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문제 정의
- 본 실험 의 목적은 Saccharomyces cereuisiea를 단백분해 효소로 처 리하여 얻은 가수분해물 SCP-20의 첨가가 마우스 의 생식 기능에 미치는 영향을 평가하기 위하여 실시하였다. 개시 시 체중 32~33 g의 7주령 ICR 웅성 마우스 40수를 공시 하여 SCP-20의 급여가 정소무게 및 정소상체 미부 정자의 운동특성 미치는 영향을 평가하였다.
- 본 실험의 목적은 Saccharomyces cereuisiea를 단백분해 효소로 처 리하여 얻은 가수분해물 SCP-20의 첨가가 웅성 마 우스의 생식 기능에 미치는 영향을 평가하기 위하여 실시하였다.
- 웅성 마우스에게 효모가수분해물 SCP-20의 급여가 정소 상체 미부의 정자수 및 정자활력도에 미치는 영향을 평가하기 위하여 실시하였다.
제안 방법
- 본 실험 의 목적은 Saccharomyces cereuisiea를 단백분해 효소로 처 리하여 얻은 가수분해물 SCP-20의 첨가가 마우스 의 생식 기능에 미치는 영향을 평가하기 위하여 실시하였다. 개시 시 체중 32~33 g의 7주령 ICR 웅성 마우스 40수를 공시 하여 SCP-20의 급여가 정소무게 및 정소상체 미부 정자의 운동특성 미치는 영향을 평가하였다. 실험설계는 분쇄한 가 루형태의 일반 마우스 식이를 급여한 대조군(CON)과 대조 군 식이에 효모가수분해물 SCP-20을 1.
- 개시 시 체중 32~33 g의 7주령 ICR 웅성 마우스 40수를 공시 하여 SCP-20의 급여가 정소무게 및 정소상체 미부 정자의 운동특성 미치는 영향을 평가하였다. 실험설계는 분쇄한 가 루형태의 일반 마우스 식이를 급여한 대조군(CON)과 대조 군 식이에 효모가수분해물 SCP-20을 1.5% 첨가한 처리군 (TRT)으로 하였다. 정소무게에 있어서는 대조군과 비교하여 처리군의 정소무게가 유의적으로 더 높게 평가되었다 (p<0.
- 효모가수분해 물 SCP-20은 Saccharomyces cerevisiea IFO 2346을 2% 포도당, 0.6%(NH4)2SO4, 0.1% MgSO4 - 7H2O, 0.2% KH2PO4, 0.03% K2HPO4, 0.1% NaCl로 구성된 배지를 이용하여 30℃에서 48시간 동안 배 양한 후, 3, 000 xg에서 원 심 분리 하여 균체를 회 수하였다. 회 수한 균체 에 50 mM 인산 완충용액 (pH 7.
- 1% NaCl로 구성된 배지를 이용하여 30℃에서 48시간 동안 배 양한 후, 3, 000 xg에서 원 심 분리 하여 균체를 회 수하였다. 회 수한 균체 에 50 mM 인산 완충용액 (pH 7.0)을 균체 량의 10배량 가하고, pronase(Sig- ma Chemical Co., St. Louis, Mo)를 균체 량의 0.5%가 되 게 가하여 30℃에서 6시 간동안 가수분해를 실시하였다. 6시간 후 효소를 불활성화시키기 위해 100℃ 수욕에서 10분간 방치한 후, 8, 000xg에서 원심분리하여 얻은 상징액을 분무건조하여 SCP-20-S- 생 산하였다.
- 총 점 등시 간은 일일 14시간이 되 도록 조절하였다. 실험기간중 마우스 식이(삼양유지사료)를 분쇄하여 가루형태로 급여하였다.
- 개시시 체중 32~33 g의 웅성 마우스 40수를 공시하여 10일간 실험을 실시하였다. 실험설계는 분쇄한 가루형태의 일반 마우스 식이를 급여한 대조군(CON)과 대조군 식이에 SCP-20을 1.5% 첨가한 처리 군(TRT)으로 하여 처리 당 5회 , 회당 4마리씩 완전임의배치하였다.
- 실험식이는 가루 형태로 자유섭취토록 하였으며, 물은 자 동급수기를 이용하여 자유로이 먹을 수 있도록 하였다. 체중 은 실험 개시시와 실험 종료시에 측정하여 체중 증가량을 계산하였다.
- 실험식이는 가루 형태로 자유섭취토록 하였으며, 물은 자 동급수기를 이용하여 자유로이 먹을 수 있도록 하였다. 체중 은 실험 개시시와 실험 종료시에 측정하여 체중 증가량을 계산하였다.
- 경추를 탈구하여 복부를 절개한 후 양쪽 정소와 정소상체를 분리하였다. 실체 현미경을 이용하여 지방조직 을 제거한 후 좌우 정소의 무게를 측정하였다.
- 정소상체 미부 정자의 운동성을 측정하기 위해서 24시간 전에 Ham's F10(Gibco, USA) 배양액을 4-well dish(Nunclon™, NUNC Brand Products, Denmark)에 넣어 전배양한 후, 정 소상체미부를 배양액에 넣은 상태에서 주사기 바늘을 이용하여 정소상체미부를 punching 하였다. 정소상체미부 정자 가 함유된 배 양액 을 37℃, 5% CO2 배 양기”(Forma Scientific, USAJ에서 3시간동안 배양한 후 정자의 운동성을 분석하였다.
- 정소상체 미부 정자의 운동성을 측정하기 위해서 24시간 전에 Ham's F10(Gibco, USA) 배양액을 4-well dish(Nunclon™, NUNC Brand Products, Denmark)에 넣어 전배양한 후, 정 소상체미부를 배양액에 넣은 상태에서 주사기 바늘을 이용하여 정소상체미부를 punching 하였다. 정소상체미부 정자 가 함유된 배 양액 을 37℃, 5% CO2 배 양기”(Forma Scientific, USAJ에서 3시간동안 배양한 후 정자의 운동성을 분석하였다.
- 정자의 운동 특성은 위상차 현미경(Olympus BX-50, Japan) 과 CCD 카메라(Toshiba, Japan)를 통해 연결된 SAIA(Med- ical Supply, Ltd., Korea)를 이용하여 정자의 운동성 (mo- tility), 단위시간당 시점에서 종점까지의 속도를 나타내는 직선운동속도(straightTine velocity; VSL), 정자의 실제 이 동경로에 따른 이동속도인 곡선 운동속도(curvilinear velocity; VCL), 곡선이동경로에 대한 평균 이동을 나타내는 평균경로속도(average-path velocity; VAP), 평균이동경 로와 실제이동경 로와의 측방거리 차인 측두거리 (amplitude of lateral head displacement; ALH), 곡선 경로선형도(li- nearity; LIN), 평균경로 선형도(straightness; STR), 고활력 정 자(hyperactivated sperm percent; HYP) 그리고 정 자 이 동속도 분석을 rapid, medium, slow로 분류하여 분석하였다. 본 실험에 사용된 SAIS의 초기 설정치는 Table 1과 같다.
- 그러나 평균이동경로와 실제이동경로 와의 측방거리차인 측두거리 (amplitude of lateral head displacement; ALH)와 고활력정자(hyperactivated sperm percent; HYP) 농도는 처리 군과 비교하여 대조군이 더 높았 으나 유의 적 인 차이를 보이지 않았다. 또한, 웅성 마우스 사 료내 SCP-20의 첨가가 정자 이동속도에 미치는 영향을 분 석하였다(Fig. 1). 웅성 마우스에게 SCP-20을 급여하면 정소 상체 미 부 정 자의 속도가 증가하는 것으로 나타났으며 , Fig.
- 실험종료 후, 웅성 마우스를 5시간 절식시킨 후, 체중을 측정하였다. 경추를 탈구하여 복부를 절개한 후 양쪽 정소와 정소상체를 분리하였다.
대상 데이터
- 대한바이오링크에서 구입한 7주령, 체중 32~33 g의 ICR 웅성 마우스를 사용하였다. 사육실 온도는 23±3℃, 상대습 도 50±10%, 환기 횟수 5회/hr, 조도 200 Lux 조건하에서 유 지 하였다.
- 개시시 체중 32~33 g의 웅성 마우스 40수를 공시하여 10일간 실험을 실시하였다. 실험설계는 분쇄한 가루형태의 일반 마우스 식이를 급여한 대조군(CON)과 대조군 식이에 SCP-20을 1.
데이터처리
- 모든 자료는 SAS(5)를 이용하여 SCP-20의 급여 에 따른 정소무게 및 정자 운동 특성에 대한 유의성 검정은 Student t-test에 의하여 실시하였다.
성능/효과
- 05). 정 자의 직 선운동속도(VSL)는 대조군과 비교하여 처리군에서 유의적으로 높았다(p<0.05). 평균경로속도(VAP) 와 곡선경 로선형 도(LIN)는 대조군과 비교하여 처리 군이 더 높았다(p<0.
- 05). 또한, 웅성 마우스에 게 SCP-20을 급여 하면 정소상체 미부 정자의 운동속도가 증가하는 것으로 나타났 다(p<0.05). 결론적으로, 마우스에 게 SCP-20를 급여 하면 정 자의 운동속도가 증가하는 것으로 나타났다.
- 05). 결론적으로, 마우스에 게 SCP-20를 급여 하면 정 자의 운동속도가 증가하는 것으로 나타났다.
- 웅성 마우스 식이내 SCP-20의 첨가가 체중 증가량 및 정소 무게 변화에 미치는 영향을 Table 2에 나타내었다. 체중 증가 량에 있어서는 대조군과 비교하여 처 리군의 마우스 체중 증 가량이 낮게 평가되 었으나 유의적인 차이는 보이지 않았다. 정소무게에 있어서는 대조군과 비교하여 처리군의 정소무 게가 29%(1834 vs 2374 mg) 더 높게 평가되 었다(p<0.
- 1) Forty male mice with an average initial body weight of 32 ~ 33 g.
- 1) Forty male mice with an average initial body weight of 32 ~ 33 g.
- 05). 곡선이동경로에 대한 평균 이동을 나타내는 평균 경로속도를 나타내는 average-path velocity]VAP)와 곡선 경로선형도(linearity; LIN)는 대조군과 비교하여 처리군이 더 높았다(p<0.05). 그러나 평균이동경로와 실제이동경로 와의 측방거리차인 측두거리 (amplitude of lateral head displacement; ALH)와 고활력정자(hyperactivated sperm percent; HYP) 농도는 처리 군과 비교하여 대조군이 더 높았 으나 유의 적 인 차이를 보이지 않았다.
- 1). 웅성 마우스에게 SCP-20을 급여하면 정소 상체 미 부 정 자의 속도가 증가하는 것으로 나타났으며 , Fig. 1에서 볼수있는것처럼 정자의 운동속도중 rapid 를 나타내는 정자의 비율이 유의적으로 높아졌다(pCO.05).
- 본 실험에 사용한 SCP-20은 천연물질로서 여성의 경우 월경주기에 따른 감정, 행동, 정신적 변화로 인해 결혼생활, 사회 생활 그리고 가사 등에 상당한 정도의 장애를 가져오는 월경전증후군 감소 효과가 보고되 었다(4). 이와 같은 결과는 SCP-20의 항스트레스 효과를 나타낸 것으로 본 실험결과에 서도 SCP-20을 웅성 마우스에게 급여할 경우, 직선운동속 도, 평균경로속도, 곡선경로선형도 그리고 정소상체 미부 정 자의 운동속도가 증가한 것으로 나타났다. 그러나 SCP-20이 웅성 마우스에생식기능에 미치는 영향에 대한 명확한 기전 이 아직까지 확립되지 않은 상태이며, 현재 항스트레스성 물질 인 SCP-20과 생식기능 향상에 대한 실험을 계획중에 있다.
- 5% 첨가한 처리군 (TRT)으로 하였다. 정소무게에 있어서는 대조군과 비교하여 처리군의 정소무게가 유의적으로 더 높게 평가되었다 (p<0.05). 정 자의 직 선운동속도(VSL)는 대조군과 비교하여 처리군에서 유의적으로 높았다(p<0.
- 05). 평균경로속도(VAP) 와 곡선경 로선형 도(LIN)는 대조군과 비교하여 처리 군이 더 높았다(p<0.05). 또한, 웅성 마우스에 게 SCP-20을 급여 하면 정소상체 미부 정자의 운동속도가 증가하는 것으로 나타났 다(p<0.
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