Fluconazole is an orally active bis-triazole antifungal agent, which is used in the treatment of superficial and systemic candidiasis and in the treatment of cryptococcal infections in patients with the acquired immuno deficiency syndrome (AIDS). The purpose of the present study was to evaluate the ...
Fluconazole is an orally active bis-triazole antifungal agent, which is used in the treatment of superficial and systemic candidiasis and in the treatment of cryptococcal infections in patients with the acquired immuno deficiency syndrome (AIDS). The purpose of the present study was to evaluate the bioequivalence of two fluconazole capsules, Diflucan (Pfizer Pharmaceuticals Korea Inc.) and Flucona (Korean Drug Pharmaceuticals Co., Ltd.), according to the guidelines of Korea Food and Drug Administration (KFDA). The fluconazole release from the two fluconazole capsules in vitro was tested using KP VII Apparatus II method at 0.1 M hydrochloride dissolution media. Twenty normal male volunteers, $23.60{\pm}1.88$ years in age and $63.57{\pm}6.17\;kg$ in body weight, were divided into two groups and a randomized $2{\times}2$ cross-over study was employed. After three capsules containing 50 mg as fluconazole was orally administered, blood was taken at predetermined time intervals and the concentrations of fluconazole in serum were determined using HPLC method with UV detector. The dissolution profiles of two fluconazole capsules were very similar at 0.1 M hydrochloride dissolution media. Besides, the pharmacokinetic parameters such as $AUC_t,\;C_{max}\;and\;T_{max}$ were calculated and ANOVA test was utilized for the statistical analysis of the parameters using logarithmically transformed $AUC_t$ and $C_{max}$ and untransformed $T_{max}$. The results showed that the differences in $AUC_t,\;C_{max}\;and\;T_{max}$ between two capsules based on the Diflucan were 4.96%, 5.65% and -13.76%, respectively. There were no sequence effects between two capsules in these parameter. The 90% confidence intervals using logarithmically transformed data were within the acceptance range of log(0.8) to log(1.25) $(e.g.,\;log(1.01){\sim}log(1.08)\;and\;log(1.00){\sim}log(1.12)\;for\;AUC_t\;and\;C_{max},\;respectively)$, indicating that Flucona capsule is bioequivalent to Diflucan capsule.
Fluconazole is an orally active bis-triazole antifungal agent, which is used in the treatment of superficial and systemic candidiasis and in the treatment of cryptococcal infections in patients with the acquired immuno deficiency syndrome (AIDS). The purpose of the present study was to evaluate the bioequivalence of two fluconazole capsules, Diflucan (Pfizer Pharmaceuticals Korea Inc.) and Flucona (Korean Drug Pharmaceuticals Co., Ltd.), according to the guidelines of Korea Food and Drug Administration (KFDA). The fluconazole release from the two fluconazole capsules in vitro was tested using KP VII Apparatus II method at 0.1 M hydrochloride dissolution media. Twenty normal male volunteers, $23.60{\pm}1.88$ years in age and $63.57{\pm}6.17\;kg$ in body weight, were divided into two groups and a randomized $2{\times}2$ cross-over study was employed. After three capsules containing 50 mg as fluconazole was orally administered, blood was taken at predetermined time intervals and the concentrations of fluconazole in serum were determined using HPLC method with UV detector. The dissolution profiles of two fluconazole capsules were very similar at 0.1 M hydrochloride dissolution media. Besides, the pharmacokinetic parameters such as $AUC_t,\;C_{max}\;and\;T_{max}$ were calculated and ANOVA test was utilized for the statistical analysis of the parameters using logarithmically transformed $AUC_t$ and $C_{max}$ and untransformed $T_{max}$. The results showed that the differences in $AUC_t,\;C_{max}\;and\;T_{max}$ between two capsules based on the Diflucan were 4.96%, 5.65% and -13.76%, respectively. There were no sequence effects between two capsules in these parameter. The 90% confidence intervals using logarithmically transformed data were within the acceptance range of log(0.8) to log(1.25) $(e.g.,\;log(1.01){\sim}log(1.08)\;and\;log(1.00){\sim}log(1.12)\;for\;AUC_t\;and\;C_{max},\;respectively)$, indicating that Flucona capsule is bioequivalent to Diflucan capsule.
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문제 정의
약물의 용출은 생체이용률과 깊은 상관관계가 있으고로먼저 용출시험을 행하여 대조약 및 시험약이 생물학적으로동등할 것인지를 추정하고자 하였다. 즉, 동일성분을 동일량함유하는 제제라 하더라도 원료, 부형제 및 제조공정 등에따라 약물흡수의 전제조건이 되는 용훌률이 다르게 나타날수 있으므로 대조약과 시험약의 용출률을 비교하기 위하여비교용출시험을 행하였다.
제안 방법
고려제약 주식회사에서 발매하고자 하는 플루코나졸 제제인 “플루코나 캅셀”이 기존의 플루코나졸 제제인 한국화이자제약 주식회사의 플루코나졸 제제인, 디푸루칸 캅셀”과 그생체이용률에 있어서 통계학적으로 동등하다는 것을 입증하기 위해서 식품의약품안전청이 고시한 생물학적 동등성 시험기준기에 따라 건강한 성인 남자(만 19~28세) 20명을 대상으로 2기 2제 라틴 방격법에 따라 시험하여 얻은 플루코나졸의 Tmax와 로그변환한 AUCt 및 Cmax에 대하여 통계검정과 분산분석을 행하였다. 또한 대한약전 제 7개정 용출시험법 중 제 2법패들법)에 따라 비교용출시험을 행하여 다음과같은 결론을 얻었다.
240m/의 물과 함께 복용시켰다. 다음 각 피험자로부터 투약직전, 0.5, 1, 1.5, 2, 3, 4, 6, 12, 24, 48, 72 및 96U간째(총 13시점)에 약 8mZ의 혈액을 채취하여 혈구분리용 원심분리관에 넣고 3 rpm에서 20분간 원심분려한후 즉시 혈청분리관을 사용하여 혈청을 채취하고 분석시까지 영하 7UC에서 보관하였다.
약물 투약은 2시기 2제품의 라틴 방격법에 따른 교차 시험법으로 투약계획을 세우고 20명의 피험자를 군당 10인씩 임의로 A, B 2군으로 나누고 제 I기 때 A군에는 대조약인 “디푸루칸 캅셀”을, B군에는 시험약인 “플루코나 캅셀을 투여하였고 제 II기 때에는 그 반대로 투여하였으며 투여량은 3캅셀(플루코나졸 150 mg)로 하였다. 한편, 플루코나졸의 최종상의 반감기는 평균 약 28.
이 최종시료용액 50㎕를 취하여 HPLC에 주입하였다. 여기에서 얻은내부표준물질의 피이크 면적에 대한 플루코나졸의 피이크 면적비를 구하여 검량선을 작성하였으며 하루에 실험을 5번시행하여 일내 재현성을 구하였고 연속하여 5일간 실험을행하여 일간 재현성을 구하였을 뿐만 아니라 0.2, 1 및 5mJ 농도에서 각각 5회 측정하여 정확성을 평가하고 상기 농도에서 물에 대한 평균 추출율을 구하였다.
5에서 lOOrpm으로 시험하였다. 용출액은 용출시험 조건에 따라 0.1 M 염산 용출액 500ml 사용하여 5, 10 및 15분에 용출액 5ml 채취하고 0.45 pm 멤브레인 필터로 여과하여 검액으로 하였다. 표준액은 플루코나졸 표준품 50 mg을 정밀하게 달아 0.
6세)이었다. 이들로부터 동의서를 받은 후 생물학적 동등성 시험을실시하였다.
것인지를 추정하고자 하였다. 즉, 동일성분을 동일량함유하는 제제라 하더라도 원료, 부형제 및 제조공정 등에따라 약물흡수의 전제조건이 되는 용훌률이 다르게 나타날수 있으므로 대조약과 시험약의 용출률을 비교하기 위하여비교용출시험을 행하였다.
1 M 염산을 넣어 녹여 표준액으로 하였다. 표준액 및 검액을 가지고 파장 261 nm 부근의 흡수극대파장에서 흡광도를 측정하여 용출률을 산출하였다.
플루코나졸 표준품을 메탄올에 녹여 농도를 1000jLig/mZ로만든 후 냉장 보관시키고, 이 용액을 냉동 보관하였던 blank 혈청으로 희석하여 플루코나졸의 혈청 중 농도가 각각 0.1, 0.2, 0.5, 1, 2, 5 및 10/씩 되도록 검량선용 표준 혈청액을 조제하였다. 각각의 검량선용 표준혈청 300에 내부표준물질로 페나세틴을 사용하여 내부표준물질 메탄올 용액(500ng/m/) 100W와 5M NaOH 용액 50㎕를 가한 후 3초간 vortexing하였다.
피험자들 모두에게 heparin-locked(150 unit/mi) Angioca- theter(JELCO™, 22G, Johnson & Johnson Medical, Pomezia, Italia)를 팔 정맥부위에 설치하고 대조약 또는 시험약 각각 3캅셀씩을 240m/의 물과 함께 복용시켰다. 다음 각 피험자로부터 투약직전, 0.
한편, 혈청 시료의 분석은 먼저 피험자로부터 각 시간별로 채취하여 영하 70℃에 보관했던 혈청 시료를 실온에 방치하여 녹인 후 3초간 진탕한 다음 이 혈청 300를 취하여 시험관에 옮기고 여기에 내부표준물질로 페나세틴 메탄올 용액 (500ng/mZ) 100를 가한 후 상기 검량선 작성을 위한 추출법에 따라 추출하여 얻어진 크로마토그램으로부터 내부표준물질의 피이크 면적에 대한 플루코나졸의 피이크 면적 비를 구하여 미리 작성된 검량선에 의해 혈청 시료 중 플루코나졸의 농도를 산출하였다.
혈청 중 플루코나졸 함량은 이미 보고된 플루코나졸 HPLC분석법을 참고하여 상기 기기 조건하 실온에서 이동상으로는 0.01 M sodium acetate 완충액(35% 염산으로 pH 5.0 조정):메탄올아세토니트릴(65:30:5, v/v/v) 혼합용액을 사용하였으며 유속 1.0mf/min, 주입량 50㎕ 및 UV 검출기 (261 nm)를 이용하여 정량하였고 다음과 같이 검량선을 작성하였다.
대상 데이터
시험에 사용된 시험약은 의약품임상시험관리기준3)제 36 조 및 제 37조의 규정에 따라 제조한 고려제약 주식회사(서울)의 “플루코나 캅셀”(제조번호: C1, 사용기한: 2005. 9. 1), 대조약은 식품의약품안전청으로부터 허가를 받아 한국화이자제약 주식회사(서울)에서 시판하고 있는 "디푸루칸 캅셀”(제조번호: 3910-2302, 사용기한: 2005. 1. 2)로 플루코나졸을 50 mg 함유하는 캅셀제이었다.
공고를 통하여 모집하였다. 33명의 지원자가 이 시험에 대한 설명회에 참석하였다. 이들 중 전남대학교 병원(광주)에서 전문의사의 건강진단을 실시하여 건강인으로 판정된 자 20인을 선정하였다.
용출시험용 기기로는 용출기(DSF810, 화인기계, 안양, 한국), 자외부 흡광광도계(PU-8700, Philips, 미국)를 사용하였으며, 약물분석 기기로는 HPLC용 펌프(LC 10AD Shimadzu, Tokyo, 일본), LUNA Cl8(2)(입자경 5 gm, 4.6mmxl50 mm, Phenomenex Co., CA, 미국), UV 검출기 (SPD lOAvp, Shimadzu, Tokyo, 일본), 주입기 (Model 7725, Rheodyne, Cotati, CA, 미국), 적분계 (Model Class LC-10, Shimadzu, 일본), 원심분리기QNION 55R, Hanil Science Industrial Co., 인천, 한국), pH 측정기 (Model 7, Coming Ltd., Halstead Essex England, 영국). 및 탁상용 혼합기(G560, Scientific Co.
33명의 지원자가 이 시험에 대한 설명회에 참석하였다. 이들 중 전남대학교 병원(광주)에서 전문의사의 건강진단을 실시하여 건강인으로 판정된 자 20인을 선정하였다. 피험자로 선정된 사람들의 평균체중은 63.
플루코나졸 표준품은 고려제약으로부터 제공받았으며 , 내부표준물질로 사용한 페나세틴(Sigma Chemical Co., St Louis, MO, 미국), HPLC용 아세토니트릴, 메탄올(이상 Fisher Scientific., Fair Lawn, NJ, 미국), 생리식염수 및 헤파린(이상 중외제약, 서울)은 시판품을, 증류수는 Milli Q (Millipore Co., Milford, MA, 미국)에서 18MQ-cm로 통과시킨 것을 사용하였다. 이소프로판올, 클로로포름, 수산화나트륨 및 기타 시약들은 특급 및 1급 시약들을 사용하였다.
피험자는 식품의약품안전청이 고시한 생물학적 동등성 시험기준2)에 근거하여 만 19~55세의 건강한 성인 남성 지원자를 공고를 통하여 모집하였다. 33명의 지원자가 이 시험에 대한 설명회에 참석하였다.
데이터처리
"디푸루칸 캅셀” 및 “플루코나 캅셀”을 각각 3캅셀씩 20 명의 지원자에게 라탄 방격법에 따른 교차시험법에 따라 경구 투여하여 얻은 각 제품의 혈청 중 약물농도-시간 곡선으로부터 약물속도론적 파라미터인 AUQ, Cmax 및 를 구하였으며, 이들 두 제품에서 각각 얻은 값에 대해 1를제외한 AUC와 Cgx의 로그변환치를 생물학적 동등성 시험통계처리용 프로그램인 Equiv Test, 를 이용하여 유의수준 a= 0.05에서 분산분석을 실시하여 순서효과(sequence effect)를 검증한 후, 각 변동요인간의 유의성 여부를 검토하였고 90% 신뢰 한계를 구하였다 이때 와 Te는 실측치를 사용하였으며 AUQ는 사다리꼴 면적계산 공식을 이용하여 최종 채혈 시점까지의 값을 통상의 방법에 따라 구해 사용하였다.
이론/모형
'디푸루칸 캅셀”에 대한, 플루코나 캅셀”의 생물학적 동등성 여부는 식품의약품안전청이 고시한 생물학적 동등성 시험기준2)에 따라 AUG, j 및 Tmax 등을 평가하였다.
대조약 “디푸루칸 캅셀”과 시험약 “플루코나 캅셀” 각 6 캅셀씩을 취하여 대한약전 제 7개정 용출시험법 중 제 2법 (패들법)에 따라 37).5에서 lOOrpm으로 시험하였다. 용출액은 용출시험 조건에 따라 0.
분산분석을 행하였다. 또한 대한약전 제 7개정 용출시험법 중 제 2법패들법)에 따라 비교용출시험을 행하여 다음과같은 결론을 얻었다.
성능/효과
또한, 각 피험자에 대해 대조약과 시험약을 투여하여 얻은 혈청 중 약물농도-시 간곡선으로부터 산출한 약물속도론적 파라미 터 (AUCt, Cmax 및 Tmax)를 Table Ⅱ에 나타내었다. 대조약인 “디푸루칸 캅셀”의 평균 AUG(pig . hr/mZ)는 112.34±12.42, 시험약인 "플루코나 캅셀”은 117.91±17.18로 대조약에 대한평균치 차가 4.96%이었고, ((μg/m/)는 2.83±0.44와 2.99 ±0.49로 5.65%의 차이를 보였으며 TmaJhr)는 2.73±1.07과 2.35±1.18으로 -13.76%의 차이를 나타내 대조약에 대한 시험약의 평균치 차이는 대조약의 ±20% 이내 이어야 한다는생물학적 동등성 평가를 위한 전제 조건을 만족하였으므로이하 분산분석을 행하였다.
1. 대조약인 “디푸루칸 캅셀”과 시험약인 “플루코나 캅셀” 에 대하여 대한약전 VⅡ에 수재된 제 2법(패들법)에 따라 용출 시험한 결과 O.lmol/L 염산 용출액에서 10분 이내에 대조약과 시험약 모두 90% 이상의 용출률을 나타내었고, 그 용출 양상도 유사하였다.
2. 대조약인 “디푸루칸 캅셀”의 평균 AUCt(|ig . hr/m/)는 112.34±12.42, 시험약인 “플루코나 캅셀”은 117.91±17.18으로 대조약에 대한 평균치 차가 4.96%이었고, Cmax(|lg/m/)는 2.83±0.44와 2.99±0.49로 5.65%의 차이를 보였으며 Tmax(hr) 는 2.73±1.07과 2.35±1.18으로 -13.76%의 차이를 나타내대조약에 대한 시험약의 평균치 차이는 대조약의 ±20% 이내 이어야 한다는 생물학적 동등성 평가를 위한 전제 조건을 만족하였다.
3. “디푸루칸 캅셀”에 대한 “플루코나 캅셀”의 분산분석 결과, 로그변환한 AUCt 및 (에 대해 유의수준 .05에서 군간 순서효과는 나타나지 않았으며, 90% 신뢰한계는 각각 log(1.01)~log(1.08) 및 log(L00)~log(1.12)로 나타나 log (0.8)~log(1.25) 이어야 하는 생물학적 동등성 시험기준을 만족하였다. 한편, Tmax(hr)에 대한 90% 신뢰한계0, %)는 -34.
대조약과 시험약에 대하여 대한약전에 수재된 패들 법에 따라 용출시험한 결과 0.1 M 염산 용출액에서 10분 이내에 대조약과 시험약 모두 90% 이상의 용출률을 나타내었고 두 제제의 용출양상은 거의 차이가 없었으며, 두 제제간의 용출은 차이가 없는 것으로 판단되었다(Figure 1).
1-10 gg/m/ 범위에서 양호한 직선성을 나타내었다. 또한, 이 농도범위에 있어서 플루코나졸의 일내 및 일간 변동계수(C.V.)는 모두 15% 이하로 나타났고(Table I), 0.2, 1 및 5㎍/㎖의 농도에서 5회 반복 측정하여 얻은 표준편차(% deviation)도 모두 ±15% 이내로 나타났다. 이로부터 혈청 중 플루코나졸에 대한 상기 HPLC 분석법은 인체에 대한 생체 이용률 시험에 이용될 수 있는 충분한 감도와 정확성 및 정밀성을 갖고 있음을 알 수 있었다.
로그변환한 평균치 차의 AUCt 및 Cmax에 대한 90% 신뢰한계는 log(1.01)~log(1.08) 및 log(1.00)~log(1.12)로 나타나 log(0.8)에서 log(1.25)이어야 한다는 생물학적 동등성 시험 기준을 만족하였다. 한편 , 참고값인 Tmax 평 균치 차의 90% 신뢰한계는 -34.
먼저 유의수준 a가 0.05일 때 Lax와 로그변환한 AUG 및 Cmax값에 대한 F비 (Fg)가 F분석표의 한계값인 F(l, 18)= 4.414 보다 모두 작게 나타나 교차시험이 제대로 이루어졌음을 확인할 수 있었다.
2, 1 및 5㎍/㎖의 농도에서 5회 반복 측정하여 얻은 표준편차(% deviation)도 모두 ±15% 이내로 나타났다. 이로부터 혈청 중 플루코나졸에 대한 상기 HPLC 분석법은 인체에 대한 생체 이용률 시험에 이용될 수 있는 충분한 감도와 정확성 및 정밀성을 갖고 있음을 알 수 있었다.
이상의 시험결과를 종합해 보면 시험약인 “플루코나 캅셀, , 은 대조약인, 디푸루칸 캅셀에 대하여 생물학적 동등성 시험의 판단기준인 2항목(AUG 및 Cn)에서 모두 동등한 것으로 나타나 두 제제는 생물학적으로 동등하다고 사료되었다.
이상의 시험결과를 종합해 보면 시험약인 “플루코나 캅셀은 대조약인 “디푸루칸 캅셀, 에 대하여 생물학적 동등성시험의 판단기준인 2항목(AUG 및 Cmax)에서 모두 동등한것으로 나타나 두 제제는 생물학적으로 동등하다고 사료되었다.
참고문헌 (5)
M. Manorot, N. Rojanasthien, B. Kumsom and S. Teekachunhatean, Pharmacokinetics and bioequivalence testing of generic fluconazole preparations in healthy Thai volunteers, Int. J Clin. Pharmacal. Therap., 38(7), 355-359 (2000)
식품의약품안전청 고시 제 2002-60호, 생물학적동등성시험 기준 (2002.11.22)
식품의약품안전청 고시 제 2001-75호, 의약품 임상시험 관리기준 (2000. 12. 21)
C.H.A. Koks, H. Rosing, P.L. Meenhorst, A. Bult, J.H. Beijnen, High-performance liquid chromatographic determination of the antifungal drug fluconazole in plasma and saliva of human immunodeficiency virus-infected patients, J. Chromatogt: B, 663, 345-351 (1995)
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