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문제 정의
- 본 논문은 예로부터 국내에서 약용으로 많이 사용되어진 장미과의 생열귀나무 중 잎을 연구대상으로 하여 일반성분, 미량성분 분석, 항산화 효과 및 생리적 기능을 밝힘으로써 기능식품의 소재로서의 가치를 제시하고 가공개발 및 의약품 신소재 개발의 기초 자료를 얻는데 목적을 두었다.
가설 설정
- 1) The coefficent of extinction, E% cm, is the theorical absorbance of a 1% solution over an optic path of 1 cm.
제안 방법
- 수소전자공여능은 각 실험을 3회 반복하여 평균을 낸 다음 대조구에 대한 흡광도의 감소정도를 다음 식에 의하여 계산하였다. IGoe 시료가 대조구의 흡광도를 50%로 감소시키는 농도로 표시하였으며, 검체의 농도에 따른 수소전자공여능 변화곡선을 통해 결정 하였다.
- 인은 Hewlett-packard UV/Vis spectrophotometer 8452A를 이용하여 몰리브덴 청비색법으로 분석하였다 (5). 또한 inductivel coupled plasma emission spectroscopy (Varian, Spectra A-220 Fs, Germany)로 일정용액으로 하여 분석하였다.
- 비타민 E는 60% KOH로 검화 후 ethyl-acetate : n-hexane (1:9) 용매로 추출하여 HPLC (Waters, Co, USA)로 분석하였다. HPLC의 분석 조건으로 컬럼은 HP APS Hypersil(200 X 4.
- 생열귀나무 잎 추출물의 높은 항산화력을 나타내는 부분을 보다 더 정제하기 위하여, 메탄올 추출물을 물에 현탁한 후 용매의 극성차에 따라 분획하였다. 즉, 잘게 세절하여 음건한 생열귀나무 잎(100 g)을 메탄올 20 L를 가하여 3일간 냉침 추출하고, 다시 잔류물을 메탄올 20 L로 추출한 뒤, 추 출물을 모두 감압농축하여 메탄올 추출물 (MeOH ex.
- 생열귀나무 잎의 추출물들의 농도를 0.1 mg/mL로 조제하였고 필요시 에탄올로 희석하면서 UV 308 nm와 350 nm에 서의 흡광도를 자외선가시광선 분광광도계(8452A, HP)를 사용하여 측정하였다. 자외선 차단력 (E %cm)은 에탄올 추출물 1% 농도시, 직경 1 cm의 UV cell에서의 흡광도를 측정하여 자외선 차단력을 비교, 검토하였다.
- 일반성분 분석은 식품공전 방법에 따라 분석하였다. 수 분은 105℃ 건조법, 조단백질 함량은 semimicro kjeldahle(N 계수 = 6.25), 조지방 함량은 soxhlet추출법, 회분은 55O℃에 서 백색~회백색의 회분이 얻어질 때까지 회화하여 측정하였다. 탄수화물은 100에서 수분, 조회분, 조지방, 조단백질을 뺀 값으로 결정하였다.
- 5 X10"4 M DPPH 용액 (in methanol)을 1 mL를 첨가한 후 30분간 암소에 방치한 후 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. 수소전자공여능은 각 실험을 3회 반복하여 평균을 낸 다음 대조구에 대한 흡광도의 감소정도를 다음 식에 의하여 계산하였다. IGoe 시료가 대조구의 흡광도를 50%로 감소시키는 농도로 표시하였으며, 검체의 농도에 따른 수소전자공여능 변화곡선을 통해 결정 하였다.
- 추출하여 얻어진 용액을 감압 농축하여 메탄올 엑기스를 얻은 다음 추출물의 높은 항산화력 부분을 보다 더 정제하기 위하여 메탄올 엑기스를 물에 현탁시켰다. 용매의 극성 차에 따라서 헥산, 클로르포름, 에틸아세테이트, 부탄올로 분획한 후 각각의 용매혼합액을 감압 농축하였다. 이때 얻어진 각 분획물의 수율(%)을 계산하였으며 그 방법은 Fig.
- )을 얻었다. 이 메탄올 추출물을 물로 현탁시킨 후, 헥산, 클로르포름, 에틸아세테이트 및 부탄올 순서로 용매분획하여 각각의 분획물을 얻었다. Table 5와 같이 물(34.
- 1 mg/mL로 조제하였고 필요시 에탄올로 희석하면서 UV 308 nm와 350 nm에 서의 흡광도를 자외선가시광선 분광광도계(8452A, HP)를 사용하여 측정하였다. 자외선 차단력 (E %cm)은 에탄올 추출물 1% 농도시, 직경 1 cm의 UV cell에서의 흡광도를 측정하여 자외선 차단력을 비교, 검토하였다.
- 항산화 활성이 탁월한 생열귀나무 잎을 대량 채취하여(약 100g 정도) 음건 세절한 후 추출용기에 넣고 메탄올 20 L로 3일간 상온에서 2회 추출하였다. 추출하여 얻어진 용액을 감압 농축하여 메탄올 엑기스를 얻은 다음 추출물의 높은 항산화력 부분을 보다 더 정제하기 위하여 메탄올 엑기스를 물에 현탁시켰다. 용매의 극성 차에 따라서 헥산, 클로르포름, 에틸아세테이트, 부탄올로 분획한 후 각각의 용매혼합액을 감압 농축하였다.
- 25), 조지방 함량은 soxhlet추출법, 회분은 55O℃에 서 백색~회백색의 회분이 얻어질 때까지 회화하여 측정하였다. 탄수화물은 100에서 수분, 조회분, 조지방, 조단백질을 뺀 값으로 결정하였다.
- 항산화 활성이 탁월한 생열귀나무 잎을 대량 채취하여(약 100g 정도) 음건 세절한 후 추출용기에 넣고 메탄올 20 L로 3일간 상온에서 2회 추출하였다. 추출하여 얻어진 용액을 감압 농축하여 메탄올 엑기스를 얻은 다음 추출물의 높은 항산화력 부분을 보다 더 정제하기 위하여 메탄올 엑기스를 물에 현탁시켰다.
대상 데이터
- 비타민 E는 60% KOH로 검화 후 ethyl-acetate : n-hexane (1:9) 용매로 추출하여 HPLC (Waters, Co, USA)로 분석하였다. HPLC의 분석 조건으로 컬럼은 HP APS Hypersil(200 X 4.6 mm)를 사용하였으며, 이동상은 n-hexane : isopropanol (98:2 v/v)이었다. 형광검출기를 이용하여 Ex.
- 327 nm에서 내부표준법으로 측정하였다. 내부표준물질로 2, 5, 7, 8-pentamethyl-6-hydroxychroman을 사용하였으며 HPLC 분석조건은 Table 1과 같다.
- 본 연구에 사용될 생열귀나무는 강원도 정선 생열귀 영농 조합에서 생열귀나무의 잎을 공급받아 감별하고 증류수로 잘 세척, 세절 후 음건 혹은 동결건조 후 본 실험에 사용하였다. 또한 -KTC이하의 냉동실에 보관하면서 시료를 사용하였다.
- 또한 -KTC이하의 냉동실에 보관하면서 시료를 사용하였다. 추출 용매인 메탄올, 에탄올, 핵산, 클로로포름, 에틸아세테이트 및 부탄올 등의 유기 용매는 특급시약을 사용하였다. 또한 일반성분, 무기질, tocopherol 동족체 함량분석 등에 사용된 황산, 수산화나트륨, 질산, 인산 등 여러 유기용매들도 분석용 특급 시약을 사용하였다.
이론/모형
- 297 nm, Em. 327 nm에서 내부표준법으로 측정하였다. 내부표준물질로 2, 5, 7, 8-pentamethyl-6-hydroxychroman을 사용하였으며 HPLC 분석조건은 Table 1과 같다.
- 각 추출물과 메탄올 분획물들은 Choi 등(7)의 방법에 의한 수소전자공여능에 의해 항산화 활성을 측정하였다. 여러 농도의 시료를 4 mL의 메탄올에 녹여 1.
- 무기질 함량은 시료를 황산-질산 습식 분해법으로 분해한 후 일정용액으로 하여 atomic absorption spectrophotomete r(Varian Spectra AA-300, Australia)5. 분석하였다.
- 칼슘은 인의 간섭을 피하기 위하여 AAS의 manual(4)에 따라 KC1 을 첨가하였으며, nitrous oxideacetylene gas를 사용하였다. 인은 Hewlett-packard UV/Vis spectrophotometer 8452A를 이용하여 몰리브덴 청비색법으로 분석하였다 (5). 또한 inductivel coupled plasma emission spectroscopy (Varian, Spectra A-220 Fs, Germany)로 일정용액으로 하여 분석하였다.
- 일반성분 분석은 식품공전 방법에 따라 분석하였다. 수 분은 105℃ 건조법, 조단백질 함량은 semimicro kjeldahle(N 계수 = 6.
- 분석하였다. 칼슘은 인의 간섭을 피하기 위하여 AAS의 manual(4)에 따라 KC1 을 첨가하였으며, nitrous oxideacetylene gas를 사용하였다. 인은 Hewlett-packard UV/Vis spectrophotometer 8452A를 이용하여 몰리브덴 청비색법으로 분석하였다 (5).
성능/효과
- 생열귀나무 잎의 tcopherol 동족체 함량을 HPLC로 분석한 결과 Table 9에서 보는 바와 같이 전체적으로 a-form(8.21 mg%) 이 다른 6-(0.28 mg%), /-(0.15 mg%), 5-(0.01 mg%)-form에 비해 상당히 많은 함량을 나타내었으며, <5 -forme 거의 존재하지 않은 것으로 나타났다. 비타민 E는 생체에서 항산화 물질로 작용하는데, 이 중 a-form 이 가장 강력한 항산화 능력을 보이는 반면 <5-form이 가장 낮은 효과를 지닌 것으로 알려져 있다.
- 생열귀나무 잎의 메탄올 분획물에 대한 항산화 활성을 검토한 결과 Table 7과 같이 에틸아세테이트 분획물의 항산화 활성 (IC50 : 6.0 µg) 이 가장 강한 활성을 나타내었으며, 그 다음이 부탄올 분획물(IC50: 14.0 µg)로 나타났다. 에틸아세테이트 분획물의 경우, 대조구로 사용한 항산화제들인 butylhydroxytoluene, 비타민 C 및 알파-토코페놀과 유사하게 나타나 항산화 활성이 우수한 것으로 나타내었다.
- 이상의 연구 결과에서와 같이 생열귀나무 잎의 메탄올 추출물과 그 분획물이 높은 항산화 효과와 항돌연변이 활성을 나타냄으로서 약용식물인 생 열귀나무를 이용하여 생 열귀나무 음료 및 차 등의 건강보조식품, 기능성 화장품의 원료 및 천연항산화제등의 의약품 소재 등으로 사용할 수 있는 유용한 식물임을 알 수 있었다.
- 황산-질산법으로 분해한 생열귀나무의 주요한 무기질 함량을 분석한 결과 Table 4에 나타낸 바와 같이 칼륨 성분이 1, 637.2 mg%로 가장 높게 나타났으며, 그 다음으로 칼슘이 219.5 mg%, 인이 182.1 mg% 그리고 마그네슘이 135.1 mg% 등의 순으로 나타났다. 그리고 철분, 아연 및 구리의 함량은 각각 1.
후속연구
- 국내에서 항암 또는 항종양 물질을 검색하는 방법으로는 발암물질 분해능, in vitro와 in vivo 세포 독 성 실험과 병리 조직 면역화학적 방법에 의한 GSTm 양성 병소 등의 방법이 이용되고 있다. 따라서 암을 비롯한 만성 질환(chronic disease)0)] 대한 국민의 관심이 고조되고 있는 현 시점에서 식이 성분 또는 그 합성 유도체들에 의한 화학적 암 예방 연구가 상당히 활성화 될 것으로 기대된다(1).
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