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문제 정의
- 따라서 본 연구에서는 올리브 잎의 각종 용매 분획물에 대한 총 플라보노이드 및 총 페놀 함량, 페놀성 화합물 분석, ACE(Angiotensin I-converting enzyme) 저해작용, 아질산염 소거능, paper disk법을 이용한 항균활성 등을 측정, 비교하여 올리브 잎과 용매 분획물의 항균 활성과 아질산염 소거능 등을 구명하고 식품가공시 활용될 수 있는 기초자료를 제공하고자 하였다.
제안 방법
- 올리브잎 80% 에탄올 추출물과 용매별 추출분획물의 항균효과 검색은 paper disc"'법으로 측정하였다. 각 시험균주를 해당 액체 배지에 24시간 전 배양하였고, 평판배지의 조제는 각각의 생육배지로 멸균된 1.5% agar를 petridish에 20m/분주하여 응고시킨 후 각 시험균액을 O.lmZ씩 첨가하여 멸균된 유리봉으로 배지위에 고르게 펴지도록 도포하여 사용하였다. 용매 분획물들을 일정농도로 주입한 paper disc(8 mm, Toyo Roshi Kaicha, Ltd.
- 2에 나타난 바와 같이 올리브잎 에탄올 추출물을 물에 녹여 분획여두에 넣고 헥산을 첨가하여 헥산층과 물층을 분획한 후 감압농축하여 헥산 분획물을 얻었다. 동일방법으로 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄 올을 순차적으로 가하여 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올 및 물 분획물을 각각 얻었다. 이들 분획물들은 감압농축 및 진공건조하여 용매를 완전히 제거한 후 고형분의 함량을 구하였다.
- 즉, Folin-Dennis시 약은 sodium tungstate 10g, phosphomolybdic 2g, phosphoric acid 5ml를 메스플라스크에 넣고 증류수로 정용한 후 삼각플라스크에 옮겨 2시간 동안 환류조작하여 사용하였다. 실험방법으로는 캡튜브에 중류수 7m/씩 넣고 DMSO(dir]ylsulxide)에 녹인 시료를 1ml씩 넣은 후 Folin-Dennis 시약을 0.5m/ 를 첨가 후 정확히 3분 후에 sodium carbonate anhydrous 포화용액 1ml, 증류수 0.5ml를 넣은 후 725nm에서 흡광도를 측정하여 표준용액과 비교하여 총 페놀 함량을 구하였다. 표준용액으로는 tannic acid(Sigma co.
- 올리브 잎의 식품가공시 활용될 수 있는 기초자료를 제공하고자 올리브잎 80%에탄올 추출물과 용매 분획물의 총 플라보노이드, 총 페놀, 페놀성 화합물, ACE 저해작용, 아질산염 소거능, 항균활성 등을 측정, 비교하였다. 올리브잎 80% 에탄올 추출물의 총 플라보노이드 함량은 5.
- 올리브잎 추출물의 제조는 20~30 mesh로 조분쇄된 올리브잎 250g에 약 10배의 80% 에탄올을 첨가한 후 80℃ 수욕상에서 3시간동안 환류냉각하면서 3회 반복 추출하여 조여과한 후 24시간동안 4℃ 에서 정치, 10, 000xg로 원심분리, 50℃에서 감압농축한 후 동결건조하여 Fig. 1과 같이 올리브잎 에탄올 추출 물을 제조하였다. 이 에탄올 추출물을 극성이 다른 용매를 이용하여 단계적으로 분획하였다.
- lmZ씩 첨가하여 멸균된 유리봉으로 배지위에 고르게 펴지도록 도포하여 사용하였다. 용매 분획물들을 일정농도로 주입한 paper disc(8 mm, Toyo Roshi Kaicha, Ltd. Japan)를 평판배지 위에 흡착시켜 멸균수 30M를 주입 후 37℃ 에서 24시간 배양하여 paper disc 주변의 inhibition clear zone의 직 경(mm)을 측정하였다.
- 1과 같이 올리브잎 에탄올 추출 물을 제조하였다. 이 에탄올 추출물을 극성이 다른 용매를 이용하여 단계적으로 분획하였다. 즉 Fig.
- 4mZ을 가하여 잘 혼합하였다. 이 혼합액을 실온에서 15분간 방치한 후 분광 520nm에서 흡광도를 측정, 잔존하는 아질산량을 구하였다. 공시험은 Griess시약 대신 증류수를 0.
대상 데이터
- 본 실험에 사용한 올리브 잎은 호주산으로 2003년에 수확한 것을 medifood사(Sydney, Australia)로부터 양도받아 사용하였다. 수확한 올리브 잎을 물로 잘 씻어 흙이나 먼지 등의 이 물질을 제거하고 이를 40±5℃ 에서 열풍건조 시킨 후 분쇄기(IKA M20, IKA, Germany)로 20~30 mesh로 조분쇄하여 시료로 사용하였다.
- 본 실험에 사용한 올리브 잎은 호주산으로 2003년에 수확한 것을 medifood사(Sydney, Australia)로부터 양도받아 사용하였다. 수확한 올리브 잎을 물로 잘 씻어 흙이나 먼지 등의 이 물질을 제거하고 이를 40±5℃ 에서 열풍건조 시킨 후 분쇄기(IKA M20, IKA, Germany)로 20~30 mesh로 조분쇄하여 시료로 사용하였다.
- 5ml를 넣은 후 725nm에서 흡광도를 측정하여 표준용액과 비교하여 총 페놀 함량을 구하였다. 표준용액으로는 tannic acid(Sigma co., St. Louis, USA)를 사용하였다.
데이터처리
- 실험결과는 SAS package(release 8.01)를 이용하여 평균土표준편차로 표시하였고, 평균값의 통계적 유의 성은 p<0.05 수준에서 Duncan's multiple range test⑺ 에 의해 검정하였다.
이론/모형
- ACE 저해작용은 Chsuman과 Cheung의 방법''에 의하여 측정하였다. 먼저 Angiotensin-I 전환효소(토끼 의 허파에서 분리 정제한 것) 1g에 400mM sodium borate buffer (pH 8.
- 올리브잎 80% 에탄올 추출물과 용매별 추출분획물의 항균효과 검색은 paper disc"'법으로 측정하였다. 각 시험균주를 해당 액체 배지에 24시간 전 배양하였고, 평판배지의 조제는 각각의 생육배지로 멸균된 1.
- 아질산염 소거작용은 Gray와 Dugan 의 방법에 의하여 측정하였다. 즉 1 mM NaNO2 용액 1mZ에 일정 농도의 시료 1mZ를 가하고 0.
- 총 페놀 함량은 Folin-Dennis법에 의하여 분석하였다. 즉, Folin-Dennis시 약은 sodium tungstate 10g, phosphomolybdic 2g, phosphoric acid 5ml를 메스플라스크에 넣고 증류수로 정용한 후 삼각플라스크에 옮겨 2시간 동안 환류조작하여 사용하였다.
- 페놀성 화합물 분석은 Benavente-Garcia 등의 방법에 따라 80% EtOH 추출물과 각각의 용매 분획물 들을 DMSO에 녹인 후 0.45um menbrane filter로 여과하여 시료로 하였다. 이때 사용한 칼럼은 U- Bondapak Cis, (300x3.
성능/효과
- 8%이었다. 각각의 분획물 중 부탄올층의 총 플라보노이드 함량은 7.49%로 에틸아세테이트층(7.13%)과 함께 유의적으로 가장 높았으며 헥산층이 1.50%로 가장 낮았다.
- 8%의 아질산염 소거능을 보여 유의적으로 낮은 효과를 보였다. 농도에 대한 올리브잎 분획물의 아질산염 소거능은 부탄올층과 에틸아세테이트층에서만 농도에 비례하여 그 효과가 크게 증가하였을 뿐, 헥산층, 클로로포름층 및 물층에서는 효과를 보이지 않았다.
- 4%로 유의적으로 높은 값을 나타내었다. 반면, 헥산, 클로로포름 및 물층은 0.5% 농도에서 각각 45.8, 43.9, 47.8%의 아질산염 소거능을 보여 유의적으로 낮은 효과를 보였다. 농도에 대한 올리브잎 분획물의 아질산염 소거능은 부탄올층과 에틸아세테이트층에서만 농도에 비례하여 그 효과가 크게 증가하였을 뿐, 헥산층, 클로로포름층 및 물층에서는 효과를 보이지 않았다.
- 8%이었다. 부탄올층의 총플라보노이드 함량은 7.49%로 에틸아세테이트 층(7.13%)과 함께 유의적으로 가장 높은 함량을 보였고 헥산층이 1.50%로 가장 낮았다. 총 페놀 함량의 경우에도 부탄올층에서 17.
- 8%로 증가하는 경향을 보였다. 분획물들 중에서는 0.5% 농도에서 부탄올층과 에틸 아세테이트층 에서 각각 76.0%와 75.4%로 유의적으로 높은 값을 나타내었다. 반면, 헥산, 클로로포름 및 물층은 0.
- 올리브잎 80% 에탄올 추출물의 경우 Bacillus cereus, Staphylococcus aureus, Escherichia coll, Salmonella enteritidis에 대하여 항균력을 나타내었고 추출물의 농도(100~800]ig/disc)가 증가함에 따라 항균효과도 증가하였다. 분획물들의 항균효과는 부탄올층과 에틸 아세테 이 트층에서 만 Bacillus cereus, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Salmonella emeritidis 에 대해서 강한 항균력을 보였을 뿐 헥산층과 클로로포름층에서는 항균력을 보이지 않았다.
- 올리브잎 80% 에탄올 추출물과 각각의 분획물에 대한 ACE 저해효과는 매우 약하게 나타났다. 아질산염 소거능은 80% 에탄올 추출물, 부탄올층과 에틸아세테이트층에서 각각 72.8%, 76.0%와 75.4%이었고 헥산, 클로로포름 및 물층은 각각 45.8, 43.9, 47.8%의 효과를 보여 유 의적으로 낮은 효과를 보였다.
- 올리브잎 80% 에탄올 추출물과 각각의 분획물에 대한 페놀성 화합물의 함량을 비교한 결과는 Table 2와 같다. 올리브 잎 80% 에탄올 추출물의 주요 페놀 성 물질은 oleuropein이었고 rutin, caffeic acid, vanillin 도 소량 존재하는 것으로 나타났으나 catechine 검출되지 않았다. 부탄올층과 에 틸아세 테 이 트층도 oleuropein이 주요 페놀성 물질이었고 rutin, caffeic acid, vanillin도 미량 존재하였다.
- 3%)은 유의적으로 낮았다. 올리브 잎의 주요 페놀성 물질은 oleuropein 이었으며 80% 에탄올 추출물, 부탄올층, 에틸아세테이트층의 oleuropein 의 함량은 각각 102.11±0.02, 173.35±0.03, 152.71 ±0.03mg/100g 으 로 부탄올층에 가장 많이 함유되어 있었다. 항균력은 올리브잎 80% 에탄올 추출물, 부탄올층, 에틸아 세테 이트층에서 Bacillus cereus, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Salmonella enteritidis에 대하여 강한 항균력을 보인 반면 헥산층과 클로로포름층 에서는 항균력을 보이지 않았다.
- 항균력은 올리브잎 80% 에탄올 추출물, 부탄올층, 에틸아 세테 이트층에서 Bacillus cereus, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Salmonella enteritidis에 대하여 강한 항균력을 보인 반면 헥산층과 클로로포름층 에서는 항균력을 보이지 않았다. 올리브잎 80% 에탄올 추출물과 각각의 분획물에 대한 ACE 저해효과는 매우 약하게 나타났다. 아질산염 소거능은 80% 에탄올 추출물, 부탄올층과 에틸아세테이트층에서 각각 72.
- 올리브잎 80% 에탄올 추출물과 각각의 분획물에 대한 ACE 저해효과는 부탄올층에서만 11.07%로 미비한 효과를 나타냈을 뿐 다른 분획물들에서는 1.08 ~2.74%로 고농도(10mg/m/)에서조차도 그 효능이 약한 것으로 나타났다.
- 올리브잎 80% 에탄올 추출물과 각각의 분획물에 대한 항균효과를 비교한 결과는 Table 3과 같다. 올리브잎 80% 에탄올 추출물의 경우 Bacillus cereus, Staphylococcus aureus, Escherichia coll, Salmonella enteritidis에 대하여 항균력을 나타내었고 추출물의 농도(100~800]ig/disc)가 증가함에 따라 항균효과도 증가하였다. 분획물들의 항균효과는 부탄올층과 에틸 아세테 이 트층에서 만 Bacillus cereus, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Salmonella emeritidis 에 대해서 강한 항균력을 보였을 뿐 헥산층과 클로로포름층에서는 항균력을 보이지 않았다.
- 5와 같다. 올리브잎 80% 에탄올 추출물의 아질산염 소거능은 추출물의 농도가 0.01 ~0.5%로 증가할수록 8.1 ~72.8%로 증가하는 경향을 보였다. 분획물들 중에서는 0.
- 올리브 잎의 식품가공시 활용될 수 있는 기초자료를 제공하고자 올리브잎 80%에탄올 추출물과 용매 분획물의 총 플라보노이드, 총 페놀, 페놀성 화합물, ACE 저해작용, 아질산염 소거능, 항균활성 등을 측정, 비교하였다. 올리브잎 80% 에탄올 추출물의 총 플라보노이드 함량은 5.81%이었고 총 페놀함량은 14.8%이었다. 부탄올층의 총플라보노이드 함량은 7.
- 이에 반해 헥산층과 클로로포름층에는 oleuropein의 함량이 유의적으로 매우 적었으며 물층에서는 oleuropein이 검출되지 않았다. 이상의 결과로 볼 때 올리브 잎의 주요 페놀성 물질은 oleuropein임을 알 수 있었고 부탄올층과 에틸아세테이트층에 가장 많이 존재하는 것으로 나타났다.
- 50%로 가장 낮았다. 총 페놀 함량의 경우에도 부탄올층에서 17.5%로 가장 높았고 헥산층(3.4%)과 클로로포름층(4.3%)은 유의적으로 낮았다. 올리브 잎의 주요 페놀성 물질은 oleuropein 이었으며 80% 에탄올 추출물, 부탄올층, 에틸아세테이트층의 oleuropein 의 함량은 각각 102.
- 총 페놀 함량의 경우에도 부탄올층에서 17.5%로 가장 높았으며 에틸아세테이트층이 15.3%로 나타났고 헥산층(3.4%)과 클로로포름층(4.3%)은 총 페놀함량이 상대적으로 낮았다.
- 플라보노이드, 총 페놀 및 페놀성 화합물들의 함량이 높은 부탄올층과 에틸아세테이트층이 강하게 나타나 항균력과 페놀성 물질간의 상관관계가 있는 것으로 나타났다. 즉, 올리브 잎의 항균력은 주요 페놀성 물질인 oleuropein에 기인된 것으로 추정된다.
- 03mg/100g 으 로 부탄올층에 가장 많이 함유되어 있었다. 항균력은 올리브잎 80% 에탄올 추출물, 부탄올층, 에틸아 세테 이트층에서 Bacillus cereus, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Salmonella enteritidis에 대하여 강한 항균력을 보인 반면 헥산층과 클로로포름층 에서는 항균력을 보이지 않았다. 올리브잎 80% 에탄올 추출물과 각각의 분획물에 대한 ACE 저해효과는 매우 약하게 나타났다.
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