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제안 방법
- 세 종류의 변이원 물질 모두 농도 증가에 따라 억제율이 증가함을 나타내었다. 200 μg/plate의 농도가 첨가되었을 때 B(a)P에 대해 67.2%의 억제율을 보였고, 4NQO는 66.8%, Tip-P-1는 648%의 억제율을 보여주었다 Fig. 8.은 TA 100 균주에 대하여 직접변이원물칠로 MNNG (0.4 “g/plate)와 4NQO 그리고 간접변이원물질인 Tip-P-1과 B(a)P을 사용하여 각각의 변이원물질에 대한 생열귀나무 잎의 물 추출물의 억제 효과를 시료의 농도별 첨가에 따라 검토하였다. 네 종류의 변이원물질 모두 농도증가에 따라 억제율이 증가함을 보였고, 가장 높은 억제율을 보이는 것은 직접변이원물질인 MNNG에서 200 μg/plate 농도가 첨가 되었을 때 79.
- 3%의 억제율을 나타내었다. Fig. 2는 TA 100 균주에 대하여 직접변이원물질로 MNNG(0.4 mg/plate) 와 4NQO 그리고 간접변이원물질인 Trp-P-1과 B(a)P을 사용하여 각각의 변이원물질에 대한 생열귀나무 잎의 메탄올 추출물의 억제효과를 시료의 농도별 첨가에 따라 검토하였다. 네 종류의 변이원물질 모두 농도증가에 따라 억제율이 증가함을 보였고 가장 높은 억제율을 나타낸 것은 간 접변 이원물질인 B(a)P에서 200 pg/plate 농도가 첨가 되었을 때 72.
- 7%의 억제율을 보여주었다. Fig. 4은 TA 100 균주에 대하여 직접 변이원물질로 MNNG(0.4 〃 g/plate)와 4NQO 그리고 간접변이원물질인 Trp-P-1과 B(a)P 을 사용하여 각각의 변이원 물질에 대한 생열귀나무 잎의클로르포름 추출물의 억제효과를 시료의 농도별 첨가에 따라 검토하였다. 네 종류의 변이원 물질 모두 농도증가에 따라 억제율이 증가함을 보였고, 거의 비슷한 억제율을 보였으며 그 중에서도 가장 높은 억제율을 보이는 것은 MNNG 에서 200 μg/plate 농도 첨가시 64.
- 6%의 억제율을 보여주었다. Fig. 6은 TA 100 균주에 대하여 직접변이원물질로 MNNG(0.4 μg/plate) 와 4NQO 그리고 간접변이원물질인 Trp-P-1과 B(a)P을 사용하여 각각의 변이원물질에 대한 생열귀나무 잎의 에탄올 추출물의 억제효과를 시료의 농도별 첨가에 따라 검토하였다. 네 종류의 변이원물질 모두 농도증가에 따라 억제율이 증가함을 보였고, 가장 높은 억제율을 보이는 것은 간 접변 이원물질인 B(a)P에서 200 μg/plate 농도가 첨가 되었을 때 80.
- 각 추출물의 검체를 적당한 농도로 에탄올 혹은 메탄올에 희석한 용액 4 ml와 0.2 mM DPPH(l, l-dipenyl-2- picrylhydrazyl) 1 mL씩을 첨가하고 vortex로 균일하게 혼합한 다음 실온에서 30분간 방치한 후 517 nm에서 홉광도를 측정하였다 (12-15).
- 강원도 정서군 일대에서 자생하는 생열귀나무를 잘게 세절하여 음건하고 20 g을 환류냉각기를 부착시킨 플라스크에 넣은 후 시료중량의 20배(400 mL)의 물, 에탄올, 메탄올 및클로로포름 용매를 각각 넣고 수욕상에서 24시간 동안 가온 추출하였다. 여과(여과지 No.
- 건열멸균시킨 glass cap tube에 추출물 및 분획물들을 각각의 농도별로 50 mL씩 첨가하고 변이원 물질을 각각 50 “ L씩 첨가한 다음 대사활성물질이 필요한 경우에는 S-9 mix 250mL를 각각 첨가하였다. 여기에 전 배양시킨 S.
- 생열귀나무 잎의 메탄올 추출물을 plate당 50, 100, 150, 200mg의 농도로 첨가하여 돌연변이 억제효과를 조사한 결과는 Fig. 1, 2와 같다. Fig.
- 이것을 3TC에서 20분간 진탕배양한 후 상기의 돌연변이원성 실험과 같은 방법으로 실험하여 생성된 복귀돌연변이 colony수를 측정하여 항 돌연변이원성 유무를 판정하였다. 생열귀나무 잎의 추출물과 변이원물질의 농도는 예비실험을 통하여 결정하였으며 항 돌연변이 활성은 변이원물 질의 활성에 대한 시료의 억제율(Inhibition, %)로 나타내었다. 또한, 변이원물질은 직접돌연변이원으로서 N-methyl-M- nitro-N, -nitrosoguanidine(MNNG) 4-nitroquinoline-1 - oxide(4NQO) 와 간접돌연변이원 (indirect mutagen)으로 benzo( a)pyrene [B (a )P], 3-amino-l, 4- dimethyl-5H-pyrido-(4, 3-b)indol (Trp-P-1)을사용하였다.
- 생열귀나무의 잎을 시료로 생리활성 기능을 검색하기 위해 메탄올, 에탄올, 클로로포름 및 물 추출물을 조제 하였다. 얻어진 추출물 대하여 DPPH 자유라디칼 소거법에 의한 항산화성 효과와 S.
- 얻어진 각각의 추출물들을 여과한 후 감압 농축한 다음 각각의 추출 수율(%)을 계산하였다.
- 하였다. 얻어진 추출물 대하여 DPPH 자유라디칼 소거법에 의한 항산화성 효과와 S. thphimurium TA98과 TA100을 이용한 항돌연변이 원성 효과를 검토하여 다음과 같은 결론을 얻었다. 생열귀나무 잎의 용매별 추출수율은 물 추출물이 24.
- 음건 세절한 생열귀나무 잎 20 g을 취하여 환류냉각기가 부착된 추출용기에 넣은 후 추출용매인 에탄올, 메탄올, 클로르포름, 그리고 증류수를 각각 400 mL를 가하여 40, 50 및 80℃의 수욕 상에서 24시간 동안 가온 추출하였다. 얻어진 각각의 추출물들을 여과한 후 감압 농축한 다음 각각의 추출 수율(%)을 계산하였다.
- 2 M sodium phosphate buffer를 가하여 최종부피가 700 mL가 되도록 하였다. 이것을 3TC에서 20분간 진탕배양한 후 상기의 돌연변이원성 실험과 같은 방법으로 실험하여 생성된 복귀돌연변이 colony수를 측정하여 항 돌연변이원성 유무를 판정하였다. 생열귀나무 잎의 추출물과 변이원물질의 농도는 예비실험을 통하여 결정하였으며 항 돌연변이 활성은 변이원물 질의 활성에 대한 시료의 억제율(Inhibition, %)로 나타내었다.
- 나타내었다. 직접변이원물질로 알려진 MNNG와 4NQO 그리고 간접변이원물질인 Trp-P-1과 B(a)P을 사용하여 각각의 농도에 따른 돌연변이원성 억제효과를 검토한 결과는 다음과 같다.
대상 데이터
- 1, 2와 같다. Fig. 1은 TA98 균주에 대하여 양성변이원 물질로 직접변이원물질인 4NQO(0.15 mg/plate)와 변이 원의 활성화를 위해 S-9 mix를 필요로 하는 간 접변 이원물질인 Tip-P-l(0.5 "g/plate) 및 B(a)P(10 "g/plate)을 사용하였다. 세 종류의 변이원 물질 모두 농도 증가에 따라 억제율이 증가함을 나타내었다.
- 6%) 순으로 나타났다. 각각의 추출물을 대상으로 생리활성 탐색용 시료로 사용하였다.
- 생열귀나무 잎의 추출물과 변이원물질의 농도는 예비실험을 통하여 결정하였으며 항 돌연변이 활성은 변이원물 질의 활성에 대한 시료의 억제율(Inhibition, %)로 나타내었다. 또한, 변이원물질은 직접돌연변이원으로서 N-methyl-M- nitro-N, -nitrosoguanidine(MNNG) 4-nitroquinoline-1 - oxide(4NQO) 와 간접돌연변이원 (indirect mutagen)으로 benzo( a)pyrene [B (a )P], 3-amino-l, 4- dimethyl-5H-pyrido-(4, 3-b)indol (Trp-P-1)을사용하였다. 항 돌연변이의 활성에 대한 시료의 억제율에 관한 식은 다음과 같다.
- 본 연구에 사용된 생열귀나무는 강원도 정선 생열귀 영농조합에서 생열귀나무의 잎을 공급받아 감별한 후, 증류수로 잘 세척하고, 세절 후 음건 혹은 동결건조 시킨 후, -10℃ 이하의 냉동실에 보관하면서 시료를 사용하였다. 직접 돌연변이 원(direct mutagen)으로서 4-nitroquinoline-1 -oxide (4NQO), N-methyl-N -nitro- Mnitrosoguanidine(MNNG) 과 glucose-6- phosphate(G-6-P), D-biotin, B -nicotinamide-adenine-dinucleotide- phosphate (日-NADP), nutrient broth, l, l-diphenyl-2- picrylhydrazyl (DPPH)는 미국 Sigma 회사 (Aldiich)로부터 구입하였고, 간접돌연변이원 (indirect mutagen) 으로 benzo (a )pyrene[B( a )P] 과 3-amino-l , 4-dimethyl-5H -pyrido-(4, 3-b) indol(TrpPl)과 L-histidinee 일본 和光純藥 (동경) 특급시약을 사용하였다.
- 직접 돌연변이 원(direct mutagen)으로서 4-nitroquinoline-1 -oxide (4NQO), N-methyl-N -nitro- Mnitrosoguanidine(MNNG) 과 glucose-6- phosphate(G-6-P), D-biotin, B -nicotinamide-adenine-dinucleotide- phosphate (日-NADP), nutrient broth, l, l-diphenyl-2- picrylhydrazyl (DPPH)는 미국 Sigma 회사 (Aldiich)로부터 구입하였고, 간접돌연변이원 (indirect mutagen) 으로 benzo (a )pyrene[B( a )P] 과 3-amino-l , 4-dimethyl-5H -pyrido-(4, 3-b) indol(TrpPl)과 L-histidinee 일본 和光純藥 (동경) 특급시약을 사용하였다.
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