세포 증식억제 효과를 나타내었다. 또한, 돌나물 분획물의 암예방 QR유도 활성을 HepG2 세포주를 이용하여 실험한 결과, 다른 분획층에 비해 비극성 용매층인 ethylether 분획층(SSMEE)과 hexane 분획층(SSMH)에서 유의적으로 QR유도 활성을 증가시키는 것으로 나타났다. 한편, 돌나물과 도라지와의 일정비 조합을 통해 상승효과를 본 결과, $IC_{50}$/이 되는 도라지의 butanol층 (PGMB)dfm 일정량 첨가했을 때 용매별 돌나물의 분획층 모두에서 암세포 증식억제를 상승시키는 효과를 나타내었고, 암예방 QR 유도활성 효과도 훨씬 상승하였으므로, 돌나물 조리시 유사한 부재료를 사용하는 도라지의 성분을 일정량 첨가하여 겉절이 무침이나 김치로 이용될 때 돌나물 성분의 생리활성 효과가 더욱 상승될 것으로 사료되며, 이후 돌나물의 생리활성 물질 구조 및 기전 규명에 유익한 자료가 될 것으로 사료된다.
Anticarcinogen is one of the major strategies for cancer control. It is well established that dietary factors play an important role in modulating the development of certain types of human cancer. We investiagted the anticarcinogenic effects of Sedum sarmentosum Bunge (SS) with Platycodon grandiflor...
Anticarcinogen is one of the major strategies for cancer control. It is well established that dietary factors play an important role in modulating the development of certain types of human cancer. We investiagted the anticarcinogenic effects of Sedum sarmentosum Bunge (SS) with Platycodon grandiflorum A. extracts on HepG2, HeLa and MCF-7 cell lines. By the MTT assay, among the five partition layers of methanol extract of SS (SSM), the ethylether partition layer of SS (SSMEE) showed the strongest cytotoxic effects on all cell lines. We also investigated the synergistic effect of the combination of SS and PG extracts on growth inhibition of the HepG2, HeLa and MCF-7 cell lines compared to the effects of five partition layers of SSM. Combination of SS and PG extracts significantly increased cytotoxic effects on all cell lines. Therefore, we were able to conclude that ethylether partition layer, SSMEE might have potentially useful cytotoxic materials on all the human cancer cells which we used. And we could suggest that the combination of SS with PG enhanced the anticarcinogenic effect on HepG2, HeLa and MCF-7 cell lines. We also determined QR activity of partition layers of SSM, among them, SSMEE on HepG2 cells showed the highest QR activity, 3.21 as control value of 1.0.
Anticarcinogen is one of the major strategies for cancer control. It is well established that dietary factors play an important role in modulating the development of certain types of human cancer. We investiagted the anticarcinogenic effects of Sedum sarmentosum Bunge (SS) with Platycodon grandiflorum A. extracts on HepG2, HeLa and MCF-7 cell lines. By the MTT assay, among the five partition layers of methanol extract of SS (SSM), the ethylether partition layer of SS (SSMEE) showed the strongest cytotoxic effects on all cell lines. We also investigated the synergistic effect of the combination of SS and PG extracts on growth inhibition of the HepG2, HeLa and MCF-7 cell lines compared to the effects of five partition layers of SSM. Combination of SS and PG extracts significantly increased cytotoxic effects on all cell lines. Therefore, we were able to conclude that ethylether partition layer, SSMEE might have potentially useful cytotoxic materials on all the human cancer cells which we used. And we could suggest that the combination of SS with PG enhanced the anticarcinogenic effect on HepG2, HeLa and MCF-7 cell lines. We also determined QR activity of partition layers of SSM, among them, SSMEE on HepG2 cells showed the highest QR activity, 3.21 as control value of 1.0.
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문제 정의
, PG) 의추출물을 일정량 첨가함으로서 두 식재료의 조합이 가지는 항 발암 상승효과를 함께 측정 하였다. 즉, 50% 암세포 성장을 억 제 시 키는(ICg) 도라지 의 butanol 분획 물 일정량을 돌나물의 각 분획물에 첨가함으로서 도라지 butanol 첨가에 의한 돌나물의 각 분획별 항발암 상승효과를 함께 측정하여 다음과 같은 결과를 얻었으므로 이에 보고하는 바이디-.
본 연구는 다른 산채류에 비 해 칼슘이 특히 많은 우수한 식품으로 엣부터 물김치나 겉절이 무침, 돌나물 김치로 많이 이용되 어 온 돌나물의 암세포 증식 억 제 및 암예방 효과를 검색 하고 나아가 도라지 추출물과의 암세포 증식 억 제 상승효과를 보기 위하여 실시하였다. 돌나물의 암세포 증식 억제 효과를MTT assay로실험한 결과, 3종의 암세포주(HepG2, HeLa, MCF-7) 모두 돌나물의 ethylether 분획층(SSMEE)에서 아주 높은 암세포 증식 억 제 효과를 보였으며, ethylacetate 분획 층(SSMEA)에서도 유의적인 암세포 증식억제 효과를 나타내 었다.
제안 방법
민간요법에서는 잎의 즙을 곪은 상처에 붙이거나 식욕증진, 볼걸이 등에 사용하였고, 최근에는 항암 작용이 있다고 알려져 간암의 치료제로 이용되고 있다(20). 본 연구에서는 돌나물을 각 용매별로 분획 하여 각각 인체 암 세포주 HepG2, Hela 및 MCF-7에 첨 가함으로써 시료의 농도별 암세포 증식 억 제 효과와 암예 방 QR 유도 활성 등 생리 활성 물질의 영 향을 밝혀내었다. 또한, 일상 식 생활에서 돌나물의 조리 시와 같이 초고추장 등 유사 부재료를 사용하여 음식으로 섭 취 하는 도라지 (.
본 연구에서는 돌나물을 각 용매별로 분획 하여 각각 인체 암 세포주 HepG2, Hela 및 MCF-7에 첨 가함으로써 시료의 농도별 암세포 증식 억 제 효과와 암예 방 QR 유도 활성 등 생리 활성 물질의 영 향을 밝혀내었다. 또한, 일상 식 생활에서 돌나물의 조리 시와 같이 초고추장 등 유사 부재료를 사용하여 음식으로 섭 취 하는 도라지 (.Platycodon grandiflorum A., PG) 의추출물을 일정량 첨가함으로서 두 식재료의 조합이 가지는 항 발암 상승효과를 함께 측정 하였다. 즉, 50% 암세포 성장을 억 제 시 키는(ICg) 도라지 의 butanol 분획 물 일정량을 돌나물의 각 분획물에 첨가함으로서 도라지 butanol 첨가에 의한 돌나물의 각 분획별 항발암 상승효과를 함께 측정하여 다음과 같은 결과를 얻었으므로 이에 보고하는 바이디-.
이 시료를 추출 . 분획하여 각 암세포주에 대한 암세포증식 억 제 효과(cytotoxicity)와 quinone reductase(QR) 유도 활성 물질 검색에 사용하였다.
시료로 사용된 돌나물(SS)은 건조 후 분말화하여 메탄을을 첨 가흐]: 후 37°C에 서 진탕한 후 4시 간 동안 3회 반복 추출하고 회 전식 진공 농축기 로 감압 농축시 킨 후 동결 건조하여 돌나물의 methanol 추출물(SSM)을 얻고, 이 추출물을 각 용매 별로 분획 하여 hexane층(S$MH), ethylether층(SSMEE), ethylacetate층(SSMEA), butanol층(SSMB) 및 수층분획 물 (SSMA)로 각각 분획 하고 각 층을 감압 농축 후 동결 건조하여 분말로 만들어 시료로 사용하였다. 첨가시료인 도라지의 butanol 분획 물(PGMB)도 위 와 같은 조작으로 제조하여 사용하였다.
원리를 이용한다. 이를 위 해 각 세포주를 1 X 105 cells/ well의 농도로 맞추고 24 well에 각각 ImL씩 첨가하여 24시간 동안 37°C, 5% COa incubator에서 배 양한 후 용매 종류별 분획 물을 각각 일 정 량의 dimethyl sulfoxide(DMSO) 에 녹여서 50, 100, 150, 200 및 250 ug/m丄의 농도로 첨 가하였다. 48시간 동안 배 양한 후 각 well에 PBS 완충액 에 녹인 MTT 용액 (3 mg/mL)을 100 虬씩 첨 가하여 4시 간 동안 다시 배 양시킨 후, well 바닥에 형성 된 formazan이 홉어 지 지 않게 상등액을 제거 하고 DMSO와 ethanol을 1:1로 혼합한 용액 1 mL를 첨가하여 천천히 녹인 후 UV-visible spectrophotometer를 이용하여 570 nm, 690 nm에서 각각 흡광도를 측정 하여 대조 군세 포수를 100%로 하였을 때의 상대적 인 세포성장 억 제율을 구하였다.
이를 위 해 각 세포주를 1 X 105 cells/ well의 농도로 맞추고 24 well에 각각 ImL씩 첨가하여 24시간 동안 37°C, 5% COa incubator에서 배 양한 후 용매 종류별 분획 물을 각각 일 정 량의 dimethyl sulfoxide(DMSO) 에 녹여서 50, 100, 150, 200 및 250 ug/m丄의 농도로 첨 가하였다. 48시간 동안 배 양한 후 각 well에 PBS 완충액 에 녹인 MTT 용액 (3 mg/mL)을 100 虬씩 첨 가하여 4시 간 동안 다시 배 양시킨 후, well 바닥에 형성 된 formazan이 홉어 지 지 않게 상등액을 제거 하고 DMSO와 ethanol을 1:1로 혼합한 용액 1 mL를 첨가하여 천천히 녹인 후 UV-visible spectrophotometer를 이용하여 570 nm, 690 nm에서 각각 흡광도를 측정 하여 대조 군세 포수를 100%로 하였을 때의 상대적 인 세포성장 억 제율을 구하였다.
QR생성 유도 효과는 Prochaska와 Santamaria의 빙법 (23, 24)을 일부 변형하여 측정하였다. 즉 T-75 flask에서 배양 중인 HepG2세포가 80%이 상 증식 하게 되 면 24 well plate의 각 well에 lx# cells/mL 되도록 HepG2세壬를 분주하여, 37 °C 5% CO2 incubator에 24시 간 동안 배 양한 후 돌나물 추출물을 각각 DMSO 에 녹여 40, 60, 80 및 100 Ug/mL의 농도로첨 가하고, 다시 24시 간 동안 배 양한 다음 배 양액을 제 거 하였다.
일부 변형하여 측정하였다. 즉 T-75 flask에서 배양 중인 HepG2세포가 80%이 상 증식 하게 되 면 24 well plate의 각 well에 lx# cells/mL 되도록 HepG2세壬를 분주하여, 37 °C 5% CO2 incubator에 24시 간 동안 배 양한 후 돌나물 추출물을 각각 DMSO 에 녹여 40, 60, 80 및 100 Ug/mL의 농도로첨 가하고, 다시 24시 간 동안 배 양한 다음 배 양액을 제 거 하였다. 배지가 제거된 각 well에 250 UL의 lysis buffer (10 mM Tris HC1, pH 8.
돌나물의 메탄올 추출물과 각 용매별 분획 물에, 돌나물 조리 시 에 쓰이는 초고주장 등 유사한 부재료를 사용하는 도라지 (Platycodon grandiflorum A.) 일정 량을 첨가하여 돌나물에 미치는 도라지 분획물 항발암 효과를 실험하였다. 즉 도라지 의 butanol 분획 물을 ICso의 농도 인 40 Ug/mL를 취 해 돌나물 각 분획물에 동량 첨가하여 도라지 일정량 첨가에 의한 돌나물의 항발암 상승효과를 보기 위해서 암세포 증식억제 효과(MTT assay)와 암예방 QR 유도 상승효과를 측정하여도 라지 첨가전의 돌나물 분획물만의 효과와 비교 검토하였다.
) 일정 량을 첨가하여 돌나물에 미치는 도라지 분획물 항발암 효과를 실험하였다. 즉 도라지 의 butanol 분획 물을 ICso의 농도 인 40 Ug/mL를 취 해 돌나물 각 분획물에 동량 첨가하여 도라지 일정량 첨가에 의한 돌나물의 항발암 상승효과를 보기 위해서 암세포 증식억제 효과(MTT assay)와 암예방 QR 유도 상승효과를 측정하여도 라지 첨가전의 돌나물 분획물만의 효과와 비교 검토하였다.
돌나물(SS)을 메탄올로 추출하여 추출물(SSM)을 얻었으며 , 이 메탄올 추출물을 hexane(SSMH), ethylether(SSM- EE), ethylacetate(SSMEA), butanol(SSMB) 및 수증(SS- MA)의 용매별로 분획 하였다. 각 시 료의 용매 별 추출 분획 물의 수율은 Table 1과 같다.
돌나물과 유사한 조리 방법으로 자주 식 탁에 오르는 도라지 를 분획 한 후 ICso이 되 는 butanol 분획층 일정 성 분을 돌나물 시료에 각각 첨 가하여 항발암 상승효과를 측정 하였다. Ta ble 2는 도라지 의 butanol 분획 층인 PGMB를 3종의 인체 암 세포주(HepG2, HeLa, MCF-7) 에 20, 40, 60, 80 및 100 Ug/mL 첨 가시 농도별 증가에 의 한 암세포 증식 억 제 효과를 나타낸 결과로서, 이 결과에서 ICa)의 농도는 약 40 lig/m止에 해당되므로, 본 연구는 돌나물에 도라지 butanol 분획층의 IC50의농도 40 Ug/mL를 각각 첨가하여 돌나물의 추출물에 미치는 도라지 추출물의 상승효과를 측정하여 Fig.
Ta ble 2는 도라지 의 butanol 분획 층인 PGMB를 3종의 인체 암 세포주(HepG2, HeLa, MCF-7) 에 20, 40, 60, 80 및 100 Ug/mL 첨 가시 농도별 증가에 의 한 암세포 증식 억 제 효과를 나타낸 결과로서, 이 결과에서 ICa)의 농도는 약 40 lig/m止에 해당되므로, 본 연구는 돌나물에 도라지 butanol 분획층의 IC50의농도 40 Ug/mL를 각각 첨가하여 돌나물의 추출물에 미치는 도라지 추출물의 상승효과를 측정하여 Fig. 5, 6 및 7에 그 결과를 나타내었다.
대상 데이터
본 실험 에 사용된 돌나물(Sedum sarmentosum Bunge, SS) 은 2000년 5월 부산 엄궁 농수산물시장에서 구입 하여 음건하였다. 이 시료를 추출 .
암세 포 증식 억제 실험 에 사용된 시약 중 NP-40과 menad- ione은 Sigma사(St. Louis, USA) 제품을 사용하였고 flavin adenine di nucleotide (FAD), dicumarol 및 glucose-6-phos- phate dehydrogenase는 Amresco사(USA) 제품을 구입하였으며, minimum essential medium(MEM), Dulbeco's Eagle modified medium(DMEM)과 phosphate buffered saline (PBS) 등은 Gibco-BRL(Grand Island Biologic Co., USA)에서 구입하였으며 , 그 외 연구에 사용된 용매 및 시 약은 특급을 사용하였다.
분말로 만들어 시료로 사용하였다. 첨가시료인 도라지의 butanol 분획 물(PGMB)도 위 와 같은 조작으로 제조하여 사용하였다.
본 실험에 사용한 암세포주는 인체 간암 세포인 HepG2 (human hepatocellular carcinoma), 자궁 경 부암 세포인 HeLa (human cervices adenocarcinoma) 및 유방암 세포인 MCF 7(human breast adenocarcinoma pleural effusion)로서 2000 년 5월 한국세포주은행 任forean Cell Line Bank, KCLB) 에서구입 하였다. HepG2, HeLa 및 MCF-7세포주는 DMEM me- dium에 10% fetal bovine serum(FBS) 100 rnL와 1% 100 units/mL의 penicillin streptomycin lOmL이 함유된 배지를 사용하여 .
데이터처리
Standard deviations have been omitted for simplicity. All data were significantly different aV ^<0.05 by Duncan's multiple range test.
Standard deviations have been omitted for simplicity. All data were significantly different at p<0.05 by Duncan's multiple range test.
이론/모형
돌나물 추출 분획 물의 암세 포 증식 억 제 효과는 MTT assay 를 사용하여 행하였다(21, 22).
4) 혼합액을 250 uL씩 첨가하여 효소 반응을 정 지 시 키 고, UV-visible spectrophotometer를 이 용하여 610 nm에서 흡광도를 측정 하여 계산하였다. 그리 고 단백질량은 동일한 set의 well plate에 대 한 crystal violet 염 색 방법으로 정량하였다.
성능/효과
보기 위하여 실시하였다. 돌나물의 암세포 증식 억제 효과를MTT assay로실험한 결과, 3종의 암세포주(HepG2, HeLa, MCF-7) 모두 돌나물의 ethylether 분획층(SSMEE)에서 아주 높은 암세포 증식 억 제 효과를 보였으며, ethylacetate 분획 층(SSMEA)에서도 유의적인 암세포 증식억제 효과를 나타내 었다. 또한, 돌나물 분획 물의 암예방 QR유도 활성 을 Hep- G2세포주를 이용하여 실험한 결고" 다른 분획층에 비해 비극성 용매층인 ethylether 분획층(SSMEE)과 hexane 분획층 (SSMH) 에서 유의 적으로 QR유도 활성을 층가시 키는 것으로 나타났다.
Fig. 1은 인체 간암세포주인 HepG2에 용매별 각 시료 분획 물을 100, 200, 300, 400 및 500 Ug/mL씩 농도를 증가시키며 첨가하였을 때의 암세포 증식억제 효과를 나타낸 것이며, 다른 용매 분획층에 비 해 ethylether층인 SSMEE에서 그 효괴-가 아주 뛰 어 났다一 즉, SSMEE의 시 료 농도 200 卩g/mL을 첨가했을 때 다른 분획 물보다 약 70.1%의 높은 암세포 증식 억 제 효과를 보였고, 계속 농도 의 존적 으로 암세포 증식 억제 효과가 증가하여 300 Ug/mL를 첨 가했을 때 는 94.7%의 아주 높은 암세포 억제 효과가 나타났다. 자궁경부암세포주인 He-La에 대한 암세포 증식 억 제 실험 결과는 Fig.
1의 HepG2 세포주에 대한 암세포 증식억제 효과와 유사한 결과를 나타내었다. 즉, 시료농도 200 Ug/mL을 첨가했을 때 SSMEE분획 물은 다른 분획 물의 경 우보다 월등히 암세포 증식 저해 효과가 커서 75.1%의 높은 수치를 보였오며 , 300 Ug/mL을 첨 가했을 때는 97.6%의 아주 높은 암세포증식 억 제 효과를 나타내 었디-. Fig.
6%의 아주 높은 암세포증식 억 제 효과를 나타내 었디-. Fig. 3은 유방암세포주인 MCF 7의 결과이 며 , 이 경 우에서 도 HepG2와 HeLa세포■주의 결과와 비 슷하게 나타났으며 , SSMEE를 200 Ug/mL을 첨가했을 때 이 미 94.7%의 아주 높은 암세포 증식 억 제 효과를 나타내었고, 300 Hg/mL 첨가의 경우 92.6% 억제효과를 나타내었다. 이 상의 결과에서 볼 때, 3종의 암세포주 모두 비극성 용매 부분인 ethylether 분획 층(SSMEE)에서 다른 분획 층보다 높은 암세포 증식 억제 효과(cytotoxicity)를 나타내었고, 3종의 암세포주 모두 ethylacetate층인 SSMEA에서도 다른 분획물에 비해 유의적인 효과를 나타내었디-.
6% 억제효과를 나타내었다. 이 상의 결과에서 볼 때, 3종의 암세포주 모두 비극성 용매 부분인 ethylether 분획 층(SSMEE)에서 다른 분획 층보다 높은 암세포 증식 억제 효과(cytotoxicity)를 나타내었고, 3종의 암세포주 모두 ethylacetate층인 SSMEA에서도 다른 분획물에 비해 유의적인 효과를 나타내었디-.
이 에 본 연구는 돌나물 추출물 및 분획물의 암예방 효소유도여 부를 조사하기 위 하여 암세포 증식 억 제 효과에 사용된 3종의 인체 암세포주 중 유일하게 quinone reductase를 가지 고 있는 간암세포주 HepG2를 사용하여 QR유도 활성 효과를 측정 하였으며, 그 결과는 Fig. 4에 나타내 었匸h 즉, HepG2 세포주에 각각의 시 료 분획 물을 40, 60, 80 및 100 Jig/mL의 농도로 첨가했을 때 돌나물의 ethylether 분획 층(SSMEE)과 hexane 분획층(SSMH)이 QR효소 활성을 월등히 증가시키는 것으로 나타났으며, 그 외의 분획층은 큰 영향을 미치지 않았다. SSMEE의 경 우 용매 대조군을 1.
4에 나타내 었匸h 즉, HepG2 세포주에 각각의 시 료 분획 물을 40, 60, 80 및 100 Jig/mL의 농도로 첨가했을 때 돌나물의 ethylether 분획 층(SSMEE)과 hexane 분획층(SSMH)이 QR효소 활성을 월등히 증가시키는 것으로 나타났으며, 그 외의 분획층은 큰 영향을 미치지 않았다. SSMEE의 경 우 용매 대조군을 1.0으로 하여 비교한결고}, 40.60, 80 및 100 Ug/mL의 시료첨가 농도에서 각각 1.72, 2.35, 2.91 및 3.21 로 농도 의존적 인 아주 높은 QR유도 활성효과를 나타내 었으며, SSMH의 경 우에서도 SSMEE으] 경 우와 유사하게 각각 1.67, 2.11, 2.31 및 3一05의 높은 QR 유도 활성효과를 나타내었다.
이상의 결과로서 암예방 효과의 척 도로 사용되 는 QR 유도 활성 효과는 특히, 돌나물 성분 중 친유성 성분이 녹아있는 ethylether 분획 층과 hexane 분획 층에 quinone reductase의 유도물질이 존재함으로서 돌나물 분획물 성분 중에 높은 생리활성 물질 존재를 추정할 수 있었다.
5는 인체 간암세포주인 HepG2에 돌나물 methanol 추출물과 각 5종류의 분획 물에 도라지 butanol 분획 물(PGMB) 40 Ug/mL을 첨가헸을 때의 암세포 증식 억제 상승효과를 얻은 결과로서, 돌나물의 모든 분획층에서 아주 높은 암세포 증식억제 상승 효과를 보였다. 특히 돌나물의 ethylether 분획 층인 SSMEE의 경우, SSMEE를 단독으로 100 pg/mL 첨가했을 때 암세포 증식억제 효과는 2.3%였으나, 같은 농도의 SSMEE에 PGMB 40 卩g/mL를 첨가했을 때에는 88.1%의 높은 암세포 억 제 상승효과를 보였으며, SSMEE를 200 lig/mL 증량시 켜 PGMB를 일정동량 첨가했을 경우, 첨가하지 않았을 때의 70.1% 억제에 반해, 첨가시 에는 95.9%의 아주 높은 암세포 증식 억 제 효과를 나타내 었고, 농도를 증량시 킴 에 따라 억제효과도 그대로 유지되었다. HeLa와 MCF 7의 결과를 나타낸 Fig.
5의 HepG2세포주의 결과와 유사한 높은 암세포 억 제 상승효과가 나타났다. 즉 Fig. 6에서는 SSMEE만의 경우 200 叩/mL일 때 75.1%이 었으나 도라지 첨가시에는높은농도에서 이미 97.0%의 암세포증식 억제 효과가 나타났으며 돌나불의 농도 증가에 따라 그 효과가 상승 유지되 었다. Fig.
0%의 암세포증식 억제 효과가 나타났으며 돌나불의 농도 증가에 따라 그 효과가 상승 유지되 었다. Fig. 6에서 보듯이 SSMEE에 비 해 효과가 미약했던 SSMEA, SSMH, SSMB, SSMA 및 SSM은 도라지추출물 첨가로 암세포 성장 억제효과가 메우 상승되었다. Fig.
8에 나타내었다. 즉, 돌나물 단독의 각각 시료 농도 40, 60, 80 및 100 Ug/mL를 가했을 때 QR 활성은 1.72, 2.35, 2.91 및 3.21.로 나타났으며 , 도라지 butanol 분획층인 PGMB를 10 Ug/mL을 각각 첨가한 결과 2.2, 2, 8, 3.6 및 4.8의 높은 QR 유도 상승효과를 나타내었다. 이 효과는 도라지 분획물 첨가 전보다 첨가시 훨씬 높은 QR 유도효과가 나타났으므로, 돌나물에 도라지의 butanol 일정량 첨가시의 항발암 상승 효과는, 우리 의 식 탁에서 거 의 같은 부재료를 사용해서 조리하는 돌나물과 도라지를 함께 조합하여 섭 취 했을 때 나타나는 여러 생리 활성 효과가 더욱 상승되 어질 것이라고 생각되며, 식품 속에 들어있는 기능성 믈질들의 조합이 항발암 건강 증진에 더욱 유익한 지표가 되리라 사료된다.
돌나물의 암세포 증식 억제 효과를MTT assay로실험한 결과, 3종의 암세포주(HepG2, HeLa, MCF-7) 모두 돌나물의 ethylether 분획층(SSMEE)에서 아주 높은 암세포 증식 억 제 효과를 보였으며, ethylacetate 분획 층(SSMEA)에서도 유의적인 암세포 증식억제 효과를 나타내 었다. 또한, 돌나물 분획 물의 암예방 QR유도 활성 을 Hep- G2세포주를 이용하여 실험한 결고" 다른 분획층에 비해 비극성 용매층인 ethylether 분획층(SSMEE)과 hexane 분획층 (SSMH) 에서 유의 적으로 QR유도 활성을 층가시 키는 것으로 나타났다. 한편, 돌나물과 도라지 와의 일정 비 조합을 통해 상승효과를 본 결과 IGo이 되 는 도라지의 butanol층(PGMB) 을 일정량 첨가했을 때 용매별 돌나물의 분획층 모두에서 암세포 증식억제를 상승시키는 효과를 나타내었고, 암예방 QR 유도활성 효과도 훨씬 상승하였으므로, 돌나물 조리시 유사한 부재료를 사용하는 도라지의 성분을 일정 량 첨가하여 겉절이 무침이나 김치로 이용될 때 똘나물 성분의 생리활성 효과가 더 욱 상승될 것 으로 사료되 며 , 이 후 돌나물의 생 리 활성 물질 구조 및 기 전 규명 에 유익 한 자료가 될 것으로 사료된다.
후속연구
8의 높은 QR 유도 상승효과를 나타내었다. 이 효과는 도라지 분획물 첨가 전보다 첨가시 훨씬 높은 QR 유도효과가 나타났으므로, 돌나물에 도라지의 butanol 일정량 첨가시의 항발암 상승 효과는, 우리 의 식 탁에서 거 의 같은 부재료를 사용해서 조리하는 돌나물과 도라지를 함께 조합하여 섭 취 했을 때 나타나는 여러 생리 활성 효과가 더욱 상승되 어질 것이라고 생각되며, 식품 속에 들어있는 기능성 믈질들의 조합이 항발암 건강 증진에 더욱 유익한 지표가 되리라 사료된다.
또한, 돌나물 분획 물의 암예방 QR유도 활성 을 Hep- G2세포주를 이용하여 실험한 결고" 다른 분획층에 비해 비극성 용매층인 ethylether 분획층(SSMEE)과 hexane 분획층 (SSMH) 에서 유의 적으로 QR유도 활성을 층가시 키는 것으로 나타났다. 한편, 돌나물과 도라지 와의 일정 비 조합을 통해 상승효과를 본 결과 IGo이 되 는 도라지의 butanol층(PGMB) 을 일정량 첨가했을 때 용매별 돌나물의 분획층 모두에서 암세포 증식억제를 상승시키는 효과를 나타내었고, 암예방 QR 유도활성 효과도 훨씬 상승하였으므로, 돌나물 조리시 유사한 부재료를 사용하는 도라지의 성분을 일정 량 첨가하여 겉절이 무침이나 김치로 이용될 때 똘나물 성분의 생리활성 효과가 더 욱 상승될 것 으로 사료되 며 , 이 후 돌나물의 생 리 활성 물질 구조 및 기 전 규명 에 유익 한 자료가 될 것으로 사료된다.
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