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문제 정의
- 비교 연구하였다. 또한, 강력한 산화제인 KBrO3 유도에 대한 생쥐 소핵시험을 실시하여 산화적 염색체 손상에 대한 억제 효과를 규명하여 이에 보고하는 바이다.
- 卵)특히, 야채와 과일에는 암 예방과 노화 억제에 관련이 깊은 항산화성분인 폴리페놀이 많이 함유되어있는 것으로 알려져 있다.이에 본 연구에서는 한국인들이 즐겨 먹는 5종의 야채 및 4종의 과일로부터 flavonoid를 비롯한 폴리페놀 화합물들이 다량으로 들어있는 엑스를 제조하고, 이 엑스의 항산화활성과 산화적 유전독성억제활성을 밝혀 이들의 예방약학적 용도를 개발하기 위한 기초연구를 수행하였다.
제안 방법
- 건조야채로부터의 회수율은 약 22%(w/w)였다. 한편, 강원도 양구산 사과(MzZws pumilar), 배 (Pyrus communis), 포도(Vitis vinifera), 제 주산 감귤(C"ms aurantium)^ 세척하고 1:1:1:1의 비율로 섞고 주정(대한주정 )을 30 Z를 가하고 실온에서 20일간 방치하였다. 이것을 여과하고 농축하여 암갈색의 연조엑스(Bioactive Fruits, BF)를 얻었다.
- 5종의 야채로부터 추출된 야채생리활성추출물과 4종의 과일로부터 추출된 과일생리활성추출물 및 이들로 제조된 액상 조성물들을 대상으로 하여 항산화작용을 평가하기 위하여 free radical 소거 작용과 지 질 과산화억 제 효과를 측정 하는 한편 , pro-oxidant effect를 비교 연구하였다. 또한, 강력한 산화제인 KBrO3 유도에 대한 생쥐 소핵시험을 실시하여 산화적 염색체 손상에 대한 억제 효과를 규명하여 이에 보고하는 바이다.
- 만든다. 60|imol DPPH 2 m/에 DMS0에 용해시킨 BV BF 및 CP의 소정농도용액 2 m/을 가하고 5 분간 섞고 3어吉 간 방치 후 520nm에서 측정하였다.戚
- 만들어진 반응용액은 vortex mixer로 즉시 혼합하고 aluminum foil 로 감싸서 16시간 동안 55℃에서 배양시켰다. 각각의 반응용액에 4% BHT ethanol solution 50 W 를 분주하여 산화를 정지시킨 다음 항산화 정도를 TBA법点 측정하였다.圮18)
- 건조하였다. 건조된 야채를 1:1:1:1: 0.1의 비율로 섞고 여기에 주정(대한주정) 20/와 정제수 20/를 가해 20일간 실온에서 방치하고 여과 후 농축하여 암녹색의 연조엑스(Bioactive Vegetables, BV)를 얻었다. 건조야채로부터의 회수율은 약 22%(w/w)였다.
- 24시간 후 마우스 꼬리 정맥을 주사바늘로 찔러 소량 분출해 나오는 혈액을 미리 acridine orange로 코팅된 슬라이드 상에 떨어뜨렸다. 곧 카바글래스를 덮고 적어도 2시간 이후에 1,000개의 망상적혈구 (reticulocyte, RET) 중 소핵을 가진 망상적혈구(micronucleated reticulocyte, MNRET)를 관찰하였다. 관찰은 형광현미경 (blue excitation, 488 nm & yellow filter, 515nm)°fl서 1000X로 하였다.
- 곧 카바글래스를 덮고 적어도 2시간 이후에 1,000개의 망상적혈구 (reticulocyte, RET) 중 소핵을 가진 망상적혈구(micronucleated reticulocyte, MNRET)를 관찰하였다. 관찰은 형광현미경 (blue excitation, 488 nm & yellow filter, 515nm)°fl서 1000X로 하였다. 한편, CP는 2주 동안 물 대신 음용시킨 후 2주의 마지막 4 일 동안 하루에 한번 混대조물질로 KBrO3 80meg> 복강 주사하고 24시간 후에 채혈하여 동일하게 시험하였으며 대조군은 CP 대신 물을 주었다.
- 마우스 꼬리정맥혈을 이용하여 소핵시험을 실시하였다. 2。)양성대조물질로는 생체 내에서 superoxide anion, NO, H2<32 등을 생성시키는 산화적 스트레스 유발물질인 KBrC)3를 사용하였다.
- 2。)양성대조물질로는 생체 내에서 superoxide anion, NO, H2<32 등을 생성시키는 산화적 스트레스 유발물질인 KBrC)3를 사용하였다. 마우스에 4일간 하루에 한번 KBrO3 80㎎/㎏을 복강 주사하고 동시에 BV와 BFf- 용량별로 경구투여하였다. 24시간 후 마우스 꼬리 정맥을 주사바늘로 찔러 소량 분출해 나오는 혈액을 미리 acridine orange로 코팅된 슬라이드 상에 떨어뜨렸다.
- 후 사용했다. 사료는 삼양유지의 마우스식 pellet 사료를 주었으며, 물은 자유롭게 먹게 하고, 12 h/12 h(UD) cycle의 조건에서 실험하였다.
- 산화적 stress에 대하여 보호활성을 갖는 chemopneventive agents를 창출하기 위하여 5종의 야채로부터 추출된 야채 생리활성추출물(Bioactive Vegetables, BV)와 4종의 과일로부터 추출된 과일 생리활성추출물(Bioactive Fruits, BF) 및 이들을 함유하여 저조된 액상조성물(Chungpae Plus®, CP)을 가지고 유리기 소거 능력과 지질과산화억제활성을 시험하였다. 시험결과 BV와 BF는 강력한 유리기 소거능력을 지닌 것으로 알려진 vitamin C 보다는 낮았으나 농도의존적인 프리라디칼소거능을 보여주었다.
- 이용하여 시험하였다. 증류수에 2% sodium dodecyl sulfate-f 가온하여 용해시키고 0.79mmol potassium cliloride, 0.25 mmol Trizma (pH 7.4), 1 |imol FeCl2 용액이 되도록 조제하겨 혼합용액을 만들었다. 이 용액 4.
- 관찰은 형광현미경 (blue excitation, 488 nm & yellow filter, 515nm)°fl서 1000X로 하였다. 한편, CP는 2주 동안 물 대신 음용시킨 후 2주의 마지막 4 일 동안 하루에 한번 混대조물질로 KBrO3 80meg> 복강 주사하고 24시간 후에 채혈하여 동일하게 시험하였으며 대조군은 CP 대신 물을 주었다.
대상 데이터
- 실시하였다. 2。)양성대조물질로는 생체 내에서 superoxide anion, NO, H2<32 등을 생성시키는 산화적 스트레스 유발물질인 KBrC)3를 사용하였다. 마우스에 4일간 하루에 한번 KBrO3 80㎎/㎏을 복강 주사하고 동시에 BV와 BFf- 용량별로 경구투여하였다.
- 강원도 양구지방에서 재배된 배추(Emssica campestris), 무청 (JRaphanus sativus'), 양파汤cepa), 오이 (C初泌, 知s sativus), 샐러리00汤所 garveolense: 구입하여 물로 세척 한 후 건조기에서 건조하였다. 건조된 야채를 1:1:1:1: 0.
- 실험대상 액제(Chungpae Plus®, CP)는 아래와 같은 조성으로 제조하였으며 약 100℃의 물에서 멸균하여 사용하였다. 액제 100 ml 중 조성은 다음과 같다.
- 콘 실험에서 사용한 ICR 생쥐는 (주)대한실험동물에서 공급받아 강원대학교 약학대학 동물사육실 내에 있는 양압의 무균동물챔버에서 23±1℃ 및 상대습도 55±7%의 조건으로 7~10일 적응시킨 후 사용했다. 사료는 삼양유지의 마우스식 pellet 사료를 주었으며, 물은 자유롭게 먹게 하고, 12 h/12 h(UD) cycle의 조건에서 실험하였다.
이론/모형
- 따랐다. Chlorophylle 식품공전 엽록소함유식품의 총 엽록소 정량법(4)에 따랐으며, organic acid는 식품공전 중 매실 추출 식품의 유기산 산도 시험법⑸에 따랐다. 정량용 시약은 대부분 Sigma제를 사용하였다.
- 검체들의 지질과산화 억제효과를 측정하기 위하여 Fenton's reagent를 이용하여 시험하였다. 증류수에 2% sodium dodecyl sulfate-f 가온하여 용해시키고 0.
- 1%의 높은 활성을 나타내어 BV 및 BF 와 비슷한 편이었다. 본 실험은 ethyl linoleate를 사용하여 Fenton reactiori에 의해 생성된 . 0H의 지질과산화작용에 대한 억제 효과를 관찰하는 것으로서 나타난 결과로 보아 BV BE CP 는 혼합물임에도 불구하고 비교적 강한 지질과산화억제 효과가 있는 것으로 판단되었다.
- 추출물 중의 total polyphen이은 Slinkard and Singleton법, (2) total flavonoid는 식품공전 프로폴리스식품의 총 플라보노이드 정량법 13)에 따랐다. Chlorophylle 식품공전 엽록소함유식품의 총 엽록소 정량법(4)에 따랐으며, organic acid는 식품공전 중 매실 추출 식품의 유기산 산도 시험법⑸에 따랐다.
성능/효과
- 본 실험은 ethyl linoleate를 사용하여 Fenton reactiori에 의해 생성된 . 0H의 지질과산화작용에 대한 억제 효과를 관찰하는 것으로서 나타난 결과로 보아 BV BE CP 는 혼합물임에도 불구하고 비교적 강한 지질과산화억제 효과가 있는 것으로 판단되었다.
- 幼)이들은 point mutation이나 deletion을 포함하는 돌연변이를 nuclear DNA에서 일으키며 mitochodrial DNA에서의 oxidative damage는 노화 세포에서의 에너지 결핍을 일으켜서 돌연변이의 축적이 일어난다.23) DNA 수복의 결핍은 세포사를 일으키고 이것은 인접세포들에 있어서 carcinogenesis로의 촉진적 자극을 일으키게도 한다.
- KBr03는 세포 내 02- 등 ROS, lipid peroxidation, 8-hydroxy guanosine을 생성시키는 물질로서 발암성이 있는 물질이다.25)BV와 BF는 100, 500㎎/㎏ 투여에서 유의성 있는 억제효과를 나타내었으며, CP의 경우에는 2주 동안 물대신 음용시킨 군에서 유의적인 억제 효과를 나타내었다. 본 시험에서는 vitamin C를 대조물질로서 사용하지 않았지만 Sai 등에 의하면 흰쥐에서 KB1O3에 유도된 소핵이 vitamin C에 의해 감소되었음을 보고하고 있다.
- BV BE CP 모두 처리농도에서 유의성이 있는 프리라디칼 소거 작용을 나타내었으며 처리농도범위에서 BV가 BF보다 다소 활성이 높았다. CP도 처리농도(1~10%)에서 유의성 있는 소거활성을 나타내었다.
- 나타내었다. BV BE CP 모두 처리농도에서 유의성이 있는지 질과 산화 억제 작용을 나타내었으며 처리 농도범위에서 BV와 BF는 활성이 비슷한 편이었다. CP도 처리농도(1~10%)에서 유의성 있는 활성을 나타내었다.
- 지질과산화억제 활성시험에서도 vitamin C와 비교될 만한 높은 항산화 활성을 나타내었다. BV와 BF가 함유된 CP도 시험농도에서 유의성 있는 프리라디칼소거 활성과 지질과산화억제활성을 보여주었다.
- Table V에 나타내었다. BV와 BF는 100, 500 ㎎/㎏의 투여농도에서 유의성 있는 억제활성을 나타내었으며 BV으] 경우, 100㎎/㎏에서 33.0%, 500㎎/㎏에서 51.3%의 억제횔성을 나타내었다. BF의 경우에는 100㎎/㎏에서 21.
- DPPH radicale . OH와 비슷한 거동을 하는데 BV BE CP는 vitamin C보다는 약하지만 혼합물임에도 불구하고 비교적 강한 프리라디칼 소거작용이 있는 것으로 나타났다.
- Total polyphenole BV 3.52%, BF 0.96%이 었으며 total flavonoid는 각각 0.402%, 0.075%으로서 BV가 BF보다 함량이 높았다. BV 중 chlolophylle 0.
- 0H 등 유리기들을 소거하고 지질과산화억제작용으로 산화적 스트레스에 대한 보호작용을 하고 있다. 또한, 마辛스 소핵시험에 의하여 KBrQj와 같은 강력한 ROS 유발물질에 의한 염색체 수준에서의 손상에 대해서도 BY BE CP 등 조성물들은 억제효과를 잘 나타내었다. KBr03는 세포 내 02- 등 ROS, lipid peroxidation, 8-hydroxy guanosine을 생성시키는 물질로서 발암성이 있는 물질이다.
- 지질과산화억제활성을 시험하였다. 시험결과 BV와 BF는 강력한 유리기 소거능력을 지닌 것으로 알려진 vitamin C 보다는 낮았으나 농도의존적인 프리라디칼소거능을 보여주었다. 지질과산화억제 활성시험에서도 vitamin C와 비교될 만한 높은 항산화 활성을 나타내었다.
- 이상을 요약하면 BV BF 및 CP 등 조성물들은 flavonoid를 비롯한 항산화성 polyphenol 화합물들을 함유하여 유리기 소거작용과 지질과산화억제활성을 나타내었으며, 염색체 수준에서의 손상에 대해서도 억제효과를 나타내었다. 따라서 BV BF 및 CP 등 조성물들은 산소유리기들에 의한 산화적 손상에 억제적으로 작용하는 기전을 활용하여 항산화, 항노화, 암예방제로서의 응용 가능성이 높은 식물추출물 및 관련제제로서 향후 기능성 식품으로서의 응용가능성이 있는 것으로 판단되었다.
후속연구
- 眾)질병의 예방을 위하여 야채와 과일의 더 많은 섭취가 권장되고 있으나 우리나라 국민의 야채와 과일 섭취량은 외국에 비해 부족한 편이다. 5)따라서 야채와 과일로부터 건강에 유용한 생리활성성분들을 뽑아내어 이를 주성분으로 한 의약학적, 또는 식품학적 제제의 개발이 필요하다.
- 대해서도 억제효과를 나타내었다. 따라서 BV BF 및 CP 등 조성물들은 산소유리기들에 의한 산화적 손상에 억제적으로 작용하는 기전을 활용하여 항산화, 항노화, 암예방제로서의 응용 가능성이 높은 식물추출물 및 관련제제로서 향후 기능성 식품으로서의 응용가능성이 있는 것으로 판단되었다.
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