선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 본 연구에서는/"nonoqyiogenes의 listeriolysin O gene(ZiZyA) primer를 이용한 PCR법으로 균의 신속한 검출 및 신뢰성 있는 동정을 하기 위한 방법을 찾고자 하였다. 또한 축산물의 위생관리 및 안전성을 보다 더 향상시키 고 소비자에 게 안전한 식육을 공급함으로서 시 민보건 향상에 이바지하고자 한다.
- 찾고자 하였다. 또한 축산물의 위생관리 및 안전성을 보다 더 향상시키 고 소비자에 게 안전한 식육을 공급함으로서 시 민보건 향상에 이바지하고자 한다.
- 이 PCR법을 축산믈의위생검사에 적용시키면, Z monocytogenese 오염도를 신속하게 monitoring하는 효과적인 방법이 될 수 있을 것으로 사료된다. 이러한 방법을 활용하여 토축과정에서 L monocytogenes의 오염을 최소화하여 도축장의 위생관리를 강화함으로서, 안전한 축산물을 공급하고자 한다. 앞으로 PCR방법의 민감도나 검출한도에 대한 연구와 분리주에 대한 역학적인 분석이 지속적으로 수행되어야 할 것이다.
제안 방법
- 1.monocytogenes 에 특이적인 primer는 lysteolysin O에 위치하는 hly gene을 검출하기 위하여 primer LL4와 LL5를 (주)바이오니아에 합성 의뢰하여 제조하였다(Table 2).
- 1.monocytogenese- 분리 동정된 12주의 O 항혈청에 대한 응집반옹은 rapid slide agglutination test로 수행하였으며 Listeria O antisera (Difco Laboratories, USA) type 1 및 4를 사용하여 실시하였다.
- Blood agar에서 g-hemolysis를 나타낸 집락 올 tryptic soy agar에 계대배양한 후 API Listeria(biomerieux, Lyon, France)에 접종하여 37C 에서 18~24시간 배양하여 arylamidase, esculin의 hydrolysis, a-irannosidase, Ebarabitol, xylose, rhamnose, a -methyl-D-glucoside, ribose, glucose-1 -phosphate, tagatose 8종에 대한 효소 활성과 당분해, 기질생산 등의 생화학적 성상검사와 CAMP test, catalase test 등올 실시하였다.
- ">enrichmeia:하였다. Broth에서 esculin을 분해한 것을 선택배지인 PALCAM agar나 Oxford agar에 37℃, 48시간 배양하여 black halo를 가진 grey colony를 분리하여, 최소한 5개의 colony 를 blood agar에 24시간 배양하여 8-hemolysis를 확인하였다.
- 5U Taq DNA polymerase(Takara) 를 사용하였으며 template로 2以를 넣어 PCR 을 실시하였다. PCR 반웅조건온 94t 1분간 denaturation, 55C 1분간 aimealing, 72℃ 2분간 extension 과정을 30 cycle 실시하였으며, 최종 cycle의 extensione 4분으로 하였다. PCR 반응산물 5μl을 1.
- PCR 반웅조건온 94t 1분간 denaturation, 55C 1분간 aimealing, 72℃ 2분간 extension 과정을 30 cycle 실시하였으며, 최종 cycle의 extensione 4분으로 하였다. PCR 반응산물 5μl을 1.2% agarose gel에 전기 영동 하여 특이밴드를 확인하였다
- PHmei의 특이성을 조사하기 위해 L monocytogenes, L grayi, L welshimeri, L innocua, L ivanovii, L murrayi 등의 표준균주 및 야외분리 주, S enteritidis, E coll, E coli O157:H7, Staphylococcus aureus 의 DNA를 분리하여 동일한 조건에서 PCR 반응을 실시한 다음 1.2% agarose g 이에서 전기영동 하여 1.monocytogenese} 특이 증폭산물인 520 bp의 DNA 절편을 확인하였다.
- 멸균된 가아제로 swabing한 BPD액 1ml를 9ml의 Fraser 및 LEB broth에 접종하여 37℃에서 24~48시간 및 4℃에서 7일간 cold enrichmeia:하였다. Broth에서 esculin을 분해한 것을 선택배지인 PALCAM agar나 Oxford agar에 37℃, 48시간 배양하여 black halo를 가진 grey colony를 분리하여, 최소한 5개의 colony 를 blood agar에 24시간 배양하여 8-hemolysis를 확인하였다.
- 즉, PCR mixture는 lx PCR buffer (Takara), 0.2mM dNTP, 1μM의 각각의 primer와 2.5U Taq DNA polymerase(Takara) 를 사용하였으며 template로 2以를 넣어 PCR 을 실시하였다. PCR 반웅조건온 94t 1분간 denaturation, 55C 1분간 aimealing, 72℃ 2분간 extension 과정을 30 cycle 실시하였으며, 최종 cycle의 extensione 4분으로 하였다.
대상 데이터
- 1.monocytogenese] 검출에 필요한 primer 는 listeolysin O gene(hlyA) 으로부터 LL4와 LL5 primer를 합성하여 사용하였으며, PCR 결과는 Fig 1과 같다. L monocytogenes 및 야외분리 주 12주 모두에서 520bp의 특이적인 증폭 산물이 나타났다(Fig 1).
- 소, 돼지도체에서 분리된 L monocytognens 12주와 국립수의과학검역원에서 분양 받은 1.monocytognens 표준균주를 양성 대조 균주로사용하였으며 음성 대조로는 멸균 증류수를 사용하였다,
- 표준균주는 국립수의과학검역원에서 분양 받아 사용하였으며 (Table 1), L monocytogenes 분리를 위한 재료는 2000년 2월부터 2001년 12 월까지 서울시 소재 도축장에 출하되는 소와 돼지의 도체표면으로부터 채취하여 사용하였다.
이론/모형
- PCR 조건은 Thomas 등9)의 방법으로 수행하였다. 즉, PCR mixture는 lx PCR buffer (Takara), 0.
성능/효과
- 2000년 2월부터 2001 년 12월까지 총 1, 785건의 소 도체표면과 돼지 도체표면에서 1.maiocytogenes의 분리를 시도한 결과 총 12건 (0.67%)이 분리되었다. 소에서는 1, 014건 중 7 건(0.
- monocytogenese] 검출에 필요한 primer 는 listeolysin O gene(hlyA) 으로부터 LL4와 LL5 primer를 합성하여 사용하였으며, PCR 결과는 Fig 1과 같다. L monocytogenes 및 야외분리 주 12주 모두에서 520bp의 특이적인 증폭 산물이 나타났다(Fig 1).
- Listeolysin O gene(hlyA)으로부터 LL4와 LL5 primer# 합성하여 PCR법을 확립하였으며, L monocytogenes 표준주와 야외균주 12주에 대하여 특이적인 520bp의 DNA product를 확인할 수 있었다.
- Listeria의 serotypee 처음 Paterson0! type 1에서 4까지 분류하였으나, 그 이후 13종의 혈청형으로 나뉘었으며 , 리스테리아병으로부터 분리되는 대부분의 serotype이 l/2a, l/2b 그리고 4b라고 보고하였다⑸ 본 실험에서 분리된 균주는 모두 type 1이었다. 강 등(2)은 소 체표와 silage에서 분리한 Listeria균의 serotype이 7개의 균주가 type 4였고 3주는 형별할 수 없다고 보고하였고, 허 등3)은 도축장에서 도체와 환경재료에서 동정된 27주 모두 type 1으로 분류되었다고 보고하였다.
- 분리균은 API listAia와 VIDAS LMO kit로 L monocytogenes임을 확인되었고, 혈청 학적 성상 검사 결과 모두 type 1으로 판명되었다.
- 분리된 12주의 Listeria spp를 API Listeria 를 이용하여 생화학적 성상검사를 해 본 결과 arylamidase, xylose, ribose, glucose-1-phosphate, tagatose에서는 음성을 esculin hydrolysis, tr-mannosidase, D-arabitol, rhamnose, a - methyl-D- glucoside 에서는 양성 을 나타내었다. 이와 같은 특성은 Doyle, Genigoergis, Seeligei와 Jones의 분리기준과 일치하였고(2), Fqjisawa 등(3), Beumer 등14)이 보고한 결과와도 동일하여 분리된 균주 모두가 L mono-cytogeMes임을 확인할 수 있었다.
- 위와 같이 본 연구에서는 LL4 및 LL5 primer를 사용하여 L monocytogenese hlyA 유전자를 신속하고, 톡이적으로 검출하고자 하였고, 실험에 사용된 L monocytogenes 표준 균주 및 야외 분리주를 제외한 다른 세균에서도 증폭된 산물이 나타나지 않아 primer의 특이성이 입증되었다.
- 이 PCR 법은 L monocytogene와 다른 Listeria species 및 E coli, E coli O157:H7 그리고 S aureus에 대하여 동일한 조건으로 실험해본 결과 L monc@iogenes에 대해서만 특이적인 증폭산물을 확인할 수 있었다.
- 이 primer를 이용하여 S enteritidis, E coli, E coli O157:H7, Staphylococcus 에 대한 동일조건에서 PCR을 실시한 결과 어떠한 증폭 산물도 관찰되지 않았고, L monocytogenes올 제외한 다른 Listeria species에서도 특이적인 밴드가 관찰되지 않았다(Fig 2).
- 이상의 결과를 통하여 볼 때 PCR법은 특이성과 민감성이 높고, 목적유전자롤 빠르게 중폭시키므로 매우 적은 균수에서도 짧은 시간에 균의 검출이 가능하다. 이 PCR법을 축산믈의위생검사에 적용시키면, Z monocytogenese 오염도를 신속하게 monitoring하는 효과적인 방법이 될 수 있을 것으로 사료된다.
후속연구
- 또한 석 등25)은 L monocytogenes를 동정 분리하는데 소요되는 시간이 선택적인 증균배양 후 PCR법을 사용하였을 경우 1~2주일에서 2일 이내로 줄일 수 있다고 보고하였다. 본 실험에서는 PCR법을 L monocytogenes의 동정 방법으로만 사용하였으나, 검체를 선택증균배양 후에 PCR로 직접 검출하는 방법에 대한 더 많은 연구가 필요할 것으로 생각된다.
- 이러한 방법을 활용하여 토축과정에서 L monocytogenes의 오염을 최소화하여 도축장의 위생관리를 강화함으로서, 안전한 축산물을 공급하고자 한다. 앞으로 PCR방법의 민감도나 검출한도에 대한 연구와 분리주에 대한 역학적인 분석이 지속적으로 수행되어야 할 것이다.
- 검출이 가능하다. 이 PCR법을 축산믈의위생검사에 적용시키면, Z monocytogenese 오염도를 신속하게 monitoring하는 효과적인 방법이 될 수 있을 것으로 사료된다. 이러한 방법을 활용하여 토축과정에서 L monocytogenes의 오염을 최소화하여 도축장의 위생관리를 강화함으로서, 안전한 축산물을 공급하고자 한다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.