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문제 정의
- 사실이다.23) 본 실험은 EN-3이 대식세포를 직접 자극하여 활성화시키는 효과가 있는지를 확인하기 위하여 실시하였으며, 그 지표로서 EN- 3胜로 자극된 대식세포의 배양상등액에 유도 생산된 TNF-a, IL- 1 및 IL-12의 양을 조사하였다. 그 결과, Fig.
- 본 연구는 오가피로부터 추출된 다당체를 이용하여 면역계에 미치는 활성을 조사함으로서 이후 여러 항원에 대한 면역증강제로의 응용가능성을 조사하기 위하여 비특이적 면역자극활성 및 항원 특이적인 면역 증강활성을 조사하였다.
제안 방법
- 5 X 106 cell/m;로 조정하여 48 well plate에 분주하였다. 2시간 배양 후에 RPMI-1640 배양배지로 3회 세척하고 항원으로 10昭/mZ의 OVA 및 시료인 여러 농도의 EN-3를 첨가하여 24시간 배양하였다. 배양 완료 후 배양상등액을 수집하고, 각 cytokine에 대한 2차 항체를 이용하는 상용 sandwich ELISA kit 로써 생산된 TNF-a와 IL-12의 양을 측정하였다.
- 가피로부터 분리한 다당획분인 EN-3의 면역 자극활성과 더녈어 항원 BSA 혹은 OVA에 대한 세포성 및 체액성 면역증진 능W 조사하였다. EN-3는 thioglycollate에 의하여 유도된 mac-ophages를 자극하여 IL-1, TNF-a 및 IL-12을 생산하였고, silic;i-induced dendritic-like cells에 대하여 항원 BSA 및 EN-3 의 듬시배양은 각 시료 단독배양에 비하여 높은 TNF-a 및 IL12을 생산하였다. 이 결과는 EN-3가 면역자극활성 및 항원제시 세포의 성숙을 증진시킴으로서 이후 항원 특이적인 T 세포의 활 성화를 유도한다는 점을 제시하였다.
- EN-3의 T 세포 매개 세포성 면역반응을 조사하고자 항원 OVA 단독, OVA와 상용 adjuvant 또는 EN-3의 혼합물 및 FIA와 EN- 3의 혼합물 등으로 동시에 면역한 마우스의 비장세포를 in vitro 에서 항원 OVA로 재자극한 후에 비장세포의 증식 정도를 조사하였다. 재자극 활성의 조사를 위하여 OVA에 대한 최대항체가 측정 후, 즉, 최초면역 10주 후의 마우스를 이용하였다.
- OVA 특이적인 항체의 생산에서 adjuvant로서 EN-3가 T 세포에 미치는 영향을 T 세포 배양상등액에 생산된 항원 특이적인 Thl-type 및 Th2-type cytokine의 양을 측정함으로 조사하였다. Fig.
- 가피로부터 분리한 다당획분인 EN-3의 면역 자극활성과 더녈어 항원 BSA 혹은 OVA에 대한 세포성 및 체액성 면역증진 능W 조사하였다. EN-3는 thioglycollate에 의하여 유도된 mac-ophages를 자극하여 IL-1, TNF-a 및 IL-12을 생산하였고, silic;i-induced dendritic-like cells에 대하여 항원 BSA 및 EN-3 의 듬시배양은 각 시료 단독배양에 비하여 높은 TNF-a 및 IL12을 생산하였다.
- 군 담 3마리의 Balb/C 마우스에 5 临의 OVA를 단독 혹은 adju暮 nt와 2주 간격으로 면역하고, 1차면역 10주 후에 면역미우스 호£ 정상마우스로부터 비장을 취하였다. 각 비장은 10% FBS 가 豎4된 RPMI-1640 배지에 부유시켜 세포의 농도가 2.
- 대식세포의 활성화 정도를 측정하기 위하여 96 well plate에 lx 106 cell/m血로 세포 수를 조정하여 분주 후 배양하였다. 대식세포는 배양배지를 이용하여 배양 plate에 부착되지 않은 세포를 세척함으로서 수집하였고, 시료의 대식세포 자극활성을 측정하고자 여러 농도의 EN-3와 대조군으로서 5卩g/m/의 Lipopolysaccharide(LPS)를 각각 첨가하고 24시간 배양하였다. 배양 완료 후 대식세포의 활성화는 lysosomal enzyme의 생산량으로서 측정하였으며, 幻) 대식세포로부터 생성된 다양한 cytokine, 즉 TNF-a, IL-邛 및 IL-12의 양은 24 well plate에 2X106 cells/n血로 조정한 대식세포를 분주하고 시료를 첨가하여 24시간 후에 수집한 상등액을 이용하여 Pharmingen(USA)으로부터 구입한 ELISA kit로 측정하였다.
- 마우스의 복강 내 대식세포(macrophage)를 얻기 위하여 6주령의 Balb/C 혹은 C57BL/6 마우스 복강에 3% thioglycollate 배지를 1 m/ 주사하고, 3일 후에 복강 내에 유도된 대식세포를 회수한 후, 원심분리와 세척을 하였다. 대식세포의 활성화 정도를 측정하기 위하여 96 well plate에 lx 106 cell/m血로 세포 수를 조정하여 분주 후 배양하였다.
- 열수추출물은 다시 &의 메탄올로 1시간씩 5회에 걸쳐 환류를 거친 후 원심분리하여 메탄올가용성 획분과 불용성 획분으로 분리하였다. 메탄올-불용성 획분은 증류수에 재용해시킨 후 4배의 에탄올을 첨가하고 12시간 교반, 원심분리하여 메탄올-불용성/에탄올가용성 획분을 분리하고 침전물은 증류수에 재용해시키고 투석한 후 원심분리, 농축, 동결건조를 거쳐 조다 당 획분(EN-3)으로 조제하였다.
- PBST로 ELISA plate? 각 well을 세척하고 마우스 면역글로브린(mouse Ig)에 peroxi ]ase 가 conjugation된 2차 항체 (peroxidase-conjugated goat a nti-mouse IgGAM-HRR Zymed, USA)를 PBS 에 희석하여 각 well에 첨가 후, 상온에서 1시간 동안 반응시켰다. 면역글로匕毛 subisotype의 분석은 마우스 면역글로브린의 각 subie:ype에 대한 특이적인 2차 항체(peroxidase-conjugated rabbi': anti-mouse IgGl, G2a 및 G2b, Zymed, USA)를 이용하여 ELISA로 조사하였다. 발색을 위한 기질로써 3, 3', 5, 5'- tetran ethylbenzidine(TMB) 용액을 사용하였으며, 2 N H2SO4 을 彳 나하여 반응을 정지시킨 후 450nm에서 흡광도를 측정하였디' 각 항체의 역가는 정상 마우스 혈청(X 100)의 흡광도보다 5배 强은 흡광도를 나타내는 최고 희석비로 나타냈다.
- 대식세포는 배양배지를 이용하여 배양 plate에 부착되지 않은 세포를 세척함으로서 수집하였고, 시료의 대식세포 자극활성을 측정하고자 여러 농도의 EN-3와 대조군으로서 5卩g/m/의 Lipopolysaccharide(LPS)를 각각 첨가하고 24시간 배양하였다. 배양 완료 후 대식세포의 활성화는 lysosomal enzyme의 생산량으로서 측정하였으며, 幻) 대식세포로부터 생성된 다양한 cytokine, 즉 TNF-a, IL-邛 및 IL-12의 양은 24 well plate에 2X106 cells/n血로 조정한 대식세포를 분주하고 시료를 첨가하여 24시간 후에 수집한 상등액을 이용하여 Pharmingen(USA)으로부터 구입한 ELISA kit로 측정하였다.
- 2시간 배양 후에 RPMI-1640 배양배지로 3회 세척하고 항원으로 10昭/mZ의 OVA 및 시료인 여러 농도의 EN-3를 첨가하여 24시간 배양하였다. 배양 완료 후 배양상등액을 수집하고, 각 cytokine에 대한 2차 항체를 이용하는 상용 sandwich ELISA kit 로써 생산된 TNF-a와 IL-12의 양을 측정하였다.
- A)와 동시에 혹은 단독으로 OVA를 50 昭钮부터 5배 희석법으로 희석하여 첨가하고 37°C, 5% CQj의 조건에서 72시간 동안 배양하였다. 배양완료 &시간 전에 1 mg/m/의 MTT 용액을 첨가하고, 생산된 formazan의 정도를 570nm에서 흡광도로 측정하였다.
- 5X105/ well。되도록 조정한 후, 96-well culture plate에 분주하였다. 비장 시포가 분주된 각 well에 항원인 0.2|xg/mZ의 Concanavalin A(Cor. A)와 동시에 혹은 단독으로 OVA를 50 昭钮부터 5배 희석법으로 희석하여 첨가하고 37°C, 5% CQj의 조건에서 72시간 동안 배양하였다. 배양완료 &시간 전에 1 mg/m/의 MTT 용액을 첨가하고, 생산된 formazan의 정도를 570nm에서 흡광도로 측정하였다.
- 배양완료 후 원심분리(900rpm/10min)에 의하여 배양 상등액을 준비하였으며 cytokine의 측정 시까지 -80°C에 저장하였다. 비장세포 배양상등액에 유도된 IL-2, IFN-y, IL-4, GM- CSF 및 IL-10 등의 cytokine의 측정은 각 cytokine에 대한 ELISA kit을 이용하여 조사하였다.
- 고, 최종면역 8주 후에 면역마우스 혹은 정상마우스로부터 비장을 취하여 세포의 농도가 3Xl()6/well이 되도록 조정 후, 24-well culture plate에 분주하였다. 비장세포가 분주된 각 well에 항원 최종농도 20 昭向의 OVA를 단독 혹은 Con A(최종농도 0.22 와 동시에 첨가하고 37°C, 5% CO2 incubator에서 72시간 배양시켰다. 배양완료 후 원심분리(900rpm/10min)에 의하여 배양 상등액을 준비하였으며 cytokine의 측정 시까지 -80°C에 저장하였다.
- 잔사에는 다시 동량의 증류수를 첨가한 후 2회 반복 추출하고 7, 000 rpm에서 30분간의 원심분리를 통해 불용성 침전물을 제거하고 투석을 거친 후 동결건조하여 오가피의 열수 추출물로 하였다. 열수추출물은 다시 &의 메탄올로 1시간씩 5회에 걸쳐 환류를 거친 후 원심분리하여 메탄올가용성 획분과 불용성 획분으로 분리하였다. 메탄올-불용성 획분은 증류수에 재용해시킨 후 4배의 에탄올을 첨가하고 12시간 교반, 원심분리하여 메탄올-불용성/에탄올가용성 획분을 분리하고 침전물은 증류수에 재용해시키고 투석한 후 원심분리, 농축, 동결건조를 거쳐 조다 당 획분(EN-3)으로 조제하였다.
- 050; PBST)으로 각 well을 3회 세척 후에 3% BSA를 이용하여 Hocking하고 PBST로서 다시 세척하였다. 준비한 각각의 항원에 다한 혈청을 100배부터 2배 희석법으로 희석하여 각 well 에 芝 가하고 2시간 동안 상온에서 반응시켰다. PBST로 ELISA plate? 각 well을 세척하고 마우스 면역글로브린(mouse Ig)에 peroxi ]ase 가 conjugation된 2차 항체 (peroxidase-conjugated goat a nti-mouse IgGAM-HRR Zymed, USA)를 PBS 에 희석하여 각 well에 첨가 후, 상온에서 1시간 동안 반응시켰다.
- 각 항원에 대한 힝T 의 생산을 위하여 6주령의 Balb/C 마우스에 10 胞 BSA 단독 号 은 adjuvant로서 여러 농도의 EN-3(50 ug/mouse)를 혼합하。. 피하주사로 2주 간격으로 총 2회 면역하였다. OVA(5(ig) 의 면2 의 경우, 대조군 adjuvant로는 FCA를 항원 OVA과 유화하여 ' 용하였고, 실험군으로는 adjuvant로 EN-3 단독 혹은 FIA 에 EN3를 혼합하고 유화하0 사용하였다.
대상 데이터
- 바。]오링크에서 구입하여 사용하였다. 실험동물은 경기대학교 실험장에 설치된 clean rack에서, 정수된 물과 실험동물용 펠렛사료(삼육사료)를자유 급식하여 사육되었다.
- 사용하였다. 실험동물은 경기대학교 실험장에 설치된 clean rack에서, 정수된 물과 실험동물용 펠렛사료(삼육사료)를자유 급식하여 사육되었다.
- 재자극 활성의 조사를 위하여 OVA에 대한 최대항체가 측정 후, 즉, 최초면역 10주 후의 마우스를 이용하였다. Fig.
- 항치생산을 위한 항원으로 bovine serum albumin(BSA; Sigma ) 4 ovalbumin(OVA; Sigma)을 사용하였다. 각 항원에 대한 힝T 의 생산을 위하여 6주령의 Balb/C 마우스에 10 胞 BSA 단독 号 은 adjuvant로서 여러 농도의 EN-3(50 ug/mouse)를 혼합하。.
이론/모형
- 전문 항원제시세포인 dendritic cell(DC)의 수집은 Masse, D. 등의 방법22)에 준하여 실시하였는데, 6주령의 Balb/C 마우스 복강에 silica(5 mg/m/)를 주사하고 24시간 후에 복강세포를 회수한 후 1.5 X 106 cell/m;로 조정하여 48 well plate에 분주하였다. 2시간 배양 후에 RPMI-1640 배양배지로 3회 세척하고 항원으로 10昭/mZ의 OVA 및 시료인 여러 농도의 EN-3를 첨가하여 24시간 배양하였다.
- 혈:) 세 존재하는 각 항원에 대한 총항체가의 측정은 ELISA 법으로 M정하였다. Flat-bottomed microtiter plate의 각 well에 50 jig/m'- ] 각 항원을 well 당 10(W씩 분주하고 항원의 coating을위하" 4°C에서 16시간 동안 부착시켰다.
성능/효과
- 29)따라서 EN-3의 GM-CSF의 생산능은 IFN-丫의 생산능과 함께 항원에 대한 effector CTL의 유도에 직접 관여함으로서 외인성 항원 뿐 아니라 암, 바이러스 감염세포와 같은 내인성 항원에 대하여 예방은 물론 치료효과를 유도할 수 있는 가능성을 제시하였다고 사료된다.2429)결론적으로 본 실험 결과, EN-3는 단백질 항원에 대한 항체 생산과 일부 세포성 면역증강작용에서 항원에 대한 저장작용이 충족될 경우, FCA에 상당하는 adjuvant활3이 있는 것으로 사료되었고, 그 반응은 항원제시세포의 항 원"시능을 증진시킴으로서 이후 Thl 및 Th2-type의 면역반응 을 알성화시키는 작용을 하는 것으로 사료되었다.
- 27)Fig. 2의 결과에서 silica-유도 복강세포와 항원(BSA) 및 EN-3의 동시배양 결과 유도된 상등액에 함유된 IL-12S] 함량을 조사한 결과 항원 단독으로는 유도하지 못했던 IL-12 생산에 있어 EN-3 획분은 상승적으로 작용함을 알 수 있었다. 따라서 EN-3는 항원 제시 세포의 성숙과 이후 항원 특이적인 면역증강효과에서 항원 제시 세포의 항원에 대한 항원제시능을 높이는 작용이 있음을 제시하였다고 생각되며, 이러한 경향은 TNF-a의 유도양i]에서도 동일한 결과를 보였다.
- 즉, 각 면역 마우스의 비장세포를 항원 OVA로 재자극한 후 상등액에 생산된 Thl 및 Th2-type의 cytokine의 생산 양식을 조사한 결과, adjuvants. EN-3 단독으로 사용한 결과는 Thl-type cytokine인 IFN-y 및 GM-CSF와 Th2-type cytokine인 IL-6 및 IL-10의 생산을 증가시키는 경향을 보임으로서 EN-3는 adjuvant로서 항원에 대한 항원제시능 및 세포성 면역능을 주로 유도하는 adjuvant 활성을 함유하는 것으로 생각되었다. 한편, EN-3에 FIA를 혼합하여 adjuvants.
- 를 BSA에 대한 항체 생산능으로 조사한 것이다. 결과에서 보여주는 것처럼 BSA 단독면역의 경우는 낮은 항체가를 나타냄으三서 정상 혈청과 비교하여 유의하게 높은 항체가를 가지는 항기〕가 생산되지 않았으나, BSA를 EN-3와 혼합하여 면역한경우느 유의하게 높은 항체가가 유도됨을 확인하였다. 본 모델에서 EN-3 50 ng 및 0.
- 242627) 이와 같은 가설은 EN-3가 동시에 면역된 마우스의 경우에서 T 세포가 생산하는 cytokine의 생산양식으로 확인할 수 있었다. 결론적으로, EN-3는 항원 제시 세포의 항원 세시능을 획득하기 위한 성숙된 form으로의 전환을 자극하는 cy:okine의 유도능에 의해 면역단계의 개시단계를 자극하는 활서 財 있다고 사료되었다.2627)
- 23) 본 실험은 EN-3이 대식세포를 직접 자극하여 활성화시키는 효과가 있는지를 확인하기 위하여 실시하였으며, 그 지표로서 EN- 3胜로 자극된 대식세포의 배양상등액에 유도 생산된 TNF-a, IL- 1 및 IL-12의 양을 조사하였다. 그 결과, Fig. 1에 제시한 바오I 같이 EN-3 획분은 대식세포를 직접 자극하여 IL-1 과 TNF-以의 경우에는 100 ug/m/의 농도에서 LPS와 유사한 정도의 cytokine 을 생산성을 나타내었으며, 각각의 cytokine의 생산정도는 자극하는 EN-3의 농도(1〜100 卩g/m/)에 의존적인 경향을 보임2로서 EN-3 획분은 면역반응의 개시단계인 대식세포와 같은 선천적 면역계 (innate immune system)를 직접 활성화시키는 능력이 있음을 확인하였다. 한편, 전문적인 항원제시세포인 DC로부터 항원 특이적인 IL-12241 및 TNF-a25)의 유도는 항원 특이적인 면역증강 활성의 유도에서 중요한 cytokine으로 인정되고 있다.
- 2의 결과에서 silica-유도 복강세포와 항원(BSA) 및 EN-3의 동시배양 결과 유도된 상등액에 함유된 IL-12S] 함량을 조사한 결과 항원 단독으로는 유도하지 못했던 IL-12 생산에 있어 EN-3 획분은 상승적으로 작용함을 알 수 있었다. 따라서 EN-3는 항원 제시 세포의 성숙과 이후 항원 특이적인 면역증강효과에서 항원 제시 세포의 항원에 대한 항원제시능을 높이는 작용이 있음을 제시하였다고 생각되며, 이러한 경향은 TNF-a의 유도양i]에서도 동일한 결과를 보였다. TNF-a는 미성숙 DC의 표면에 MHC 혹은 보조 자극인자(co-stimulatory molecule)의 발현을 촉진함으로 성숙된 형태의 DC로 전환시키는 작용이 있다.
- 4). 따라서 수용성 물질인 EN-3는 면역원성이 낮은 물질일 경우 단독로는 유의한 항체생산을 높이지는 못하였으나, 항원의 저장작용이 증진될 경우 대조군으로 사용한 FCA 이상의 높은 adjuvant activity를 나타낼 수 있는 물질의 하나로 응용 가능성이 있음이 확인되었다.
- 이때 생산된 항체의 subisotype는 주로 IgGl and IgG2b이었으며, 면역 마우스의 비장세포를 항원 OVA로 자 극후 배양상등액에 생산된 cytokine을 조사한 결과 항원 특이적 인 Thl(IL-2, IFN-)와 GM-CSF) 및 Th2-type의 cytokine(IL-4, IL-6와 IL-10)이 증가된 결과를 얻었다. 또한 면역 마우스의 비 장세포를 항원 OVA오]■ 재자극한 후 비장세포의 증식활성을 조사한 결과, EN-3를 혼합하여 면역한 경우가 항원 단독의 경우에 비하여 높은 비장세포의 증식활성을 유도하였다. 이 결과는 EN- 3가 항원에 대한 세포성 및 체액성 면역반응을 유효하게 증진시키는 면역증강제로의 활성이 있음을 제시하였다.
- 결과에서 보여주는 것처럼 BSA 단독면역의 경우는 낮은 항체가를 나타냄으三서 정상 혈청과 비교하여 유의하게 높은 항체가를 가지는 항기〕가 생산되지 않았으나, BSA를 EN-3와 혼합하여 면역한경우느 유의하게 높은 항체가가 유도됨을 확인하였다. 본 모델에서 EN-3 50 ng 및 0.5 |ig의 농도는 5 |ig 보다 유의 적2卫 낮은 활성을 보임으로서 5卩g의 동시투여가 적정농도임을 확인하였다(Fi;. 3A). 항체의 역가는 최종면역 2주 후인 4주 째에 가장 높은 月향을 보였으며, 5주 째부터 급격하게 항체가가 낮아지는 결과를 보여주었다.
- 한편, EN-3에 FIA를 혼합하여 adjuvants. 사용한 경우는 실험에 적용한 모든 cytokine 에서 FIA에 비하여는 높은 cytokine의 생산양식을 보였고, 대조군으로 사용한 FCA의 경우와 비교한 결과, IL-4의 생산 양식만 낮은 결과를 보였고 나머지 cytokine의 유도양4은 유사한 경향을 보였다. 특히, EN-3는 조사한 여러 가지 cytokine에서 항원에 대하여 특이적인 GM-CSF2] 유도를 증진시켰다.
- 또한 면역 마우스의 비 장세포를 항원 OVA오]■ 재자극한 후 비장세포의 증식활성을 조사한 결과, EN-3를 혼합하여 면역한 경우가 항원 단독의 경우에 비하여 높은 비장세포의 증식활성을 유도하였다. 이 결과는 EN- 3가 항원에 대한 세포성 및 체액성 면역반응을 유효하게 증진시키는 면역증강제로의 활성이 있음을 제시하였다.
- EN-3는 thioglycollate에 의하여 유도된 mac-ophages를 자극하여 IL-1, TNF-a 및 IL-12을 생산하였고, silic;i-induced dendritic-like cells에 대하여 항원 BSA 및 EN-3 의 듬시배양은 각 시료 단독배양에 비하여 높은 TNF-a 및 IL12을 생산하였다. 이 결과는 EN-3가 면역자극활성 및 항원제시 세포의 성숙을 증진시킴으로서 이후 항원 특이적인 T 세포의 활 성화를 유도한다는 점을 제시하였다. 항원 BSE] EN-3를 혼합 하여 면역한 결과 EN-3는 BSA에 대한 항체의 역가를 높이는 활 성이 있었고, 항원 OVA에 EN-3를 혼합 후 FIZ] 유화시켜 면 역한 결과, OVA에 대한 항체가는 FCA를 사용한 경우에 비하여 높은 활성이 있었다.
- 25)Silica-유도 복강 세포에서 DC로 추정되는 MHC U+, CD80+ 및 CD86+ 세포는 약 20% 정도이며, 나머지는 대식세포 및 lymphocyte# 포함하는 세포로 구성됨을 보고한 바, 22)silica-유도 복강세포에서 TNF- a를 생산하는 세포는 주로 대식세포로 추정되었다. 이들 silica- 유도 복강세포와 항원 및 EN-3 단독 혹은 항원과 EN-3의 동시 자극 결과, TNF-a의 유도 양식은 항원 단독으로는 유도되지 않았고, EN-3 + 항원의 경우는 EN-3 단독의 경우에 비하여 2.5배 이상 높은 TNF-a의 생산 양식을 보였다. 결국, EN-3는 복강 세포의 TNF-a의 생산성을 증진시킴으로서 미성숙 DC를 성숙시키게 되고, 따라서 항원에 대한 항원제시능을 획득한 성숙 DC는 IL-12를 생산함으로서 항원 특이적인 T 세포의 활성화가 유도되는 것으로 생각되었다.
- 항원 BSE] EN-3를 혼합 하여 면역한 결과 EN-3는 BSA에 대한 항체의 역가를 높이는 활 성이 있었고, 항원 OVA에 EN-3를 혼합 후 FIZ] 유화시켜 면 역한 결과, OVA에 대한 항체가는 FCA를 사용한 경우에 비하여 높은 활성이 있었다. 이때 생산된 항체의 subisotype는 주로 IgGl and IgG2b이었으며, 면역 마우스의 비장세포를 항원 OVA로 자 극후 배양상등액에 생산된 cytokine을 조사한 결과 항원 특이적 인 Thl(IL-2, IFN-)와 GM-CSF) 및 Th2-type의 cytokine(IL-4, IL-6와 IL-10)이 증가된 결과를 얻었다. 또한 면역 마우스의 비 장세포를 항원 OVA오]■ 재자극한 후 비장세포의 증식활성을 조사한 결과, EN-3를 혼합하여 면역한 경우가 항원 단독의 경우에 비하여 높은 비장세포의 증식활성을 유도하였다.
- 이 결과는 EN-3가 면역자극활성 및 항원제시 세포의 성숙을 증진시킴으로서 이후 항원 특이적인 T 세포의 활 성화를 유도한다는 점을 제시하였다. 항원 BSE] EN-3를 혼합 하여 면역한 결과 EN-3는 BSA에 대한 항체의 역가를 높이는 활 성이 있었고, 항원 OVA에 EN-3를 혼합 후 FIZ] 유화시켜 면 역한 결과, OVA에 대한 항체가는 FCA를 사용한 경우에 비하여 높은 활성이 있었다. 이때 생산된 항체의 subisotype는 주로 IgGl and IgG2b이었으며, 면역 마우스의 비장세포를 항원 OVA로 자 극후 배양상등액에 생산된 cytokine을 조사한 결과 항원 특이적 인 Thl(IL-2, IFN-)와 GM-CSF) 및 Th2-type의 cytokine(IL-4, IL-6와 IL-10)이 증가된 결과를 얻었다.
- 3A). 항체의 역가는 최종면역 2주 후인 4주 째에 가장 높은 月향을 보였으며, 5주 째부터 급격하게 항체가가 낮아지는 결과를 보여주었다. 결국 adjuvant로서 EN-3는 항원에 대한 체액 성 "역중강 작용을 유도하나 면역반응의 지속기간을 연장시키는 활성은 없는 것으로 사료되었다.
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