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문제 정의
- 그리 고, IL-6는 간세포가 피 브리노젠과 같은 몇 가지 혈장단백질을 합성하도록 유도하며 B세포 분화를 활성화시키는 B세포 성장인자로 작용한다(26). 따라서, 두 가지 성분이 대식세포를 활성화시켜 이들 사이토카인의 분비에 어떠한 영향을 미치는지 검색하였다.
- 박테리아를 죽이기 위해 대식세포가 분비하는 물질은 여러 가지가 알려져 있지만, 그 중에서 최근에 밝혀진 것으로 일산화질소(nitric oxide)가 있다(16). 따라서, 두 가지 성분이 대식세포의 일산화질소 생산에 어떠한 영향을 미치는지 검색하였다.
- 대식세포의 주 조직 적합 복합체 Ⅱ는 활성화되지 않았을 때는 세포 표면에 적은 양이 발현되지만, 활성화되면 발현되는 양이 현저히 증가하여, T세포에 많은 양의 항원을 전달하여 T세포를활성화시켜 적응면역반응을 유도한다(27). 따라서, 두 가지 성분이 주조직적합 복합체 Ⅱ의 대식세포 표면 발현에 어떠한 영향을 미치는지 실험하였다.
- 그리고, PSP(polysaccharide- peptide)는 담자균류의 일종인 운지버섯 중에서 CovT이라는 특수 균종의 균사체 에서 추출, 정 제 하여 얻은 단백 다당체 성분으로 항암효과가 있는 것으로 알려져 있다(6-8). 따라서, 본 연구는 국내로 수입되어 기능성 식품의 원재료로 사용되고 있는 arabinoxylane과 PSP의 면역세포 활성 능력을 비교 검증하였다.
- 즉, 비장세포의 증식반응이 일어날 때 분비되는 사이토카인의 종류를 알면 사이 토카인이 매개하는 면역반응과 증식 하는 세포의 종류를 구분할 수 있다. 따라서, 비장세포 증식반응이 일어날 때 분비되는 사이토카인의 종류를 알아보았다. 분비되는 사이토카인의 종류를 알아보기 우】하여, 분리한 비장 세포를 5X10°cells/well 넣고, 각 성분의 최대 증식반응을 유도하는 농도인 1,000 Ug/mL을 첨가하여 24시간 배 양한 후 배 양 상층액을 회 수하였다.
제안 방법
- 단일 세포 부유액 을 RPMI 1640 배 양액으로 3회 세 척 한 다음, 5 X 10° cells/mL 농도가 되 게 희 석 한 후 96 well plate에 well 당 IOOrL씩 첨 가하였다. 이 때, 실험 재료를 농도별로 첨 가하여 37"C, 5% CO2 배양기에서 일정시간 배양한 다음, Cell Titer 96 solution(Promega, USA)을 이용하여 세포증식을 측정하였다 (10).
- 항체 생산 세포의 검색은 Cunningham방법 (11)을 이용하였고, 시료투여는 10일간 행하고 6일째에 SRBC 를 lx I" cells/mL이 되도록 조정하여 생쥐의 복강에 0.2 mL 주사하였다. 4일 후 비장을 적출하여 세포 부유액으로 만들어 3회 세 척 후, 1 X 106 cells/mL이 되도록 조정 한 비 장세포 200 UL 와 10% SRBC 36 PL, complement 21 J1L, 그리고 5% FCS- HBSS 액 143 HL를 혼합하여, 자체 제작한 Cunningham cham- ber에 넣어 37℃ incubator에서 1시간 배양하면 항체 생산 세포 주위에 적혈구가 용해된 투명한 용혈반(plaque)이 생성된다.
- 비장세포의 증식반응을 알아보기 위흐!.여, 분리한 비장 세포를 5X105 cells/well 넣고 시료를 농도별로 첨가하여 2일 또는 3일간 배 양하여 증식 정도를 비교하였다. 그 결과, Fig.
- 1% N-1-na- phthyl-ethyiendiamine in HjO : 1% sulfanilamide in 5% H3PO4 = 1 : 1)을 동량 첨가하여 10분간 반응시 킨 후, Microplate reader로 550 nm에서 흡광도를 측정하였다. Nitrite의 농도는 sodium nitrite를 32 μM에서 부터 0.25 RM까지 2배 씩 희석하여 얻은 표준 곡선과 비교하여 계산하였다(16).
- Nylon wool을 이용하여, 비장세포 중에서 부착성을 가진 B세포와 대식세포를 제거한 다음, 순수한 T세포만을 분리하여 3X105 cells/well 넣고, 각 성 분을 농도별로 첨가하여 3일간 배 양하여 증식 반응을 측정하였다. Fig.
- T세포만이 가지고 있는 세포표면 특이 단백질인 Thy 1.2 항원에 대한 항체와 보체를 이용하여 T세포를 제거하고 나머지 부착성 세포들을 G-10 sephadex를 이용하여 제거한 다음, 순수한 B세 포만을 분리 하였다. 분리 한 B 세포를 3x IO, cells/well 넣고, 각 성 분을 농도별로 첨가하여 2일 또는 3일간 배양하여 증식반응을 측정하였다.
- CP (Candida 厂如&7osis)부유액 (8 乂 10、' cells/mL) 50 RL와 식세포 부유액(8x10」cells/mL) 50 μL, 그리고 5% 동계 생쥐 혈청 100 UL> V-bottomed microtitre trayel 주입 하여 CO-2 incubator(37℃, 5% CO?) 에서 3시간 배양하였다. 배양 후 그중 50 虬를 취 충!]서 Sabouraude dextrose agar 네]지 에 옮겨 35'C에서 2일간 배양하여 살아있는 CP colony수를 세어 식세포에 의해 탐식된 CP의 생균수를 표시하였다.
- Arabinoxylane과 PSI* 비장 세포에서 분리한 B세포의 증식을 유도하였고, 대식세포의 탐식 능은 약 20 ~22%정도 증가하였다. 그리 고, 농도 의 존적 으로 대식세포의 일산화질소 생산을 유도하였으며, TNF-a와 Ⅱ.-6 의 생산을 현저하게 유도하였다.
- -4, IFN- 7 분비를 유도하였다. 그리고, arabinoxylanee LPS와 같이 IFN- 7 분비 만을 유도하였지 만, PSP는 Con A와 같이 IL-2, IL-4, IFN- / 분비를 유도하였다. 그■리고, IL-10의 분비도 유도하였다.
- 7)를 24시 간 배양한 다음에 대식세포를 회수하였다. 대식세포 부유액을 PBS(0.5% BSA와- 0.1% sodium azide 포함)에 1 X 107 cells/ mL의 농도로 부유시 킨 후, 50 虬의 세포 부유액 에 적 당량의 FITC로 표지된 항체(anti-MHC class II)를 가하여 4℃에서 30분간 두었다. 염색이 완료된 세포를 PBS로 1회 세척한 후 flow cytometry를 사용해 분석하였다.
- 이때, 증식하는 비장 세포는 T세포 또는 B세포 중에 하나일 가능성이 높다. 따라서, 비장세포에서 T세포만을 따로 분리하여 두 가지 성분을 첨가한 후에 직접적으로 증식반응을 유도하는지를 검 색하였다.
- 유도하였다. 따라서, 증식하는 비장세포는 B세포일 가능성이 높기 때문어〕, 이번에는 B세포 만을 단독으로 분리하여 두 가지 성 분이 B세포의 증식을 유도하는지를 검색 하였다.
- 특히, PSP는 IL-고의 생산도 유도하였다. 또한, 대식세포 표면의 주조직적합 복합체 IKMHC Class II)의 발현을 유도하였다. 이상의 결과로 arabinoxylane과 PSP는 면역반응에 관여하는 T세포, B세포 그리고 대식 세포의 다양한 활성을 유도하는 효과가 있는 것으로 생각되어 면역기능을 강화하는 소재와, 노약자나 회복기 환자 등을 위한 특수 식이용 소재로서 사용이 가능한 것으로 생각된다.
- 비장세포를 이용하였다. 먼저 생쥐의 비장을 분리한 다음, 핀셋이나 메쉬를 이용하여 단일세포 부유액을 만들었다. 단일 세포 부유액 을 RPMI 1640 배 양액으로 3회 세 척 한 다음, 5 X 10° cells/mL 농도가 되 게 희 석 한 후 96 well plate에 well 당 IOOrL씩 첨 가하였다.
- 염색이 완료된 세포를 PBS로 1회 세척한 후 flow cytometry를 사용해 분석하였다. 별도의 세포 부유액 에 FITC나lamsterlgG(Serotec)를 첨가하여 negative con- trol로사용하였으며 , 생존 세포만을 분석 하기 위해 forward scatter/side scatter gating-gr 통해 죽은 세포를 배 제 하였다(9).
- 2 항원에 대한 항체와 보체를 이용하여 T세포를 제거하고 나머지 부착성 세포들을 G-10 sephadex를 이용하여 제거한 다음, 순수한 B세 포만을 분리 하였다. 분리 한 B 세포를 3x IO, cells/well 넣고, 각 성 분을 농도별로 첨가하여 2일 또는 3일간 배양하여 증식반응을 측정하였다. Fig.
- 분리한 생쥐의 비장세포를 10% FCS RPMI 1640배지 1 mW] 희석하여 Nylon wool column에 넣고 37℃, 5%CO-> incubator에 60분간 배양한 후, Nylon wool column을 37℃ 로 미리 데워진 배지로 세척하여 비부착성인 丁세포 만을 순수 분리하여 사용하였다(13).
- 분비 되는 사이토카인의 종류를 알아보기 위 하여, 배양한대 식 세 포주를 5X105 cells/well 넣고, 각 성 분의 최대 증식 반응을 유도하는 농도인 1,000 Ug/mL을 첨가하여 24시간 배 양한 배양 상층액을 회수하였다. 회수한 배양 상층액에 포함되어 있는 사이 토카인의 농도와 종류는 ELISA로 측정 하였다.
- 따라서, 비장세포 증식반응이 일어날 때 분비되는 사이토카인의 종류를 알아보았다. 분비되는 사이토카인의 종류를 알아보기 우】하여, 분리한 비장 세포를 5X10°cells/well 넣고, 각 성분의 최대 증식반응을 유도하는 농도인 1,000 Ug/mL을 첨가하여 24시간 배 양한 후 배 양 상층액을 회 수하였다. 회 수한 배 양 상층액 에 포함되어 있는 사이 토카인의 농도와 종류는 ELISA로 측정하였다.
- 세포증식 측정은 Cell Titer 96* Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay(Promega, USA)를 사용하였으며, 세포 배양액 100 此에 Cell titer 용액을 15 11L씩 첨가하여 4~8시 간동안 배 양한 다음 Microplate reader(Titertek Multiscan Plus, Finland)로 490 nm에서 O.D.값을 측정하여 증식 정도를 측정하였다.
- 실험재료를 첨가하여 대식 세포주(RAW264.7)를 24시 간 배양한 다음에 대식세포를 회수하였다. 대식세포 부유액을 PBS(0.
- 1% sodium azide 포함)에 1 X 107 cells/ mL의 농도로 부유시 킨 후, 50 虬의 세포 부유액 에 적 당량의 FITC로 표지된 항체(anti-MHC class II)를 가하여 4℃에서 30분간 두었다. 염색이 완료된 세포를 PBS로 1회 세척한 후 flow cytometry를 사용해 분석하였다. 별도의 세포 부유액 에 FITC나lamsterlgG(Serotec)를 첨가하여 negative con- trol로사용하였으며 , 생존 세포만을 분석 하기 위해 forward scatter/side scatter gating-gr 통해 죽은 세포를 배 제 하였다(9).
- 기술한 방법에 따라 행하였다. 즉, 비장 세포 부유액 (2X1O7 cells/mL) 200 UL와 1% SRBC 부유액 200 UL를 시험관에 넣고 혼합하여 1, 700 rpm에서 원심 분리한 후, 이 것을 다시 부유시 켜 혈구계산반에 주입 하여 RFC를 현미경으로 관찰하였다. 현미경상에서 비장세포에 SRBC가 3개 이상 부착한 세포를 RFC로 판정하여 다음 공식 에 준하여 계산하였다.
- 즉, 비장 세포 부유액 (2X1O7 cells/mL) 200 UL와 1% SRBC 부유액 200 UL를 시험관에 넣고 혼합하여 1, 700 rpm에서 원심 분리한 후, 이 것을 다시 부유시 켜 혈구계산반에 주입 하여 RFC를 현미경으로 관찰하였다. 현미경상에서 비장세포에 SRBC가 3개 이상 부착한 세포를 RFC로 판정하여 다음 공식 에 준하여 계산하였다.
- 분비되는 사이토카인의 종류를 알아보기 우】하여, 분리한 비장 세포를 5X10°cells/well 넣고, 각 성분의 최대 증식반응을 유도하는 농도인 1,000 Ug/mL을 첨가하여 24시간 배 양한 후 배 양 상층액을 회 수하였다. 회 수한 배 양 상층액 에 포함되어 있는 사이 토카인의 농도와 종류는 ELISA로 측정하였다. Table 1에 나타난 것과 같이 , 비 장세포 중에서 B세포의 증식을 유도하는 LPS는 IFN- r 분비 만을 유도하였고, T세포의 증식을 유도하는 Con A는 비교적 많은 양의 IL-2, Ⅱ.
- 여, 배양한대 식세포주를 5 X 105 cells/well 넣고, 각성분의 최대증식 반응을 유도하는 농도인 1,000 Ug/mL을 첨가하여 24시간 배양하여 상층액을 버리고 배양세포를 회수하였다. 회수한 세포에 anti-MHC class II 항체를 이용하여 염 색한 다음, 유세포분석기 (flow cytometry)를 이용하여 발현정도를 분석하였다. Fig.
대상 데이터
- 면역세포의 증식에 미치는 효과를 측정하기 위하여 생쥐의 비장세포를 이용하였다. 먼저 생쥐의 비장을 분리한 다음, 핀셋이나 메쉬를 이용하여 단일세포 부유액을 만들었다.
- 세포배양에 필요한 배지 RPMI 1640와 배지에 첨가하는 항생제(antibiotic-antimycotic), FCS(fetal calf serum)는 Gibco BRL(USA) 제품을 사용하였으며, 2-ME(2-mercap toethanol), sodium bicarbonate(NaHCOa), N-1 -naphthyl - ethylen diamine와 Sulfanilamide는 Sigma(USA) 제품을 사용하였다. 또한 세포증식을 측정하는데 사용한 시약(Cell Titer 96" Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay) 은 Promega(USA) 제품을 사용하였고, cytokine 측정 에 필요한 항체오k 세포표면 단백질 분자를 염 색하는 각종 항체는 Pharmingen (US A) 제품을 사용하였다 (9).
- 실험동물은 대한실험동물센터에서 특정 병원체 부재 (specific pathogen free) Balb/c생쥐 를 공급받아 실험동물 사육장에 서 폴리 카보네 이 트 사육상자(18X20 cm)당 6개 체의 밀도를 유지하며 사용하였다. 이들 생쥐는 2주일간 실온에서 물과 사료를 충분히 공급하고, 낮과 밤의 주기를 12시간씩 조절하면서 가능한 스트레스를 받지 않도록 사육하면서, 3~12주 사이의 생쥐를 실험에 사용하였다.
- 실험에 사용한 시료인 arabinoxylane과 PSP(polysacch aride- peptide)는 (주)이롬라이프에서 제공받아 사용하였다.
- 유지하며 사용하였다. 이들 생쥐는 2주일간 실온에서 물과 사료를 충분히 공급하고, 낮과 밤의 주기를 12시간씩 조절하면서 가능한 스트레스를 받지 않도록 사육하면서, 3~12주 사이의 생쥐를 실험에 사용하였다.
이론/모형
- 7 cells (5X104 cells/well) were cultured with various concentrations of arabinoxylane and PSP for the production of nitric oxide. After 48 hours of culture, the amounts of NO production were measured by the Griess method as described under Materials and Methods.
- 각종 사이토카인(IL-邛, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-a, IFN- /) 농도 측정은 ELISA법을 이용하였다. 즉, flate- bottomed microwell plate에 goat anti-mouse cytokine 1 차, 항체를 coating buffer# 이용하여 4℃에서 overnight incu~ bation한 후, 3% BSA용액으로 2시간 동안 상온에서 block- ing하였다.
- 비장세포의 Rosette형성세포의 검사는 “Method in im- munology”(12)에서 기술한 방법에 따라 행하였다. 즉, 비장 세포 부유액 (2X1O7 cells/mL) 200 UL와 1% SRBC 부유액 200 UL를 시험관에 넣고 혼합하여 1, 700 rpm에서 원심 분리한 후, 이 것을 다시 부유시 켜 혈구계산반에 주입 하여 RFC를 현미경으로 관찰하였다.
- 안정된 NO 산화물인 NO2 (nitrite)는 Griess 반응을 이용하여 측정하였다. 세포배양 상층액을 flat bottom 96well plate에 100 UL씩 넣고 여기에 Griess시으扌(0.
- NO? 의 농도를 Greiss반응을 이용하여 측정하였다. Fig.
- 탐식능 측정은 小松 등의 방법(15)에 따라 행하였다. CP (Candida 厂如&7osis)부유액 (8 乂 10、' cells/mL) 50 RL와 식세포 부유액(8x10」cells/mL) 50 μL, 그리고 5% 동계 생쥐 혈청 100 UL> V-bottomed microtitre trayel 주입 하여 CO-2 incubator(37℃, 5% CO?) 에서 3시간 배양하였다.
- 분비되는 사이토카인의 종류를 알아보기 우】하여, 분리한 비장 세포를 5X10°cells/well 넣고, 각 성분의 최대 증식반응을 유도하는 농도인 1,000 Ug/mL을 첨가하여 24시간 배 양한 후 배 양 상층액을 회 수하였다. 회 수한 배 양 상층액 에 포함되어 있는 사이 토카인의 농도와 종류는 ELISA로 측정하였다. Table 1에 나타난 것과 같이 , 비 장세포 중에서 B세포의 증식을 유도하는 LPS는 IFN- r 분비 만을 유도하였고, T세포의 증식을 유도하는 Con A는 비교적 많은 양의 IL-2, Ⅱ.
성능/효과
- Arabinoxylanee T세포의 증식을 유도하지 못하였지만, PSP는 높은 농도에서 T세포의 증식반응을 유도하였다. Arabinoxylane과 PSI* 비장 세포에서 분리한 B세포의 증식을 유도하였고, 대식세포의 탐식 능은 약 20 ~22%정도 증가하였다. 그리 고, 농도 의 존적 으로 대식세포의 일산화질소 생산을 유도하였으며, TNF-a와 Ⅱ.
- 7)를 5X10』cells/well 넣고, 각 성분을 농도별로 첨가하여 2일간 배 양한 다음, 배 양 상층 액을 얻어 상층액 중에 포함된 일산화질소의 산화된 형태인 NO? 의 농도를 Greiss반응을 이용하여 측정하였다. Fig. 5에 나타난 것과 같이, arabinoxylane과 PSP를 첨가하였을 때 농도 의존적으로 무처리 대조군에 비해 현저히 많은 양의 일산화질소를 생산하는 것으로 나타났다.
- 3에 나타난 것과 같이, Con A에 의 해서는 증식반응이 유도되지 않고, LPS에 의해서만 증식반응이 유도되는 것으로 나타나 B세포가 순수하게 분리된 것을 알 수 있었다. psp가 반응 2일째와 3일째 에 농도 의존적으로 높은 증식반응을 유도하였지 만, ara- binoxylanee 상대적으로 낮은 증식반응을 유도하는 것으로 나타났다. 즉, PSP는 지속적으로 증식 반응을 유도하는 것으로 생각되었고, arabinoxylane의 경우에 비장세포의 증식반응보다 낮은 것은 비장에 있는 B세포 이외의 다른 세포들의 도움이 증식반응에 필요하기 때문인 것으로 생각된다.
- Table 3에 나타난 것과 같이 , 대식 세포를 활성 화시 키는 물질인 LPS와 IFN-r에 의해서 IL-6와 TNF-a 생산량이 대조군에 비해 현저히 증가하였다. ■리고, 두 가지 성분 모두 무처리 대조군에 비해 많은 양의 IL-6와 TNF- a 생 산을 유도하는 것으로 나타났다. 특히, PSP는 대조군에 비해 IL-6는 약 67 배, TNF- a 는 약 15배 정도 많은 양을 생산하도록 유도하였으며, arabinoxylane의 경우에는 대조군에 비해 IL-6는 약 9배, TNF- a 는 약 3.
- 여, 분리한 비장 세포를 5X105 cells/well 넣고 시료를 농도별로 첨가하여 2일 또는 3일간 배 양하여 증식 정도를 비교하였다. 그 결과, Fig. 1과 같이 B세포의 증식을 특이적으로 유도하는 LPSdipo- polysaccharide)와 T세 포의 증식 을 특이 적 으로 유도하는 Con A(concanavalin A)에 의해서 비장세포는 농도에 의존적으로 2일째 최대 증식반응을 나타내 었고, 3일째 약간 감소하는 것으로 나타났다. 그리고, 배양 2일째는 arabinoxylane과 PSP를 첨가하였을 때도 농도 의존적으로 비 장세포의 증식반응이 나타났다.
- 증식 반응이 일어났다. 그리 고, PSP는 arabinoxylane 보다 지속적인 증식반응을 유도하는 것으로 나타났다.
- 6에서 나타난 것과 같이, 대식 세포를 활성화시키는 물질인 LPS와 IFN- z 에 의해서 주조직적합 복합체 II의 세포 표면 발현량이 증가하였다. 그리고, 두 가지 성분 모두 주조직적 합 복합체 Ⅱ의 세포 표면 발현량을 증가시키는 것으로 나타났다. 발현 정도는 PSP가 arabinoxylane 보다 발현 량이 많은 것으로 나타났고, PSP는 강력한 대식세포 활성 화 물질 인 LPS와 IFN- / 보다 많은 양의 주조직 적 합 복합체 II의 발현을 유도하는 것으로 나타났다.
- -4, IL-10의 생산도 유도하였다. 그리고, 항체 생산 세포수를 나타내는 PFCe 11 ~ 14%, 활성 화된 T세포수를 나타내는 RFC 은 9 — 30% 증가하였다. Arabinoxylanee T세포의 증식을 유도하지 못하였지만, PSP는 높은 농도에서 T세포의 증식반응을 유도하였다.
- 4는 생쥐의 복강에서 얻은 복강 대식세포가 Candida parapsilosis에 대한 탐식작용을 나타낸 결과이다. 대조 군의 탐식 능이 47±6%에 비해 arabinoxylane 투여군 69±7%, PSP 투여군 65±5%로 탐식 작용이 유의 하게 증가하는 경 향을 보였다.
- 두 가지 성 분이 모두 비 장세포의 증식 을 유도하는 효과가 있는 것으로 나타났지 만, T세포에 대해 고농도의 PSP 만이 증식반응을 유도하였다. 따라서, 증식하는 비장세포는 B세포일 가능성이 높기 때문어〕, 이번에는 B세포 만을 단독으로 분리하여 두 가지 성 분이 B세포의 증식을 유도하는지를 검색 하였다.
- 항체 생성을 증강하는 경향을 보였다. 또한 비장세포에 Rosette형성을 관찰한 결과는 대조군은 비장세포 lxl(f당 102±14개의 Rosette를 형성하였으며, PSP 투여군은 125±10개로 9%, arabinoxylane 투여 군은 133 ±14개로 30% 대조군에 비하여 증강된 유의성 (P<Q05)을 나타냈다.
- 그리고, 두 가지 성분 모두 주조직적 합 복합체 Ⅱ의 세포 표면 발현량을 증가시키는 것으로 나타났다. 발현 정도는 PSP가 arabinoxylane 보다 발현 량이 많은 것으로 나타났고, PSP는 강력한 대식세포 활성 화 물질 인 LPS와 IFN- / 보다 많은 양의 주조직 적 합 복합체 II의 발현을 유도하는 것으로 나타났다.
- 본 실험의 결과 PSP와 arabinoxylanee 면역강화(immuno-stimulant) 소재와 특수 식이용(노약자, 회복기환자, 면역결핍자) 소재로서 사용이 가능한 것으로 생각된다.
- 비장세포의 PFC형성을 통한 항체 생성능은 대조군(245 ±23/5><1。6 cells)에 비하여 PSP 투여 그룹(272±23/5X 1紡cells)은 11%, arabinoxylane 투여군(281 ±24/5 x 10° cells)은 14% 항체 생성을 증강하는 경향을 보였다. 또한 비장세포에 Rosette형성을 관찰한 결과는 대조군은 비장세포 lxl(f당 102±14개의 Rosette를 형성하였으며, PSP 투여군은 125±10개로 9%, arabinoxylane 투여 군은 133 ±14개로 30% 대조군에 비하여 증강된 유의성 (P<Q05)을 나타냈다.
- 위 실험에서 두 가지 성분이 모두 비장세포의 증식을 유도하는 효과가 있는 것으로 나타났다. 이때, 증식하는 비장 세포는 T세포 또는 B세포 중에 하나일 가능성이 높다.
- 5배 정도 많은 양을 생 산하였다. 이 러 한대식 세포의 사이토카인 생산량은 강력한 대식세포 활성 물질인 LPS로 유도된 양보다 많은 것으로 나타났다. 그리고, PSP는 arabinoxylane이 유도하지 못하는 ILT.
- 그리고, 배양 2일째는 arabinoxylane과 PSP를 첨가하였을 때도 농도 의존적으로 비 장세포의 증식반응이 나타났다. 이때 arabinoxylane과 PSP의 증식 반응 정도는 서로 비 슷하였지 만, 반응 3일째는 arabinoxylane의 경우에 2일째 반응보다 낮게 나타났지 만, PSP는 2일째보다 더 높은 반응이 나타났다. 즉, 3일째 까지 계속해서 비 장세 포의 증식을 유도하는 것으로 생각된다.
- 2에 나타난 것과 같이, 분리된 T세포는 LPS와 Con A에 대해 증식반응을 나타내지 않는 것으로 보아서 순수하게 분리된 것을 알 수 있었다. 이렇게 순수하게 분리된 T세포에 대해 두 가지 성분 모두 비 장세포와 같은 정도의 증식 반응을 유도하지 는 않는 것 으로 나타났다. 그러나, PSP의 경우 고농도(1,000 Ug/mL) 에서 약한 증식반응을 유도하는 것으로 나타났다.
- 이상의 결 과로, arabinoxylane과 PSP는 비 장세포 중에서 특히 B세포의 증식을 유도하며, PSP는 B세포 이외 에 丁세포의 증식도 유도하는 것으로 나타났다.
- 이상의 결과로 arabinoxylane과 PSP 모두가 비장 세포의 증식반응을 유도하였으며, 최 대농도인 1,000 Ug/mL에서 최대 증식 반응이 일어났다. 그리 고, PSP는 arabinoxylane 보다 지속적인 증식반응을 유도하는 것으로 나타났다.
- 이상의 결과로 arabinoxylane과 PSP는 비 장세포를 직 접 자극하여 IFN- 7 분비를 유도하였으며, 특히 PSP는 IFN- 7 뿐만 아니라 IL-2, IL-4, IL-10 분비도 유도하는 것으로 나타났다. 그리 고, 분비를 유도하는 사이 토카인의 종류를 비교하였을 때, arabinoxylanee 비장세포 중에서 B세포를, PSP는 B세포와 T세포를 자극하여 증식을 유도하는 것으로 생각된다.
- 이상의 결과로 볼 때 arabinoxylane과 PSP는 B서포 활성화, 丁세포 증식 및 PFC의 면역세포 활성 에 영향을 주고 있음을 확인하였으며 arabinoxylane이 PSP보다 항체 생성능, 丁세포 증식능이 다소 우수한 것으로 나타났다.
- 이상의 결과로, 두 가지 성 분 모두가 대 식 세포를 활성 화 시켜 대식세포 표면의 주조직적합 복합체 Ⅱ의 발현 양을 증가시키는 것으로 나타났다.
- 이상의 결과로, 두 가지 성 분 보두 대식 세포를 활성화시 켜일산화질소 생산을 직접적으로 유도하는 것으로 생각된다.
- 이상의 결과로, 두 가지 성분 모두 대식세포를 강력하게활성화시켜 많은 양의 IL-6와 TNF-a 생산을 유도하였으며, 특히 PSP는 IL-고의 생산도 유도하는 것으로 나타났다. 대식세포의 주조직적합 복합체 IKMHC Class II) 발현 대 식 세 포의 또 다른 기 능은 식 세 포 작용으로 잡아먹 은 항원을 세포성 면역을 담당하는 T세포에게 전달하는 항원 제시 세포 기능이다.
- 이러한 결과는 비 장세포에서 분비 되는 사이 토카인의 종류를 확인하고 예상한 것과 일치하는 것으로 생각된다. 즉, arabinoxylane 은 순수 분리 한 T세포의 증식반응을 유도하지 못하였지 만, 고농도의 PSP는 비장세포의 증식반응보다 약하지만, 유의한 증식반응을 유도한다는 것을 알 수 있었다.
- ■리고, 두 가지 성분 모두 무처리 대조군에 비해 많은 양의 IL-6와 TNF- a 생 산을 유도하는 것으로 나타났다. 특히, PSP는 대조군에 비해 IL-6는 약 67 배, TNF- a 는 약 15배 정도 많은 양을 생산하도록 유도하였으며, arabinoxylane의 경우에는 대조군에 비해 IL-6는 약 9배, TNF- a 는 약 3.5배 정도 많은 양을 생 산하였다. 이 러 한대식 세포의 사이토카인 생산량은 강력한 대식세포 활성 물질인 LPS로 유도된 양보다 많은 것으로 나타났다.
후속연구
- 또한, 대식세포 표면의 주조직적합 복합체 IKMHC Class II)의 발현을 유도하였다. 이상의 결과로 arabinoxylane과 PSP는 면역반응에 관여하는 T세포, B세포 그리고 대식 세포의 다양한 활성을 유도하는 효과가 있는 것으로 생각되어 면역기능을 강화하는 소재와, 노약자나 회복기 환자 등을 위한 특수 식이용 소재로서 사용이 가능한 것으로 생각된다.
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