For measuring general bacterial count and Escherichia coli count, the standard plate count was used to conduct a test on 113 cases of pork carcass surfaces from slaughterhouses in Incheon area from January to February 2003. And Salmonella spp, Staphylococcus aureus and Listeria monocytogenes was use...
For measuring general bacterial count and Escherichia coli count, the standard plate count was used to conduct a test on 113 cases of pork carcass surfaces from slaughterhouses in Incheon area from January to February 2003. And Salmonella spp, Staphylococcus aureus and Listeria monocytogenes was used to conduct a test on 68 cases of pork carcass surfaces and 76 cases of feces, that is to say, a total of 144 cases. The results were obtained as follows: In the case of general bacterial count, 29 cases(25.7%) were in the range of 100∼999 and 62 cases(54.9%) were in the range of 1,000∼9,999 and 22 cases(19.4%) were in the range of 10,000∼99,999. Meanwhile as regards E coli count, 22 cases(19.4%) were in the range of 1∼9 and 69 cases(61.2%) were in the range of 10∼99 and 22 cases(19.4%) were in the range of 100∼999. On 68 cases of pork carcass surfaces, 7 strains(10.2%) of Salmonella spp, and 12 strains(17.6%) of S aureus were detected and 27 strains(39.7%) of L monocytogenes, respectively. As for the detected Salmonella spp, 6 strains of the B group, 3 strains of S enterica subsp salame and 2 strains of S typhimurium were detected, respectively. On 76 cases of feces, 14 strains(18.4%) of Salmonella spp, and 15 strains(19.7%) of L monocytogenes and 14 strains(18.4%) of S aureus were detected respectively. As for the detected Salmonella spp, 6 strains of the B group, 4 strains of S derby and 8 strains of the C group, 5 strains of S rissen were detected, respectively. All of 42 strains of L monocytogenes were type 1. As a result of conducting a toxin test on the detected S aureus, all of 26 strains were found to be non-toxin.
For measuring general bacterial count and Escherichia coli count, the standard plate count was used to conduct a test on 113 cases of pork carcass surfaces from slaughterhouses in Incheon area from January to February 2003. And Salmonella spp, Staphylococcus aureus and Listeria monocytogenes was used to conduct a test on 68 cases of pork carcass surfaces and 76 cases of feces, that is to say, a total of 144 cases. The results were obtained as follows: In the case of general bacterial count, 29 cases(25.7%) were in the range of 100∼999 and 62 cases(54.9%) were in the range of 1,000∼9,999 and 22 cases(19.4%) were in the range of 10,000∼99,999. Meanwhile as regards E coli count, 22 cases(19.4%) were in the range of 1∼9 and 69 cases(61.2%) were in the range of 10∼99 and 22 cases(19.4%) were in the range of 100∼999. On 68 cases of pork carcass surfaces, 7 strains(10.2%) of Salmonella spp, and 12 strains(17.6%) of S aureus were detected and 27 strains(39.7%) of L monocytogenes, respectively. As for the detected Salmonella spp, 6 strains of the B group, 3 strains of S enterica subsp salame and 2 strains of S typhimurium were detected, respectively. On 76 cases of feces, 14 strains(18.4%) of Salmonella spp, and 15 strains(19.7%) of L monocytogenes and 14 strains(18.4%) of S aureus were detected respectively. As for the detected Salmonella spp, 6 strains of the B group, 4 strains of S derby and 8 strains of the C group, 5 strains of S rissen were detected, respectively. All of 42 strains of L monocytogenes were type 1. As a result of conducting a toxin test on the detected S aureus, all of 26 strains were found to be non-toxin.
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문제 정의
이에 도축된 돼지 도체에서 오염 지표 미생물인 일반세균수와 대장균수를 조사하고 또한 도체와 분변에서 Salmonella속 균과 1.monocytogenes, S aureus 등 식중독 원인균을 검사하여 육류생산 시 그 오염정도를 살펴 위생적이고 안전한 식육을 생산하기 위한 기초자료를 얻고자 본 실험을 실시하였다.
이에 정부는 보다 안전하고 위생적인 육류의 생산을 위해 일정 규모 이상의 도축을 하는 도축장에 대하여 HACCP를 단계적 적용하여 2003년 7월 전면 실시하게 되었다. 이에 본 실험은 HACCP 적용 도축장에서 육류생산 시 그 오염정도를 살펴보고자 하였다.
제안 방법
1.monocytogenes : University of Vermont Modified (U5M)에서 30℃ 48시간 증 균 배양 후 선택배지인 Oxford agar에 접종 30*0 48시간 배양 후 의심 집락을 모두 취하여 Lovett 등(3)의 방법에 따라 Gram 염색, Catalase, 6-용혈성, CAMP test, 당분해 시험 등 생화학 성상이 L monocytogenese 분리된 균을 Listeria O antiserum(Difico) poly, tyR 1 및 4로 혈청형을 분류하였다.
와 PCR 조건은 Soumet 등16)의 방법에 준하여 실시하였다. PCR premix(Bioneer, Korea) 에 각각의 primer 1μℓ와 추출된 DNA template 2μℓ를 넣어 총 20 μℓ가 되도록 한 후 94℃에서 30초, 55℃ 1분, 72℃ 30초 과정을 총 30cycle을 실시하였다. PCR이 끝난 후 1% Agarose gel에서 30분간 전기 영동하여 증폭된 DNA 절편을 확인하였다.
PCR premix(Bioneer, Korea) 에 각각의 primer 1μℓ와 추출된 DNA template 2μℓ를 넣어 총 20 μℓ가 되도록 한 후 94℃에서 30초, 55℃ 1분, 72℃ 30초 과정을 총 30cycle을 실시하였다. PCR이 끝난 후 1% Agarose gel에서 30분간 전기 영동하여 증폭된 DNA 절편을 확인하였다.
S aureus : Staphylococcus enrichment broth에서 37℃ 24시간 배양 후 선택배지인 Bard parker agar에 접종하여 37 C 24시간 배양 후 검은색의 유사 집락을 취하여, Gram 염색, catalase, β-용혈성, coagulase test 등 생화학 검사 후 S aureus균을 확정된 경우 Reversed passive latex agglutination test (SET-RPLA test kit, Oxoid) 법을 이용하여 장독소를 검출하였다
미생물검사법에 의하여 실시하였다. Salmonella spp : Tetrathionate broth 와 Rappaport broth를 각각 37℃와 42℃에 24시간증균 배양하였고, 각각의 증균액을 선택배지인 Rambach agar에 접종 37 ℃ 24시간 배양후 의심되는 유사집락을 취하여 Gram 염색, TSI 및 Urea agar에서 37℃ 24시간 배양하여 예비동정 후 생화학 실험을 실시하였다. Salmonella spp로 확인된 균주는 O antiserum poly A, B, C, D, E 및 F, G(Difico)10)로 혈청군을 결정한 후 편모항원은 Spicer-Edwards rapid H antigen 동정 방법11)에 준하여 Motility GI medium(Difico)에서 37℃에서 18-20시간 4번계대하여 배양균이 운동성을 충분히 증가시킨 후 Antigenic formulas of the Salmonella serovars12) 에 준하여 Phase I 을 결정하였다.
Salmonella spp : Tetrathionate broth 와 Rappaport broth를 각각 37℃와 42℃에 24시간증균 배양하였고, 각각의 증균액을 선택배지인 Rambach agar에 접종 37 ℃ 24시간 배양후 의심되는 유사집락을 취하여 Gram 염색, TSI 및 Urea agar에서 37℃ 24시간 배양하여 예비동정 후 생화학 실험을 실시하였다. Salmonella spp로 확인된 균주는 O antiserum poly A, B, C, D, E 및 F, G(Difico)10)로 혈청군을 결정한 후 편모항원은 Spicer-Edwards rapid H antigen 동정 방법11)에 준하여 Motility GI medium(Difico)에서 37℃에서 18-20시간 4번계대하여 배양균이 운동성을 충분히 증가시킨 후 Antigenic formulas of the Salmonella serovars12) 에 준하여 Phase I 을 결정하였다. 그후 동일한 방법으로 Phase II를 결정하였으며, 아종을 결정하였다.
도체 오염이 가장 많을 것으로 생각되는 흉부와 경부를 CultureSwab Plus(BBL, USA)을 이용하여 10x10cm씩 약 IOOciS의 면적을 채취하였고, 분변은 내장 적출실에서 CultureSwab Plus(BBL, USA)을 이용하여 직접 회맹부의 분변을 채취하여 휴대용 ice box에 5℃를 유지하여 24시간 내로 실험실로 운반하여 실험하였다.
인천광역시에서 2(X)3년 1월부터 2월까지 출하된 돼지 도체 113건에 대해 일반세균수, 대장균수를 검사하였고, 돼지의 도체 68건과 분변 76건은 Salmonella spp, S aureus, 1.monocytogenese 대한 검사를 실시하였다.
이론/모형
위의 3종에 대한 균주 확인 방법은 FDA의 Bacteriological Analytical Manual"을 활용하였다.
돼지도체에서 검체 채취는 Swab법을 사용하였다. 도체 오염이 가장 많을 것으로 생각되는 흉부와 경부를 CultureSwab Plus(BBL, USA)을 이용하여 10x10cm씩 약 IOOciS의 면적을 채취하였고, 분변은 내장 적출실에서 CultureSwab Plus(BBL, USA)을 이용하여 직접 회맹부의 분변을 채취하여 휴대용 ice box에 5℃를 유지하여 24시간 내로 실험실로 운반하여 실험하였다.
4)중 제3 축산물시험 방법, 9. 미생물검사법에 의하여 실시하였다. Salmonella spp : Tetrathionate broth 와 Rappaport broth를 각각 37℃와 42℃에 24시간증균 배양하였고, 각각의 증균액을 선택배지인 Rambach agar에 접종 37 ℃ 24시간 배양후 의심되는 유사집락을 취하여 Gram 염색, TSI 및 Urea agar에서 37℃ 24시간 배양하여 예비동정 후 생화학 실험을 실시하였다.
본 실험에 사용한 prirm.와 PCR 조건은 Soumet 등16)의 방법에 준하여 실시하였다. PCR premix(Bioneer, Korea) 에 각각의 primer 1μℓ와 추출된 DNA template 2μℓ를 넣어 총 20 μℓ가 되도록 한 후 94℃에서 30초, 55℃ 1분, 72℃ 30초 과정을 총 30cycle을 실시하였다.
성능/효과
1.monocytogenes 42주 모두 type 1 이었고, S cweus 에 대한 독소검사결과 26주 모두 비독소로 나타났다.
1.monocytogenes 42주의 혈청형은 모두 type 1 이었는데, 채 등42)과 허 등44) 역시 동정 된 균주가 모두 type 1 이라고 보고하였고, Farbar 등'15)은 80%이상이 type 1에 속한다고 발표하여 본 결과와 유사한 경향을 보였다.
도체표면에서는 7주가 검출되었는데 B group이 6주, Ci group이 1주였다. 1.monocytogenese는 42주 모두 type 1이 검출되었다. S aureus는 26주가 검출되었고, 모두 장 독소가 없는 비병원성 이었다 (Table 3).
PCR 기법을 이용하여 검출된 S typhi- muriiim 2개의 분리주를 대상으로 DNA를 추출하여 확인한 결과 전기 영동상에서 Fig 1과 같은 620 bp 크기의 특징적인 양성 증폭산물을 확인하였다.
Salmonella spp, S aureus, L monocytogenes 등 3가지 세균에 대한 검체별 분리현황을 보면, 분변 76건 중 Salmonella spp는 14 주로 18.4%, L monocytogenes는 15주로 19.7%, S aureus는 14주로 18.4%가 검 출되었다. 도체표면은 68건중 Salmonella spp는 7주로 10.
4%의 검출률을 보였다. 검출된 Salmonella spp는 14주로 B group 이 6주 검출되어 S derbyA 4주, S enterica subsp salane가 2주 였고, C group 8주가 검출되어 5주가 S rissen, 2주가 untypable으로나타났다
6%의 검출률을 보였다. 검출된 Salmonella spp는 7주로 B group 이 6주 검출되어 S enterica subsp salame 가 3주, S typhimurium이 2주 검출률을 보였고, 1주가 untyable으로 나타났다.
얻었다. 도체 113건을 검사하여 일반세균수는 100~999 범 위 29건 (25.7%), 1000 ~9, 999범 위 62건(54.9%), 10, 000 ~99, 999범위는 22건(19.4%)으로 조사되었고, 대장균수는 1~9 범위가 22건(19.4%), 10~99범위 69건⑹.2%), 100~999 범위 22건(19.4%)으로 조사되었다.
도체 68건을 검사하여 Salmonella spp는 7주 10.2%, L monocytogenes는 27주 39.7%, S aumus는 12주 17.6%의 검출률을 보였다. 검출된 Salmonella spp는 7주로 B group 이 6주 검출되어 S enterica subsp salame 가 3주, S typhimurium이 2주 검출률을 보였고, 1주가 untyable으로 나타났다.
분리율을 살펴보면 분변에서는 S rissen0] 5주, S derby7\ 4주, S enterica subsp sctlcimcie가 2주가 분리되었고, 3주가 imtypable으로 총 14주가 검출되었다. 도체표면에서 검출된 7주는 S enterica subsp salamae 가 3주, S typhimurium 이 2주, untypable 2주 등으로 검출되었다(Table 4).
분리된 Salmonella spp의 아종을 살펴보면 S rissen과 S enterica subsp salamaee} 각각 5주 (23.8%)로 가장 많이 검출되었고, S derby로 4 주(19.1%) S typhimurium으로 2주(9.5%)순으로 검출되었다. 분리율을 살펴보면 분변에서는 S rissen0] 5주, S derby7\ 4주, S enterica subsp sctlcimcie가 2주가 분리되었고, 3주가 imtypable으로 총 14주가 검출되었다.
5%)순으로 검출되었다. 분리율을 살펴보면 분변에서는 S rissen0] 5주, S derby7\ 4주, S enterica subsp sctlcimcie가 2주가 분리되었고, 3주가 imtypable으로 총 14주가 검출되었다. 도체표면에서 검출된 7주는 S enterica subsp salamae 가 3주, S typhimurium 이 2주, untypable 2주 등으로 검출되었다(Table 4).
분변 76건올 검사하여 Salmonella spp는 14 주 18.4%, L monocytogenese: 15주 197%, S aureus는 14주 18.4%의 검출률을 보였다. 검출된 Salmonella spp는 14주로 B group 이 6주 검출되어 S derbyA 4주, S enterica subsp salane가 2주 였고, C group 8주가 검출되어 5주가 S rissen, 2주가 untypable으로나타났다
일반세균수는 100-999 범위 29건(25.7%), 1, 000 -9, 999 범위 62건(54.9%), 10, 000 -99, 999 범위는 22건(19.4%)으로 조사되었고, 대장균수는 1~9 범위가 22건(19.4%), 10~99범위 69건 (61.2%), 100~999범위 22건(19.4%)으로 조사되었다 (Table 1).
후속연구
갖고 있는 것도 사실이다. 이러한 사실은 HACCP 적용 이후라도 지속적인 검사로 사후관리가 이루어져야 안전한 식육을 생산할 수 있다는 것을 반증한 것으로, 향후 지속적인 검사와 공정에 대한 정확한 분석에 의한 시설보완 등의 사후 조치가 이루어져야 할 것이다.
지속적이고 체계적으로 위해요소를 분석하여 안전하고 위생적인 고품질의 식육을 생산할 때 시민모두 신뢰하고 찾을 수 있으며 이런 신뢰를 바탕으로 우리 축산 식품의 국제 경쟁력도 상승될 것이다.
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