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문제 정의
- NO 생성에 미치는 영향 - RGM의 항염활성을 확인하기 위해 NO 생성 억제 실험을 수행하였다. 실험에 사용되는 세포로는 생쥐유래 대식세포 RAW 264.
제안 방법
- 에 따라 adjuvant 유발 관절염 실험을 실시하였다. 0.1 ml/rat의 complete Freund's adjuvant를 흰쥐의 오른쪽 뒷 발바닥에 피 하주사하였고, 5, 8, 12, 15 및 18일 째 되는 날 뒷발 용적 을 plethysmometer를 이용하여 측정하였으며, 검체는 adjuvant를 투여한 날부터 10일간 투여하였다. 대조약물로는 20 mg/kg의 diclofenac을 .
- 11) 본 연구에서는 홍삼물 주출물 과 글루코사민 및 상어연골분말 각각에 대하여 일차적으로 항염증 활성과 항관절염 활성을 확인한 후 항산화제인ascorbic acid와 류마티스 관절염 효능인자인 MnCl2를 복합하여 제제를 제조한 다음 제제의 항관절염, 면역강화 및 진통 효능이 있는지 동물 실험과 병리조직으로 확인하고 생리활성에 있어서의 다양한 약물활성이 기대되는 기전을 설명하기 위하여 관절염 유발 동물의 혈청 내에 존재하는 IL-6와 interferon-y (INF-y)의 수준(level)과 NO의 생성억제능력을 정량적으로 분석하였다.
- 3 ml/mouse씩을 꼬리정맥 에 주사하였다. 20분 후에 0.6% 아세트산-생리식염수액을 0.1ml/10g씩 복강 내 주사하여, 혈관 투과성을 증대 시키고, 20분 후 복강 내부를 10ml의 생리식염수액으로 씻은 다음 채취하여 3,000 rpm에서 10분간 원심분리 한 후, 610 nm 자외선 흡수 스펙트럼 하에서 혈관 투과성의 정도를 분석 하였다. 대조 약물로는 ibuprofen 200mg/kg을 경구투여하여 비교 검정하 였다.
- 에 따라서 생쥐에 carrageenan에 의해 유발된 부종 억제실험을 실시하였다. 32-34 g 웅성 생쥐를 한 군으로 하여 뒷 발바닥에 1% carrageenan 0.03 ml을 피하주사하여 부종을 유발시키고, 검체는 carrageenan 주사 30분 전에 경구투여 하였다. Carrageenan 주사 후부터 일정시간 간격으로 부종의 용적을 thickness gauge로 측정한 다음, 주사 전의 용적을 기준으로 하여 부종 증가분(유발 후 뒷발 용적-유발 전 의 뒷발 용적)과 증가율({유발 후 뒷발 용적-유발 전의 뒷 발 용적 }/유발 전의 뒷발 용적 ×100)을 계산하여 부종 억제 정도를 검정하였다.
- Carbon clearance test - 검체의 면역력 강화여부를 확 인하기 위해 carbon clearance 실험은 Wagner 등의 방법16) 을 부분적으로 개변하여 수행하였다. 32-36g의 웅성생쥐 10마리를 한 군으로 하여 검체는 3일간 하루에 한 번, 실험 30분 전에 투여하고 실험을 실시하였다.
- 03 ml을 피하주사하여 부종을 유발시키고, 검체는 carrageenan 주사 30분 전에 경구투여 하였다. Carrageenan 주사 후부터 일정시간 간격으로 부종의 용적을 thickness gauge로 측정한 다음, 주사 전의 용적을 기준으로 하여 부종 증가분(유발 후 뒷발 용적-유발 전 의 뒷발 용적)과 증가율({유발 후 뒷발 용적-유발 전의 뒷 발 용적 }/유발 전의 뒷발 용적 ×100)을 계산하여 부종 억제 정도를 검정하였다. 대조약물로는 ibuprofen 200tng/kg을 경구투여하여 비교 검정하였다.
- Cytokines 분석 - Adjuvant 유발 관절염 실험 3주째에 혈액을 채취하여 실온에서 응고시키고 4℃에서 overnight 한 후 2,000xg에서 15분 동안 원심분리하여 혈청을 분리하였다. 측정시까지 검체는 영하 80℃에서 보관하였으며 실험 직전에 해동하여 혈청 내의 IL-6와 INFy의 양을 효소면역법 (Enzyme-Linked Immunosorbant As say)으로 정량하였다.
- 96-well을30분 동안 실온에서 배양하고, 세척 용액으로 3번 세척한 후 물기를 완전히 제거하였다. TMB 기질 용액을 100 ul/ well 씩 첨가하고, 실온에서 30분 동안 반응 시킨 후 100111/ well 의 반응 정지액(0.18M H2SO4)을 각각 첨가한 후 450 nm에서 흡광도를 측정하여 혈청 내의 IL-6와 INF-γ 의 양을 분석하였다.
- 7 세포로부터 생성된 NO의 양은 Griess 시약을 이용하여 세 포 배양액 중에 존재하는 NO2-의 형태로서 측정하였다. 구체적으로, 배양한 세포의 상등액 100㎕에 Griess 시약[1%(w/v) sulfanilamide, 0.1%(w/v) naphtylethylenediamine- HC1, 5%(v/v) phosphoric acid]100|il를 혼합하여 96 웰 플레이트에 분주한 후 10분 동안 반응시켜 540 nm 파장에서 흡광도를 측정하였다.
- 1ml/10g씩 복강 내 주사하여, 혈관 투과성을 증대 시키고, 20분 후 복강 내부를 10ml의 생리식염수액으로 씻은 다음 채취하여 3,000 rpm에서 10분간 원심분리 한 후, 610 nm 자외선 흡수 스펙트럼 하에서 혈관 투과성의 정도를 분석 하였다. 대조 약물로는 ibuprofen 200mg/kg을 경구투여하여 비교 검정하 였다.
- Carrageenan 주사 후부터 일정시간 간격으로 부종의 용적을 thickness gauge로 측정한 다음, 주사 전의 용적을 기준으로 하여 부종 증가분(유발 후 뒷발 용적-유발 전 의 뒷발 용적)과 증가율({유발 후 뒷발 용적-유발 전의 뒷 발 용적 }/유발 전의 뒷발 용적 ×100)을 계산하여 부종 억제 정도를 검정하였다. 대조약물로는 ibuprofen 200tng/kg을 경구투여하여 비교 검정하였다.
- 1 ml씩을 흰쥐의 발바닥에 피하주사 하여 염증을 유발 시키고, 2시간 후에 검체를 투여한 다음, 일정시간 후에 analgesymeter로 동통역치 (threshold, g 으로 표시)를 측정하였다. 동통역치는 흰쥐의 발바닥에 16g/ sec의 속도로 서서히 압력을 가하여, 흰쥐가 발을 빼려고 하거나 아파서 몸을 뒤틀 때를 동통반응으로 하였다. 진통작용은 대조군 동통역치에 대한 %를 구함으로써 나타내었다
- 하루 동안 세포를 배양한 후 RGM을 1, 10 및 50㎍/ml 농도로 처리한 후 2시간 후에 LPS를 1 ㎍/ml 농도로 처리하여 22시간 동안 배양하였다. 산화질소 생성 억제물질인 indomethacin을 (30(1M) 농도로 처리하여 양성 대조군으로 사용하였고, LPS만 처리한 것을 음 성 대조군으로 사용하였다. 생쥐유래 대식세포 RAW 264.
- 32-36g의 웅성생쥐 10마리를 한 군으로 하여 검체는 3일간 하루에 한 번, 실험 30분 전에 투여하고 실험을 실시하였다. 생쥐에 carbon sus pension (1% gelatin을 포함한 PBS에 rotring ink를 8배 희석) 10ul/g(b.w.)의 용량으로 꼬리 정맥을 통해 주사하였다. 정맥주사 후 3, 6, 9, 12분이 되는 때에 안와정맥으로부터 채혈하여, 혈액 20ul를 0.
- 산화질소 생성 억제물질인 indomethacin을 (30(1M) 농도로 처리하여 양성 대조군으로 사용하였고, LPS만 처리한 것을 음 성 대조군으로 사용하였다. 생쥐유래 대식세포 RAW 264.7 세포로부터 생성된 NO의 양은 Griess 시약을 이용하여 세 포 배양액 중에 존재하는 NO2-의 형태로서 측정하였다. 구체적으로, 배양한 세포의 상등액 100㎕에 Griess 시약[1%(w/v) sulfanilamide, 0.
- 4)을 200 (il/well씩 첨가하고, 1시간 동안 실온에서 배양하였다. 세척용액 (50mM Tris, 0.2% Tween-20, pH 8)으로 well을 3번 세척하고 물기를 완전히 제거한 후 표준농도의 IL-6(or INF- 丫)와 분석할 혈청을 각각 50㎕/well 씩 첨가하였다. 1시간 동안 실온에서 배양한 후 0.
- 홍삼물 추출물과 글루코사민, 상어연골 각각에 대하여 일차적으로 항염증 활성을 확인한 후, 홍삼 추출물, 항산화제인 ascorbic acid와 류마티스 관절염 효능인자인 MnCl?을첨가하여 항관절염 제제를 제조한 후 제제의 항관절염, 면역강화 및 진통 효능이 있는지 동물실험과 병리조직으로 확 인하고, 생리활성에 있어서의 다양한 약물활성이 기대되는 기전을 설명하기 위하여 cytokines 의 in vitro 분석을 실시하였다. 염증(inflammation)은 침해자극으로부터 시작하여 치유에 이르는 반응으로 조직 장해에 대한 방어 및 회복을 위한 목적 반응이다.
- )의 용량으로 꼬리 정맥을 통해 주사하였다. 정맥주사 후 3, 6, 9, 12분이 되는 때에 안와정맥으로부터 채혈하여, 혈액 20ul를 0.1% sodium carbonate 1.5rrU에 희석한 다음 UV spectrophotometer 660nm에서 optical density를 측정하였다. 흡광도의 -log E 값을 구하여, 검체 투여군(RCtr)의 대조군(RCc)에 cfl regression coefficient ratio (RCR=RCtr/ RCc)를 구하였다.
- 이 방법은 염증부위의 동통에 대한 감수성을 증대시켜 그 증대된 감수성이 진통제에 의해 억제되는 것에 기초한 것이다. 즉, 흰쥐를 하룻밤 절식시킨 뒤, analgesymeter를 이용하여 300g의 압력에도 반응하지 않는 흰쥐를 먼저 제외시킨 후 그 후 20% brewer's yeast-생리식염수 현탁액 0.1 ml씩을 흰쥐의 발바닥에 피하주사 하여 염증을 유발 시키고, 2시간 후에 검체를 투여한 다음, 일정시간 후에 analgesymeter로 동통역치 (threshold, g 으로 표시)를 측정하였다. 동통역치는 흰쥐의 발바닥에 16g/ sec의 속도로 서서히 압력을 가하여, 흰쥐가 발을 빼려고 하거나 아파서 몸을 뒤틀 때를 동통반응으로 하였다.
- 초산 유발 생쥐 모세혈관투과성 실험 - Whittle 등의 방법 A에 따라서 검체가 단백질 친화성 색소인 Evans blue의 모세혈관 투과성에 미치는 영향을 검토하였다. 체중 32- 34 g의 웅성 생쥐에 약물을 경구투여 하고, 30분 후에 1% Evans blue 용액 0.3 ml/mouse씩을 꼬리정맥 에 주사하였다. 20분 후에 0.
- 초산 유발 생쥐 모세혈관투과성 실험 - Whittle 등의 방법 A에 따라서 검체가 단백질 친화성 색소인 Evans blue의 모세혈관 투과성에 미치는 영향을 검토하였다. 체중 32- 34 g의 웅성 생쥐에 약물을 경구투여 하고, 30분 후에 1% Evans blue 용액 0.
- 7 세포주(ATCC)를 사용하였으며, DMEM 배지를 사용하여 2><宙 세포수/ml 농도로 24웰 플레이트에 각각 분주하여 37℃, 5% CO2 배양기에서 배양하였다. 하루 동안 세포를 배양한 후 RGM을 1, 10 및 50㎍/ml 농도로 처리한 후 2시간 후에 LPS를 1 ㎍/ml 농도로 처리하여 22시간 동안 배양하였다. 산화질소 생성 억제물질인 indomethacin을 (30(1M) 농도로 처리하여 양성 대조군으로 사용하였고, LPS만 처리한 것을 음 성 대조군으로 사용하였다.
- 5rrU에 희석한 다음 UV spectrophotometer 660nm에서 optical density를 측정하였다. 흡광도의 -log E 값을 구하여, 검체 투여군(RCtr)의 대조군(RCc)에 cfl regression coefficient ratio (RCR=RCtr/ RCc)를 구하였다. 대조약물로는 50 mg/kg의 zymosan을 사용하였다.
대상 데이터
- 을 부분적으로 개변하여 수행하였다. 32-36g의 웅성생쥐 10마리를 한 군으로 하여 검체는 3일간 하루에 한 번, 실험 30분 전에 투여하고 실험을 실시하였다. 생쥐에 carbon sus pension (1% gelatin을 포함한 PBS에 rotring ink를 8배 희석) 10ul/g(b.
- 1 ml/rat의 complete Freund's adjuvant를 흰쥐의 오른쪽 뒷 발바닥에 피 하주사하였고, 5, 8, 12, 15 및 18일 째 되는 날 뒷발 용적 을 plethysmometer를 이용하여 측정하였으며, 검체는 adjuvant를 투여한 날부터 10일간 투여하였다. 대조약물로는 20 mg/kg의 diclofenac을 .사용하였다.
- 흡광도의 -log E 값을 구하여, 검체 투여군(RCtr)의 대조군(RCc)에 cfl regression coefficient ratio (RCR=RCtr/ RCc)를 구하였다. 대조약물로는 50 mg/kg의 zymosan을 사용하였다.
- 대조약물로는 ibuprofen 200 mg/kg을 사용하였다.
- 사용한 기기로는 plethysmometei와 analgesymeter는 Ugo Basile (Italy)회사의 제품이고, UV spectrophotometer (Jasco, Japan), thickness gauge (Mitutoyo Co., Japan)를 사용하였다.
- 시약 및 기기- 홍삼은 농협중앙회 고려 인삼창으로부터 제공받아 물 추출 후 동결 건조한 분말을 사용하였으며, 글루코사민 , 상어연골분말은 (주)이우양행으로부터 제공받았다. 실험 시 홍삼(250, 500 mg/kg), 글루코사민(240mg/kg), 상어연골분말(240mg/kg) 각각의 항염증 효과를 확인 후, 홍삼, 글루코사민, 상어연골과 함께 항산화제인 ascorbic acid 와 류마티스 관절염 효능인자인 MnCq를 복합하여 만든 제제 (Red Ginseng Mixture: RGM)를 사용하였다 (홍삼 물 추 출물 43.
- 시약 및 기기- 홍삼은 농협중앙회 고려 인삼창으로부터 제공받아 물 추출 후 동결 건조한 분말을 사용하였으며, 글루코사민 , 상어연골분말은 (주)이우양행으로부터 제공받았다. 실험 시 홍삼(250, 500 mg/kg), 글루코사민(240mg/kg), 상어연골분말(240mg/kg) 각각의 항염증 효과를 확인 후, 홍삼, 글루코사민, 상어연골과 함께 항산화제인 ascorbic acid 와 류마티스 관절염 효능인자인 MnCq를 복합하여 만든 제제 (Red Ginseng Mixture: RGM)를 사용하였다 (홍삼 물 추 출물 43.5%, 글루코사민 25.0%, 상어연골 25.0%, ascorbic acid 5%, MnCl2 1.5%).
- 실험동물 - (쥐샘타코에서 분양받은 체중 170-180 g의 Sprague-Dawley계 웅성 흰쥐 및 체중 25-28g의 ICR계 웅성 생쥐를 서울대학교 천연물과학연구소 실험동물 사육실에서 2주 이상 사육하여 적응시킨 뒤 실험에 사용하였으며, 사육장은 인공조명에 의하여 조명 시간을 아침 8시부터 저녁 8시까지 12시간으로 조절하였으며 실내 온도는 24±2℃ 로 유지하였다.
- NO 생성에 미치는 영향 - RGM의 항염활성을 확인하기 위해 NO 생성 억제 실험을 수행하였다. 실험에 사용되는 세포로는 생쥐유래 대식세포 RAW 264.7 세포주(ATCC)를 사용하였으며, DMEM 배지를 사용하여 2><宙 세포수/ml 농도로 24웰 플레이트에 각각 분주하여 37℃, 5% CO2 배양기에서 배양하였다. 하루 동안 세포를 배양한 후 RGM을 1, 10 및 50㎍/ml 농도로 처리한 후 2시간 후에 LPS를 1 ㎍/ml 농도로 처리하여 22시간 동안 배양하였다.
데이터처리
- ) 로 계산하였다. 각 군 간의 유의성 검정은 Student's Hest를 사용하였고, “값이 5% 미만일 때 유의성이 있다고 판정하 였다.
- 통계처리 - 모든 실험결과는 평균土표준오차(Mean±S.E.) 로 계산하였다. 각 군 간의 유의성 검정은 Student's Hest를 사용하였고, “값이 5% 미만일 때 유의성이 있다고 판정하 였다.
이론/모형
- Adjuvant 유발 흰쥐 관절염 실험 - 체중 180-220g 웅성 흰쥐 8마리를 한 군으로 하여 Claude 등의 방법14)에 따라 adjuvant 유발 관절염 실험을 실시하였다. 0.
- Carrageenan 유발 생쥐 부종 실험 - Winter등의 방법13) 에 따라서 생쥐에 carrageenan에 의해 유발된 부종 억제실험을 실시하였다. 32-34 g 웅성 생쥐를 한 군으로 하여 뒷 발바닥에 1% carrageenan 0.
- Randall-Selitto assay - 진통실험은 체중 180-220 g의 웅성 흰쥐 8마리를 한 군으로 하여 Randall 및 Selitto15)의 방법에 준하여 실시하였다. 이 방법은 염증부위의 동통에 대한 감수성을 증대시켜 그 증대된 감수성이 진통제에 의해 억제되는 것에 기초한 것이다.
- 염증 부종에 있어서 모세혈관투과성이 항진되는 것은 혈장성분이 혈관 외로 누출하는 것에 의해 일어나는 증상으로 염증의 초기단계인 모세혈관투과성에 미치는 작용에 의하여 항염증 효과를 검정한다. 따라서 혈관투과성 항진의 염증병태모델의 작성을 위하여 기염제로써 acetic acid를 투여하고, 투과성 항진의 지표로 복강 내로 유줄하는 Evans blue의 색소량을 지표로 하였다. 홍삼, 글루코사민, 상어연 골분말 각각 및 RGM의 초산유발 생쥐 모세혈관 투과성에 대한 영향을 실험한 결과, 각 검체 는 대조군과 비교하여 글 루코사민과 상어연골 각각 29.
- Cytokines 분석 - Adjuvant 유발 관절염 실험 3주째에 혈액을 채취하여 실온에서 응고시키고 4℃에서 overnight 한 후 2,000xg에서 15분 동안 원심분리하여 혈청을 분리하였다. 측정시까지 검체는 영하 80℃에서 보관하였으며 실험 직전에 해동하여 혈청 내의 IL-6와 INFy의 양을 효소면역법 (Enzyme-Linked Immunosorbant As say)으로 정량하였다. 정제된 IL-6 (or INF-y) 코팅 항체를 4㎍/ml의 농도가 되도록 PBS (pH 7.
성능/효과
- 본 증 의 증상이나 병리학적 소견에서 보면 사람의 류마티스제 평가에 많이 이용되고 있다.'9)제제 RGM에서의 adjuvant 유발 흰쥐 관절염에 대한 효과 시험을 실시한 결과, 5일째에14.3%, 12일째에 15.1%, 15일째에 17.5% 및 18일째에13.3%의 억제율을 나타냄으로써 대조군에 비하여 지속적으로 관절염 억제효과를 나타내었으며 이는 면역증강의 결과와 일치함이라 할 수 있다.
- 면역세포들 중에서 macrophage는 항원의 존재시 탐식작용 및 cytokine의 생성 및 염증반응 을 매개함으로써 면역계에서 가장 중요한 역할을 하고 있다.20) RGM 처리시 indomethacin보다는 약하지만 macro phage 세포주인 RAW 세포에서 염증반응의 중요한 인자인 NO의 생성을 농도의존성으로 유의성 있게 억제함은 RGM 이 염증반응을 조절할 수 있음을 보여주고 있다.
- 제제 RGM 500, 1000mg/kg을 투여한 결과 모 두 3시간이 경과되면서 부종이 대조군에 비하여 줄어드는 것을 확인할 수 있었다. 3시간 대에 있어서 RGM 500 mg/kg은 52% RGM l, 000mg/kg은 45% 증가하여 대조군에 비해 제제 RGM이 부종을 완화시킬 수 있음을 확인하였다 (Fig. 4).
- 7에 나타내었다. RGM 투여군의 경우 용량 의존적인 IL-6 와 INF-y 생성의 증가를 보여주었고, 특히 RGM 1,000 및 1,500 mg/kg을 투여하였을 때 관절염 대조군의 수치에 비해 통계학적으로 유의적인 차이를 나타냈다.
- 결론적으로, 항관절염 제제인 RGM의 항관절염 효과와 진통 효능이 확인되었으며 면역강화활성을 확인함으로써 홍삼을 주재료로 하는 관절보호 및 진통소염제의 개발가능성 을 확인할 수 있었다.
- 6에 나타내었다. 대조군은 yeast 주사 후 30분, 1, 2, 3시간째 까지 동통 역치가 꾸준히 감소하였던 반면 용량 간의 차이는 나타나지 않았으며 RGM 500 mg/kg 투여시 30분, 1, 2, 3시간에 각각 33.3, 63.6, 45.2 및 70.5%의 진통 효과를, 1, 000 mg/kg 투여 시 1, 2, 3시간에 각각 61.3, 47.1 및 61.1 %의 진통효과를 나타내었다. 특히 RGM 500 mg/kg 은 1시간 및 2시간에 대조 약물인 ibuprofen 200 mg/kg과거의 유사한 진통 효과를 보였다.
- 또한 이 실험을 통한 효과를 병리 조직학적으로 확인한 관절염 유발군의 관절 부위의 연골 손상과 연골의 밀도의감소에 비해 제제 RGM 500 mg/kg, 1000 mg/kg 투여군의경우 정상조직과 비교시 조직학적 변화가 거의 없거나 매우 낮음을 알 수 있었다. 특히 RGM 1500 mg/kg 투여군의 정상조직과 차이가 없었다(결과 미제시).
- 홍삼, 글루코사민, 상어연골 각각 및 RGM 의 carrageenan 유발 흰쥐 부종실험에 대한 영향을 실험한 결과, 홍삼 투여시 30분, 1, 2, 3시간에 대조군과 비교하여 지속적 인 부종억제 효과를 나타내 었으며 , 상어 연골분말도 30분, 1, 2, 3시간에 부종 억제작용을 나타내었다. 또한 제 제 RGM의 500, 1, 000 mg/kg에서 부종이 완화됨을 확인하였다.
- 7 세포에 LPS 단독으로 처리한 경우 생성된 NO의 양이 440 nM 정도로 아주 많은 양이 생성된 반면, 양성 대조군인 indomethacin (30 |1M) 및 RGM (1, 10, 50(xg/ml)을 처리한 경우 생성된 산화질소의 양이 유의 성 있게 감소하였다. 또한, 홍삼 추출물의 농도가 증가함에 따라 산화질소의 생성이 억제되었다(Fig. 8). 또한 위의 세 용량의 투여군에서 세포 독성이 나타나지 않았다.
- 1에 나타내었다. 모세혈관 투 과성에 대하여 각 검체는 유의성 있는 억제 작용을 나타내지는 않았으나 대조군 84.5 ug/mouse 를 나타낸 것에 비하여 글루코사민과 상어연골분말 240mg/kg의 용량에서 각각59.5과 56.7 gg/mouse 를 나타내어 29.6 및 32.9%의 저해 효과를 나타내 었으며 대조약물인 ibuprofen 군은 58.8 ㎍/ mouse로 30.4%의 저해 효과를 나타내었다. 제제 RGM 500, 1000mg/kg을 투여한 결과 각각 49.
- 3%의 지속적인 부종억제 효과를 나타내었다. 상어 연골분말도 30분, 1, 2시간에 12.2, 4.5, 6.8% 의 억제작용 을 나타내었으며, 3시간에는 30.8%의 억제효과를 나타내었 다. 대조약물인 Ibuprofen은 3시간째에 37.
- 일반적으로 염증반응의 억제에 있어서 cytokine의 증가에 대해서는 홍삼추출물의 면역증강에 기인하는 것으로 보인다. 이러한 면역증강의 in vivo 결과로서 제제 RGM의 면역 증강작용을 확인하기 위하여 carbon clearance test를 실시한 결과, RGM 500 및 1, 000 mg/kg 투여시 대조군에 대한 regression coefficient가 1.13 및 1.04로 나타남으로써 면역 증강작용이 확인되었다. 면역세포들 중에서 macrophage는 항원의 존재시 탐식작용 및 cytokine의 생성 및 염증반응 을 매개함으로써 면역계에서 가장 중요한 역할을 하고 있다.
- 5에 나타내었다. 제제 RGM 1, 500 mg/kg 용량으로 10일간 투여한 경우, 5일째에 14.3%, 12일째 15.1%, 15일째 17.5% 및 18일째에 13.3%의 억제율을 나타냄으로써 대조군에 비하여 지속적으로 관절염 억제 효과를 나타내었다. 반면에 대조약물인 diclofenac 투여군은 18일 째에 16.
- 9에 나타내었다. 제제 RGM 500 및 1,000 mg/kg 투여시 (RCtr) 대조군(RCc)에 대한 regression coefficient가 1.13및 1.04로 나타남으로써 면역 증강작용이 확인되었다. 대조약물인 zymosan의 regression coefficient는 1.
- 4%의 저해 효과를 나타내었다. 제제 RGM 500, 1000mg/kg을 투여한 결과 각각 49.3 gg/mouse, 60.6gg/ mouse의 투과력을 보여 44.6%, 32.0%의 저해작용을 보여 주었다(Fig. 2).
- 9%의 억제효과를 나타내었다. 제제 RGM 500, 1000mg/kg을 투여한 결과 모 두 3시간이 경과되면서 부종이 대조군에 비하여 줄어드는 것을 확인할 수 있었다. 3시간 대에 있어서 RGM 500 mg/kg은 52% RGM l, 000mg/kg은 45% 증가하여 대조군에 비해 제제 RGM이 부종을 완화시킬 수 있음을 확인하였다 (Fig.
- 진통실험의 대표적인 예 라고 할 수 있는 Randall-Selitto 법은 소염성 진통제에서 마약성 진통제까지 넓게 적용시킬 수 있는데, 마약성 진통제에서는 정상발과 염증발, 양쪽의 역치를 모두 상승시키지만, 말초에 작용점을 가지는 소염성 진통제는 염증발의 동통역치만을 상승시킨다. 제제 RGM의 진통효과를 확인하기 위하여 Randall-Selitto 시험 결과 RGM 500 mg/kg 투여시 30분, 1, 2, 3시간에 진통효과를, 1, 000 mg/kg 투여시 1, 2, 3시간에 진통 효과를 나타내었으며 , 특 히 RGM 500 mg/kg은 1시간 및 2시간에 대조 약물인 ibu profen 200 mg/kg 과 거의 유사한 진통 효과를 나타내었다. 실험 시 효모에 의해 발생하는 검체 투여군에서 발바닥의 부종이 육안으로 확인하기에도 현저히 감소한 바, 항염증 작용을 통한 진통효과인 것으로 간주된다.
- 3에 나타내었다. 홍삼 500mg/kg 투여 시 30분, 1, 2, 3시간에 대조군과 비교하여 각각 19.5, 29.1, 13.0, 20.3%의 지속적인 부종억제 효과를 나타내었다. 상어 연골분말도 30분, 1, 2시간에 12.
- 따라서 혈관투과성 항진의 염증병태모델의 작성을 위하여 기염제로써 acetic acid를 투여하고, 투과성 항진의 지표로 복강 내로 유줄하는 Evans blue의 색소량을 지표로 하였다. 홍삼, 글루코사민, 상어연 골분말 각각 및 RGM의 초산유발 생쥐 모세혈관 투과성에 대한 영향을 실험한 결과, 각 검체 는 대조군과 비교하여 글 루코사민과 상어연골 각각 29.6 및 32.9%의 억제율로, 대조 약물인 ibuprofen 투여군보다 유사한 효과를 나타내 었다. Carrageenan은 해조류로부터 얻을 수 있는 sulfated poly galactan으로, 특히 λ-carrageenan은 대식세포에 대한 선택적 독성작용에 의해 급만성 염증을 일으키는 특성을 가지 고 있으며,17) plasmin을 활성화시켜 kinin의 생성을 항진시 키는 특성이 있다.
- Carrageenan은 해조류로부터 얻을 수 있는 sulfated poly galactan으로, 특히 λ-carrageenan은 대식세포에 대한 선택적 독성작용에 의해 급만성 염증을 일으키는 특성을 가지 고 있으며,17) plasmin을 활성화시켜 kinin의 생성을 항진시 키는 특성이 있다. 홍삼, 글루코사민, 상어연골 각각 및 RGM 의 carrageenan 유발 흰쥐 부종실험에 대한 영향을 실험한 결과, 홍삼 투여시 30분, 1, 2, 3시간에 대조군과 비교하여 지속적 인 부종억제 효과를 나타내 었으며 , 상어 연골분말도 30분, 1, 2, 3시간에 부종 억제작용을 나타내었다. 또한 제 제 RGM의 500, 1, 000 mg/kg에서 부종이 완화됨을 확인하였다.
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