목적: 베타입자 방출 핵종을 표지한 항체를 임상적으로 이용하기 위해서는 높은 비방사능을 가지는 것이 중요하다. $^{188}W/^{188}Re$ 발생기를 사용하여 쉽게 얻을 수 있는 무담체 $^{188}Re$은 이런 목적에 이상적인 방사성 핵종이다. 하지만 높은 비방사능의 $^{188}Re$이 표지된 항체는 높은 베타 에너지(2.1 MeV)로 인한 불안정성이 문제가 된다. 우리는 $^{188}Re$이 표지된 항체의 안정성을 확보하기 위해 몇 가지 안정제가 미치는 영향에 대해서 조사하였다. 대상 및 방법: 환원시킨 단일클론항체(CEA79.4)에 stannous tartrate와 발생기에서 용출한 $^{188}Re-perrhenate$를 넣어 실온에서 2시간 반응시켰다. 각각의 방사화학적순도는 크로마토그라피를 써서 확인하였다. 표지된 항체에 사람 혈청 알부민(HSA)을 첨가(최종농도 2%)하고 ascorbic acid, ethanol, Tween 80 존재 하에서의 안정성을 각각 조사하였다. 결과: 표지된 항체의 비방사능은 $1.25{\sim}4.77MBq/{\mu}g$, 표지 효율은 $88{\pm}4%\;(n=12)$였다. 안정제로 ascorbic acid, ethanol, Tween 80을 첨가하였을 때 $N_2$ 존재 하에서 모든 경우에 10시간까지 안정하였으나, 공기와 접촉 시 10시간 후에 방사화학적순도는 각각 처음의 100, 45, 36%가 되었다. 과산화레늄(perrhenate)과 $^{188}Re-tartrate$의 증가가 주된 요인이었으며 콜로이드 형성은 모든 경우에 큰 영향을 끼치지 않았다. Ascorbic acid 첨가는 공기 중에서 perrhenate의 형성을 줄임으로서 항체의 안정성에 가장 많이 기여하였다. 결론: 높은 비방사능의 $^{188}Re$이 표지된 항체는 공기 중에 노출되었을 때 불안정하였으며, ascorbic acid 첨가시 안정성을 향상시킬 수 있었다.
목적: 베타입자 방출 핵종을 표지한 항체를 임상적으로 이용하기 위해서는 높은 비방사능을 가지는 것이 중요하다. $^{188}W/^{188}Re$ 발생기를 사용하여 쉽게 얻을 수 있는 무담체 $^{188}Re$은 이런 목적에 이상적인 방사성 핵종이다. 하지만 높은 비방사능의 $^{188}Re$이 표지된 항체는 높은 베타 에너지(2.1 MeV)로 인한 불안정성이 문제가 된다. 우리는 $^{188}Re$이 표지된 항체의 안정성을 확보하기 위해 몇 가지 안정제가 미치는 영향에 대해서 조사하였다. 대상 및 방법: 환원시킨 단일클론항체(CEA79.4)에 stannous tartrate와 발생기에서 용출한 $^{188}Re-perrhenate$를 넣어 실온에서 2시간 반응시켰다. 각각의 방사화학적순도는 크로마토그라피를 써서 확인하였다. 표지된 항체에 사람 혈청 알부민(HSA)을 첨가(최종농도 2%)하고 ascorbic acid, ethanol, Tween 80 존재 하에서의 안정성을 각각 조사하였다. 결과: 표지된 항체의 비방사능은 $1.25{\sim}4.77MBq/{\mu}g$, 표지 효율은 $88{\pm}4%\;(n=12)$였다. 안정제로 ascorbic acid, ethanol, Tween 80을 첨가하였을 때 $N_2$ 존재 하에서 모든 경우에 10시간까지 안정하였으나, 공기와 접촉 시 10시간 후에 방사화학적순도는 각각 처음의 100, 45, 36%가 되었다. 과산화레늄(perrhenate)과 $^{188}Re-tartrate$의 증가가 주된 요인이었으며 콜로이드 형성은 모든 경우에 큰 영향을 끼치지 않았다. Ascorbic acid 첨가는 공기 중에서 perrhenate의 형성을 줄임으로서 항체의 안정성에 가장 많이 기여하였다. 결론: 높은 비방사능의 $^{188}Re$이 표지된 항체는 공기 중에 노출되었을 때 불안정하였으며, ascorbic acid 첨가시 안정성을 향상시킬 수 있었다.
Purpose: For clinical application of beta-emitter labeled antibody, high specific activity is imporiant. Carrier-free $^{188}Re$ from $^{188}W/^{188}Re$ generator is an ideal radionuclide for this purpose. However, low stability of $^{188}Re$ labeled antibody, especi...
Purpose: For clinical application of beta-emitter labeled antibody, high specific activity is imporiant. Carrier-free $^{188}Re$ from $^{188}W/^{188}Re$ generator is an ideal radionuclide for this purpose. However, low stability of $^{188}Re$ labeled antibody, especially in high specific activity, due to radiolytic decomposition by high energy (2.1 MeV) beta ray was problem. We studied the stability of $^{188}Re$ labeled antibody, and stabilizing effect of several stabilizers. Materials and Methods: Pre-reduced monoclonal antibody (CEA79.4) was labeled with $^{188}Re$ by incubating with generator-eluted $^{188}Re-perrhenate$ in the presence of stannous tartrate for 2 hr at room temperature. Radiochemical purity of each preparation was determined by chromatography. Human serum albumin was added to the labeled antibodies (2%). Stability of $^{188}Re-CEA79.4$ was investigated in the presence of ascorbic acid, ethanol, of Tween 80 as stabilizing agents. Results: Labeling efficiencies were $88{\pm}4%\;(n=12)$. Specific activities of $1.25{\sim}4.77MBq/{\mu}g$ were obtained. If stored after purging with $N_2$, all the preparations were stable for 10 hr. However, stability decreased in the presence of air. Perrhenate and $^{188}Re-tartrate$ was major impurity in declined preparation. colloid-formation was not a significant problem in all cases. Addition of ascorbic acid stabilized the labeled antibodies either under $N_2$ or under air by reducing the formation of perrhenate. Conclusion: High specific activity $^{188}Re$ labeled antibody is unstable, especially, in the presence of oxygen. Addition of ascorbic acid increased the stability.
Purpose: For clinical application of beta-emitter labeled antibody, high specific activity is imporiant. Carrier-free $^{188}Re$ from $^{188}W/^{188}Re$ generator is an ideal radionuclide for this purpose. However, low stability of $^{188}Re$ labeled antibody, especially in high specific activity, due to radiolytic decomposition by high energy (2.1 MeV) beta ray was problem. We studied the stability of $^{188}Re$ labeled antibody, and stabilizing effect of several stabilizers. Materials and Methods: Pre-reduced monoclonal antibody (CEA79.4) was labeled with $^{188}Re$ by incubating with generator-eluted $^{188}Re-perrhenate$ in the presence of stannous tartrate for 2 hr at room temperature. Radiochemical purity of each preparation was determined by chromatography. Human serum albumin was added to the labeled antibodies (2%). Stability of $^{188}Re-CEA79.4$ was investigated in the presence of ascorbic acid, ethanol, of Tween 80 as stabilizing agents. Results: Labeling efficiencies were $88{\pm}4%\;(n=12)$. Specific activities of $1.25{\sim}4.77MBq/{\mu}g$ were obtained. If stored after purging with $N_2$, all the preparations were stable for 10 hr. However, stability decreased in the presence of air. Perrhenate and $^{188}Re-tartrate$ was major impurity in declined preparation. colloid-formation was not a significant problem in all cases. Addition of ascorbic acid stabilized the labeled antibodies either under $N_2$ or under air by reducing the formation of perrhenate. Conclusion: High specific activity $^{188}Re$ labeled antibody is unstable, especially, in the presence of oxygen. Addition of ascorbic acid increased the stability.
* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.
문제 정의
이 실험에서 우리는 비교적 높은 방사능의 188Re 표지 항체의 안정성을 확립하고자 하였다. 또 안정제를 사용할 경우 &Re 이 표지된 항체 (188Re CEA79.
1 MeV)로 인한 불안정성이 문제가 된다. 우리는 188Re이 표지된 항체의 안정성을 확보하기 위해 몇 가지 안정제가 미치는 영향에 대해서 조사하였다. 대상 및 방법: 환원시킨 단일클론항체(CEA79.
제안 방법
4)에 stannous tartrate 와 발생기에서 용출한 188Re-perrhenate를 넣어 실온에서 2시간 반응시켰다. 각각의 방사화학적순도는 크로마토그라피를 써서 확인하였다. 표지된 항체에 사람 혈청 알부민(HSA)을 첨가(최종농도 2%)하고 ascorbic acid, ethanol, Tween 80 존재 하에서의 안정성을 각각 조사하였다.
각각의 방사화학적순도는 크로마토그라피를 써서 확인하였다. 표지된 항체에 사람 혈청 알부민(HSA)을 첨가(최종농도 2%)하고 ascorbic acid, ethanol, Tween 80 존재 하에서의 안정성을 각각 조사하였다. 결과: 표지된 항체의 비방사능은 1.
항체의 안정성을 확립하고자 하였다. 또 안정제를 사용할 경우 &Re 이 표지된 항체 (188Re CEA79.4)의 방사능에 의한 손상을 억제할 수 있는지를 시간별로 방사화학적순도를 측정하여 확인하였다.
555, 1,110 MBq)를 넣고 실온에서 2시간동안 반응시켜 표지하였다. 표지된 항체의 방사화학적수율을 측정하기 위하여 ITLC-SG (Gelman Science, Michigan, USA)/acetone, ITLC-SG/ Umezawa (10% ammonium acetate:methanol= 1:1), 그리고 Whatman No. 1 (Whatman International Ltd, Maidstone,Eiigland)/saline을 사용하여 크로마토그라피를 실행하고 그 결과를 TLC 스캐너(AR2(X0 Bioscan, Washington, USA)를 이용하여 판독하였다.
188Re (278,555, 1110 MBq/2 ml)을 사용하여 표지한 항체에 20% 사람혈청알부민(최종농도 2%)을첨가하고 안정제로 20% ascorbic acid, 20% ethanol, 20% Tween 80을 최종농도가 1%가 되게 각각 넣은 후 방사화학적순도를 측정하였다. 공기와 질소 중에서의 안정성을 비교하기 위하여 안정제를 첨가한 188Re-CEA79.
방사화학적순도를 측정하였다. 공기와 질소 중에서의 안정성을 비교하기 위하여 안정제를 첨가한 188Re-CEA79.4를 질소충진 바이알과 개봉한 바이알에 나눈 후 방사화학적순도를 시간별(30분, 1, 2, 3, 6, 10, 24, 48 시간)로 조사하였다. 각 반응은 표지 항체에 안정제와 같은 부피의 증류수를 첨가한 것을 대조군으로 사용하여 비교하였다.
4를 질소충진 바이알과 개봉한 바이알에 나눈 후 방사화학적순도를 시간별(30분, 1, 2, 3, 6, 10, 24, 48 시간)로 조사하였다. 각 반응은 표지 항체에 안정제와 같은 부피의 증류수를 첨가한 것을 대조군으로 사용하여 비교하였다.
표지 효율은 크로마토그라피 로 측정 하였다(Fig.1). ITLC-SG/acetone에서는 188Re-perrhenate가 용매전단까지 올라갔고, ITLC-SG/Umezawa 에서는 188Re-perrhenate와 188Re-tartrate와 용매전단까지 올라갔으며, Whatman No.
우리는 188Re이 표지된 항체의 안정성을 확보하기 위해 몇 가지 안정제가 미치는 영향에 대해서 조사하였다. 대상 및 방법: 환원시킨 단일클론항체(CEA79.4)에 stannous tartrate 와 발생기에서 용출한 188Re-perrhenate를 넣어 실온에서 2시간 반응시켰다. 각각의 방사화학적순도는 크로마토그라피를 써서 확인하였다.
대상 데이터
단일클론항체 CEA79.4는 암태아성항원 (carci- noembryonic antigen, CEA) 에 특이적인 항체 (IgGza)로 CEA를 이용하여 서울대학교 의과대학 생화학교실에서 제조하였다.
성능/효과
4,5) 치료용 방사성 핵종으로는 알파선 방출 핵종과 베타선 방출 핵종이 있는데 주로 베타선방출 핵종을 이용한 연구가 많다.6) 방사면역치료용으로 적당한 베타선을 방출하는 방사성 핵종으로는 131I, 32p, 90Y 등이 있으며 최근에는 166Ho, 186Re, 188Re 등과 같은 핵종이 관심을 받고 있다.6-9) 이 중 188RE은 발생기를 이용하여 무담체로 쉽게 얻을 수있고, 치료용으로 적합한 여러 가지 물리적(Eβmax=2.
질소충진 싱태에서 188Re-CEA79.4는 ascorbic acid와 ethanol을 첨가한 경우 표지 방사능 양과 상관없이 48시간까지 안정한 것으로 나타났으며, Tween 80을 첨가하였을 때는 10시간 이후부터 서서히 안정성이 떨어지는 것이 관찰 되었다. 모든 경우 대조군과 유의한 차이는 없었다(Fig.
반면에 안정제로 ethanol과 Tween 80을 사용하였을 때는 표지 후 10시간까지는 방사화학적순도가 급격히 감소하며 이후는 서서히 감소하는 것으로 나타났다. 방사화학적 순도의 감소는 과산화레늄(perrhenate)의 생성(12~47%)과 188Re-tamrate의 증가 (9~38%)의 증가가 주된 요인이었으며 콜로이드의 형성은 모든 경우에 큰 영향을 미치지 않았다. mo MBq의 188Re을 사용하여 CEA79.
방사화학적 순도의 감소는 과산화레늄(perrhenate)의 생성(12~47%)과 188Re-tamrate의 증가 (9~38%)의 증가가 주된 요인이었으며 콜로이드의 형성은 모든 경우에 큰 영향을 미치지 않았다. mo MBq의188Re을 사용하여 CEA79.4 항체를 표지하였을 때 ethanol과 Tween 80의 경우 10 시간 후 방사화학적 순도는 38%와 31%로 감소하였으나, 278 MBq의 188Re을 표지하였을 때는 57%, 47%로 감소하여 표지 방사능의 양에 따라서도 안정성에 영향을 주는 것으로 나타났다.
방사선분해를 억제할 수 있는것으로 사람혈청알부민, cysteamine, glycerol 등이 알려져 있다.24) 사람혈청알부민의 첨가는 용액 속의전체 단백질의 함량을 늘려주기 때문에 188Re에서 방출되는 베타입자의 공격으로부터 항체를 효과적으로 방어할 수 있다.21) 또한 ascorbic acid는 항산화제로서 항체표지과정 중 방사선방어 제로서 작용함이 알려져있고,23) ethanol은 라디칼스카밴저로 작용하며,25) 계면활성제인 tween 80은 단백질안정제로 작용하여 방사선방어작용을 한다.
이상의 실험결과는 188Re 표지 항체를 가장 안정하게 보관하기 위해서는 먼저 질소충진 상태에서반응 및 보관을 하는 것이 좋으며, 안정제로 ascorbic acid를 사용하면 보다 확실하게 방사선분해를 억제할 수 있다는 것을 보여주었다
Ascorbic acid 첨가는 공기 중에서 perrhenate의 형성을 줄임으로서 항체의 안정성에 가장 많이 기여하였다. 결론: 높은 비방사능의 188Re이 표지된 항체는 공기 중에 노출되었을 때 불안정하였으며, ascorbic acid 첨가시 안정성을 향상시킬 수 있었다.
2와 3에서 보듯이 질소를 치환한 상태에서는 ascorbic acid, ethanol, Tween 80을넣은 것이 대조군과 유의한 차이를 보이지 않았다. 그러나 공기 중에서는 ascorbic acid를 넣은 경우는 상당히 안정하였으며, ethanol을 넣은 것은 대조군과 차이가 없었고, Tween 80을 넣은 것은 오히려 대조군보다 안정성을 감소시켰다. 따라서 안정성을 높이기 위해서는 산소와 차단하는 일이 가장 중요하다고 생각된다.
참고문헌 (25)
Eckelman WC, Paik CH, Reba RC. Radiolabelingof antibodies. Cancer Res 1980;40:3036-42.
Griffiths GL, Goldenberg DM, Diril H, HansenHJ. Technetium-99m, rhenium-186, and rhenium188direct-labeled antibodies. Cancer 1994;73:761-8.
Chung JK, Yeo J, Lee DS, Park S, Lee MC,Kim BK, et al. Bone marrow scintigraphy usingtechnetium-99m-antigranulocyte antibody in hematologicdisorders. J Nucl Med 1996;37:978-82.
Higuchi T, Inoue T, Sarwar M, Oriuchi N,Karasawa M, Naruse T, et al. Tc-99m- labelledchimeric human/mouse antigranulocyte antibodybone marrow scintigraphy: a preliminary clincalstudy. Nucl Med Comm 1998;19:463-74.
Mausner LF, Srivastava SC. Selection ofradionuclides for radioimmunotherapy. Med Phys1993;20:503-9.
John E, Thakur TJ, DeFulvio J, McDevitt MR,Damjanov 1. Rhenium-186-1abeled monoclonalantibodies for radioimmunotherapy: preparationand evaluation. J Nucl Med 1993;34:260-7.
Iznaga-Escobar N. Re-188 direct labeling ofmonoclonal antibodies for radioimmunotherapyof solid tumors: biodistribution, normal organdosimetry, and toxicology. Nucl Med Bioi1998;25:441-7.
Lee J, Lee DS, Kim YJ, Chang YS, Jeong JM,Shin SA, et al. Labeling and biodistribution ofRe-188-DTPA. Korean J Nucl Med 1997;31:42732.
Kim YJ, Jeong JM, Chang YS, Lee DS, ChungJK, Lee MC, et al. Study of Re-188(V)-DMSAfor treatment of cancer: radiolabeling andbiodistribution. Korean J Nucl Med 1998;32:81-8.
Kim YJ, Jeong JM, Chang YS, Lee YJ, Lee DS,Chung JK, et al. Preparation and biodistributionof Re-188 sulfur colloid. Korean J Nucl Med1998;32:298-304.
Chang YS, Jeong JM, Lee DS, Chung JK, LeeMC. Quality control of tungsten-188/rhenium188generator. Korean J Nucl Med 1998;32:42532.
Chang YS, Jeong JM, Kim BK, Cho JR, LeeDS, Chung J-K, et al. Effect of carrier onlabeling and biodistribution of Re-188-hydroxyethylenediphosphonate. Korean J Nucl Med2000;34:344-52.
Mather SJ, Ellison D. Reduction-mediatedtechnetium-99m labeling of monoclonalantibodies. J Nucl Med 1990;31:692-7.
John E, Thakur ML, Wilder S, Alauddin MM,Epstein AL. Technetium-99m-labeled monoclonalantibodies: influence of technetium-99m bindingsites. J Nucl Med 1994;35:876-81.
Griffiths GL, Goldenberg DM, Knapp FF,Callahan AP, Chang CH, Hansen HJ. Directradiolabeling of monoclonal antibodies withgenerator-produced rhenium-188 for radioimmunotherapy:labeling and animal biodistributionstudies. Cancer Res 1991;51:4594-602.
Normando IE. Direct radiolabeling of monoclonalantibodies with rhenium-188 for radioimmunotherapyof solid tumors-a review of radiolabelingcharacteristics, quality control and in vitrostability studies. Appl Rad Isotope 2001;54:399-406.
Hong MK, Jeong JM, Chung J-K, Choi SR,Kim CK, Lee YJ, et al. 99mTc labelling kitpreparation and characteristics of anti- NCA-95monoclonal antibody. Korean J Nucl Med1996;30:541-7.
Hong MK, Jeong JM, Yeo JS, Kim KM, ChangYS, Lee YJ, et al. In vitro properties andbiodistribution of Tc-99m and Re-188 labeledmonoclonal antibody CEA 79.4. Korean J NuclMed 1998;32:516-24.
Salako QA, O'Donnell RT, DeNardo SJ. Effectsof radiolysis on yttrium-90-labeled Lym-Iantibody preparations. J Nucl Med 1998;39:66770.
Wahl RL, Wissing J, Rosario RD, Zasadny KR.Inhibition of autoradiolysis of radiolabeled. monoclonal antibodies by cryopreservation. JNucl Med 1990;31:84-9.
Chakrabarti MC, Le N, Paik CH, De Graff WG,Carrasquillo JA. Prevention of radiolysis ofmonoclonal antibody during labeling. J NuclMed 1996;37:1384-8.
Hnatowich DJ, Virzi F, Winnard P, Fogarasi M,Rusckowski M. Investigations of ascorbate fordirect labeling of antibodies with technetium99m.J Nucl Med 1994;35:127-34.
Seymour CB, Mothersill C, Moriarty MJ, TiptonKF. The effect of ethanol on the radiationresponse of CHO-KI cells. Br J Raiol 1987;60(714):577-81.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.