선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 따라서 본 연구는 프로바이오틱스로 이용할 목적으로 내 산성 및 담즙산 내성이 우수하며 L(+) lactic acid를 우세하 게 생산하는 L. acidophilus균을 선발하는 것을 목적으로 실시하였다.
제안 방법
- L. acidophilus KY1909 균주를 포함하여 상업적으로 이용되는 4종의 L. acidophilus과 3종의 lactobacilli에 대하여 내산성을 비교하였다. L.
- Lactic acid 분석 예비시험에서 gradient buffer로 사용한 8mM copper acetate buffer의 농도가 60%에서 분리능이 우수하게 나타나 모든 실험은 이 농도에서 실시하였다. 또한 각 분석 과정 이 끝날 때 마다 0.
- Lactic acid의 이성질체 분석은 L. acidophilus 3개 균주와 L. rhamnosus 2개 균주, L. reuteri, L. casei균주를 각각 비교하였다. 유산균을 MRS 배지에서 37℃, 24시간 배양한 후 0.
- 05M sodium phosphate buffer에 접종 한 후 37℃에서 2시간 진탕 배양기에서 배양한 후 생균수를 평가하여 내산성을 비교 하였다. 내담즙산성 평가는 MRS 배지에 여과 제균된 oxgall(Difco, USA) 용액을 oxgall 함량으로 0.5%(w/v)가 되도록 첨가하여 준비한 다음 내산성평가에서 준비한 유산균 현탁액을 접종하여 37℃에서 24시간 배양하여 생균수를 평가하였다.
- 내산성 평가는 Kobayashi 등⑩의 방법을 변형하여 다음과 같이 수행하였다. 0.
- 모유만을 먹는 생후 3개월 신생아의 분변을 채취하여 잘 혼합한 후 2.5~5.0g을 10배 부피의 pH 7.0 완충용액에 넣어 잘 혼합한 후 희석용 완충용액으로 희석하여 0.4%(w/v) bromocresol purple이 함유된 MRS 배지에 각각 도말하고 37℃에서 48시간동안 배양한 후 노란색 집락을 띄는 colony 들을 선발하였다.
- 모유만을 먹은 생후 3개월 된 유아의 분변을 채취하여 균주 분리를 통하여 총 45개의 집락을 분리하였다. 이중에서 Gram 양성이면서 막대모양을 가진 13개 균주에 대하여 산생성능력과 탄수화물 분해능 실험을 실시하였다.
- 이중에서 Gram 양성이면서 막대모양을 가진 13개 균주에 대하여 산생성능력과 탄수화물 분해능 실험을 실시하였다. 산생성능이 우수한 유산균의 선발은 0.5% CaCQ가 첨가된 MRS 배지에 유산균 배양액 10μL를 paper disc에 점적한 다음, 24시간, 48시간 배양 후 0.85% lactic acid control과 투명환의 크기를 비교하여 결정하였다(data were not shown). 또한 1차 선발된 균주는 Bergey's manual"에 따라 catalase 활성, gas 형성능, API 50 CHL carbohydrate test(Bio Merieux, France)를 실시하였다.
- 흡광도를 측정하였다. 이때 용매는 8mM N, N'-dipropyl- L-alanine buffer와 4 mM copper acetate buffer(gradient buffer)를 사용하였으며 gradient buffer의 농도를 30%에서 80%까지 증가시키면서 분석하였다.
- 이중에서 Gram 양성이면서 막대모양을 가진 13개 균주에 대하여 산생성능력과 탄수화물 분해능 실험을 실시하였다. 산생성능이 우수한 유산균의 선발은 0.
- 85% saline으로 3회 세척하였다. 초기 균수가 108 CFU/mL 정도가 되도록 0.05M sodium phosphate buffer에 접종 한 후 37℃에서 2시간 진탕 배양기에서 배양한 후 생균수를 평가하여 내산성을 비교 하였다. 내담즙산성 평가는 MRS 배지에 여과 제균된 oxgall(Difco, USA) 용액을 oxgall 함량으로 0.
- 준비된 표본은 SEM ion sputter coater> 이용하여 gold-palladium 층으로 진공상태에서 60초간 코팅시켰다. 표본의 형태는 15kV의 accelerating voltage에서 관찰하였으며 대표적인 화상을 즉석 필름(FP-3000B45, 912 cm, Fuji, Japan)으로 출력하여 비교하였다.
이론/모형
- 85% lactic acid control과 투명환의 크기를 비교하여 결정하였다(data were not shown). 또한 1차 선발된 균주는 Bergey's manual"에 따라 catalase 활성, gas 형성능, API 50 CHL carbohydrate test(Bio Merieux, France)를 실시하였다.
- L-lactic acide Olieman과 de Vries의 방법(11)을 이용하여 HPLC로 분석하였으며, C18 column(Shiseido Capcell pak C18 UG-80, Japan)을 사용하여 1 mL/min의 유속으로 240nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때 용매는 8mM N, N'-dipropyl- L-alanine buffer와 4 mM copper acetate buffer(gradient buffer)를 사용하였으며 gradient buffer의 농도를 30%에서 80%까지 증가시키면서 분석하였다.
성능/효과
- Figure 3에서 보는 바와 같이 L. reuteri 균주를 제외하고는 대부분의 균주가 0.5% oxgall 함유 MRS 배지에서 접종균수를 유지하는 것으로 확인되어 본 실험에 사용한 균주가 비교적 우수한 내담즙산성을 갖고 있는 것으로 나타났다.
- acidophilus과 3종의 lactobacilli에 대하여 내산성을 비교하였다. L. acidophilus KY1909의 경우 약 6.8X 107 CFU/mL 수준으로 접종하여 pH 2.5 인공위액에서 1시간 처리한 후에 생균수를 평가한 결과 6.5X107 CFU/mL으로 나타나 인공위액 조건에서 거의 사멸하지 않는 것으로 확인되었으며, 다른 상업용 유산균들도 우수한 내산성을 보였다(Fig. 2).
- acidophilus ATCC 43121균주의 경우에는 L(+) form과 D(-) form의 비율이 8 : 2로 생산하는 것으로 나타났다. 그러나 유아 분변에서 분리한 L. acidophilus KY 1909의 경우 L(+) form을 93.96% 생산하는 것으로 확인되었으며, 이는 유아 또는 어린이 제품에 새로운 활성 유산균으로 사용이 가능할 것으로 판단되었다.
- 본 실험결과 발효유제품에 사용되는 L. acidophilus NCFM, L. acidophilus CH5, L. acidophilus NOCKS 들은 전체 lactic acid중에서 L(+) form이 차지하는 비율이 각각 52.49, 40.63 및 63.13%로 나타났으며, 콜레스테롤 흡착활성이 있는 것으로 보고된 L. acidophilus ATCC 43121균주의 경우에는 L(+) form과 D(-) form의 비율이 8 : 2로 생산하는 것으로 나타났다. 그러나 유아 분변에서 분리한 L.
- 산생성 능력이 가장 우수하였던 균주를 선발하여 동정한 결과 L. acidophilus로 확인되었고(Table 1), L acidophilus KY1909라 명명하였으며 주사전자 현미경으로 촬영 결과 전형적인 유산간균의 형상을 지닌 것으로 확인되었다(Fig. 1).
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.