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문제 정의
- 한편 대부분의 옻나무 연구에서는 옻나무 가지 전체를 구 분 없이 사용하였는데(1-7), 옻나무의 부위에 따라서 다른 성분이 검출되므로(1) 생리활성에도 차이가 있을 것으로 사 료되며, 또한 옻나무를 고온에서 볶음처리 시 가열처리가 옻나무의 생리활성 물질에 영향을 미칠 것으로 예상되나 이 에 관한 연구는 보고되어 있지 않다. 이에 본 연구에서는 옻나무의 속과 껍질부분을 분리 해 온도를 달리 하여 볶은 후 열수 추출하여 이들 추출물의 항산화활성 및 인체유래 암세 포 성장에 미치는 영향을 조사하였다.
제안 방법
- SNU- 1, MCF-7, WiDr은 RPMI 1640배지 (Gibco, Grand Island, NY, USA)를 사용하였고 HepG2는 DMEM배지 (Gibco)를 사용하였다. 각 배지에는 1% penicillin과 streptomycin(Sig- ma Chemical Co., St. Louis, MO, USA) 및 10% fetal bovine serum(Sigma)을 첨가하여 37°C, 5% CO2 incubator에서 배 양하였다.
- IXIO, cell, SNU-1, MCF 7은 2X104 cell/mL가 되도록 조정 하여 96 well plate에 분주하고 37°C, 5% CO2 incubator에서 24시 간 배양하였다. 다음 각 시료를 100, 500, 1, 000 卩g/mL의 농 도가 되 도록 첨 가하여 48시 간 배 양한 후 phosphate buffer에 녹인 MTT용액을 각 well당 20 虬씩 첨가해 4시간 더 배양 하였다. Formazan이 형성되면 흐트러지지 않도록 조심스럽 게 MTT용액을 제거하고 DMSO 150 uL를 가해 세포를 formazan에 용해시 켜 ELSIA-reader(Labsystems, Helsinki, Finland)를 사용하여 540 nm에서 각 well의 흡광도를 측정 하였다.
- Microsome 의 과산화지질생성 억제능(%)은 [1 — (대조구의 흡광도一시 료첨 가구의 흡광도/대 조구의 흡광도)]X100의 식 에 의 하여 산출하였다. 대조구는 시료대신 증류수를 첨가하였다.
- 옻나무의 속과 껍 질부분을 분리 해 170, 200, 220°C로 온도 를 달리하여 볶은 후 100°C에서 열수 추출하여 얻은 추출물 의 과산화지질생성 억제능, DPPH 유리라디칼 소거능 및 4 종류의 인체유래의 암세포 즉 간암세포 HepG2, 위 암세포 SNU-1, 유방암세포 MCF-7 및 대장암세포 WiDr에 대한 성장저지효과를.알아보았다.
- 옻나무의 속과 껍질의 열수추출물이 암세포 생존에 미치 는 영향은 간암세포 HepG2, 위암세포 SNU-1, 유방암세포 MCF-7, 대장암세포인 WiDr의 4종의 암세포를 사용하여 알 아보았다.
- 2, 2, -azobis(2-amidinopropane hydrochloride)(AAPH)를 사용해 microsome으로부터 과산화반응을 유도해 TBARS를 생성하는 방법은 Cai 등(1(>의 방법에 따랐고, Ohkawa 등 (11)의 방법에 의해 분석하였다. 즉 과산화지질유도실험은 microsome현탁액에 AAPH용액을 가하고, 시료를 250, 500 卩g/mL의 농도가 되도록 첨가해 37°C에서 1시간 incubation 하였다. 다음 반응액 0.
대상 데이터
- 사용한 암세포주로서 는 인 체유래 간암세포 HepG2, 위 암 세포 SNU-1, 유방암세포 MCF-7 및 대장암세포 WiDr을 이용하였으며, 이들 세포는 한국세포주은행(KCLB, Seoul, Korea)으로부터 구입하여 계대배양하면서 사용하였다. SNU- 1, MCF-7, WiDr은 RPMI 1640배지 (Gibco, Grand Island, NY, USA)를 사용하였고 HepG2는 DMEM배지 (Gibco)를 사용하였다. 각 배지에는 1% penicillin과 streptomycin(Sig- ma Chemical Co.
- 사용한 암세포주로서 는 인 체유래 간암세포 HepG2, 위 암 세포 SNU-1, 유방암세포 MCF-7 및 대장암세포 WiDr을 이용하였으며, 이들 세포는 한국세포주은행(KCLB, Seoul, Korea)으로부터 구입하여 계대배양하면서 사용하였다. SNU- 1, MCF-7, WiDr은 RPMI 1640배지 (Gibco, Grand Island, NY, USA)를 사용하였고 HepG2는 DMEM배지 (Gibco)를 사용하였다.
- 실험동물은 4주령 Sprague-Dawley(SD)계 수컷 흰쥐로 2주간 일반고형사료(삼양사료, 인천)로 사육한 후 에틸에테 르로 마취한 후 해부하여 간을 적출하였다. 간은 0.
- 옻나무는 서울 경동시장에서 구입하여 속과 껍질부분으 로 구분한 후 한약재 자동세절기를 사용하여 0.5 cm가 되도 록 절단하고 전기 볶음기 에서 각각 170, 200, 220°C에서 30분 간 볶았다. 다음 각 시료 200 g에 증류수 3 L를 가해 3시 간 100°C에서 열수 추출하여 60°C에서 감압 농축시킨 후 동결 건조해 증류수에 녹여 시료로 사용하였다.
이론/모형
- 2, 2, -azobis(2-amidinopropane hydrochloride)(AAPH)를 사용해 microsome으로부터 과산화반응을 유도해 TBARS를 생성하는 방법은 Cai 등(1(>의 방법에 따랐고, Ohkawa 등 (11)의 방법에 의해 분석하였다. 즉 과산화지질유도실험은 microsome현탁액에 AAPH용액을 가하고, 시료를 250, 500 卩g/mL의 농도가 되도록 첨가해 37°C에서 1시간 incubation 하였다.
- Blois(12)의 방법 에 따라 시료의 l, l-diphenyl-2-picryl- hydrazyl(DPPH) 유리 라디 칼에 대한 소거능을 측정 하였다. 즉 DPPH를 메탄올에 0.
성능/효과
- 4%로 가장 낮았다. 1, 000 Ug/mL의 농도에서는 생시료가 63.9%였 으며, 170°C에서 볶은 시료가 41.5%로 가장 낮은 암세포 생존율을 보였다. 껍 질추출물의 경 우 100, 500, 1, 000 Ug/mL의 모든 첨가 농도에서 170°C에서 볶은 시 료가 80.
- 2%였으나 볶음처리 에 따른 영 향은 크지 않았다. 1, 000 lig/mL의 농도에서는 생 시료의 암세포 생존율이 77.6%로 가장 높았고 200°C에서 볶은 시료가 61.5%로 가장 낮았다. 껍질추출물의 경우도 100, 500 Ug/mL의 농도에서 는 볶음처 리 에 따른 암세포 생 존 율의 차는 크지 않았다.
- 3과 같다. 100, 500 Rg/mL의 농도에서 속과 껍질추출물 모두 유방암 억제효과는 없었다. 1, 000 lig/mL의 농도에서도 속추출물은 암세포 생존율에 영향을 미치지 못하였다.
- 따라 증가하였다. 500 Hg/mL의 농도에서의 경우도 속과 껍질 모 두 생시료<220°C<170°C<200°C의 순으로 200°C에서 볶음 처리한 시료의 억제능이 가장 높았다(Table 1).
- 저농도보다 고농도어]서, 속보 다 껍질부분이, 170〜200°C범위로 볶음처리를 한 시료의 과 산화지질생성 억제능, 유리라디칼 소거능 및 암세포의 성장 저지효과가 높았다. 가장 높은 과산화지질생성 억제능은 200°C에서 볶은 속과 껍 질추출물을 500 Pg/mL의 농도로 첨 가 시 50.9, 56.5%였고, 유리 라디 칼 소거능은 각각 200, 170°C 에서 볶은 속과 껍 질추출물을 500 Ug/mL의 농도로 첨 가 시 79.0, 78.4%였다. 또한 암세포 생존율은 1, 000 Ug/mL의 농도 로 첨 가 시 가장 낮았는데 속과 껍 질추출물 첨 가군의 생 존율 은 WiDr세포가 170°C에서 볶음처리 시 41.
- 각 첨가농도에 있어 볶음처리한 시료의 소거능을 알아보 면 251ig/mL의 농도에서 속추출물의 경우는 생시료<170°C <220°CV200°C의 순이었고, 껍질추출물의 경우는 생시료 <220°C<170°C<200°C의 순으로 속과 껍질 모두 200°C에서 가장 높았다(Table 2), 250, 500 胞/mL의 농도에서는 속과 껍 질 모두 생 시 료<220°C<170, 200°C의 순으로 170, 200°C에 서 볶음처 리한 시료가 유사한 정도로 가장 높게 나타나 이 경향은 Table 1의 과산화지질생성 억제능의 결과와 일치하 였다(Table 2).
- 5%로 가장 낮은 암세포 생존율을 보였다. 껍 질추출물의 경 우 100, 500, 1, 000 Ug/mL의 모든 첨가 농도에서 170°C에서 볶은 시 료가 80.3, 65.0, 36.0 %로 암세포 생존율이 가장 낮았으며 , 특히 1, 000 Ug/mL의 농도에서는 실험에 사용한 암세포 중 암세포 성장저지효과 가 가장 좋았다.
- 옻나무의 속과 껍질의 열수추출물이 DPPH 유리라디칼 소거능에 미치는 결과는 Table 2와 같다. 대조구에 대한 시 료의 소거능을 보면, 25 Pg/mL의 농도에서는 속보다 껍질추 출물의 소거능이 2배 이상 현저하게 높았으나, 250, 500 JJg/ mL의 농도에서는 속과 껍질간의 차이는 없었다.
- 이와 같이 가열처리에 의해 생성되 는 화합물 중 amino-carbonyl반응생성 물이 잘 알려져 있는 더】, 갈색의 착색화합물인 melanoidin과 같은 고분자 화합물 과 저분자의 반응중간산물들 모두는 항산화능을 갖는다 (18-21). 따라서 옻나무의 flavonoid화합물도 볶음처리 중 상당량이 파괴될 것으로 예측되어지나 새롭게 생성된 amino- carbonyl반응생성물에 의 해 과산화지질생성이 억제되는 것 으로 추정되었다.
- 2%였으며, SNU-1 세포는 볶음처리와 상관없이 100, 100% 의 순으로 높아 특히 WiDr세포에 대한 성장저 지효과가 현 저호]■게 높음을 알 수 있었다. 또한 WiDr세포에 대해서는 I, 000 Ug/mL의 농도에서 볶음처 리를 하지 않은 속과 껍질추 출물에서도 63.9, 56.8%의 낮은 생존율을 보여 옻나무는 사 용한 암세포 중 대장암세포에서 강한 암세포성 장 저 지 활성 을 나타내었다.
- 4%였다. 또한 암세포 생존율은 1, 000 Ug/mL의 농도 로 첨 가 시 가장 낮았는데 속과 껍 질추출물 첨 가군의 생 존율 은 WiDr세포가 170°C에서 볶음처리 시 41.5, 36.0%로 가장 낮았고, 다음은 HepG2세포로 200°C에서 볶음처리 시 61.5, 44.3%, 이어서 MCF-7세포가 170°C에서 볶음처리 시 92.0, 69.2%였으며, SNU-1 세포는 볶음처리와 상관없이 100, 100% 의 순으로 높아 특히 WiDr세포에 대한 성장저 지효과가 현 저호]■게 높음을 알 수 있었다. 또한 WiDr세포에 대해서는 I, 000 Ug/mL의 농도에서 볶음처 리를 하지 않은 속과 껍질추 출물에서도 63.
- 옻나무의 속과 껍질의 열수추출물이 AAPH유래의 과산 화지 질 생 성 억 제 에 미 치 는 영 향은 Table 1 과 같다. 볶음처 리 를 하지 않은 생 시 료를 250 卩g/mL의 농도로 첨가 시 대조구 에 대한 속과 껍질추출물의 과산화지질생성 억제능은 28.5, 37.6%로 껍질추출물이 속보다 더 높은 억제능을 보였다. 500 Ug/mL의 농도로 첨가 시의 속과 껍질추출물의 억제능 은 45.
- 볶음처 리가 속과 껍 질추출물의 과산화지질 생성 억제에 미 치는 영향을 알아보면, 250 Ug/mL의 농도에서의 억제능은 속과 껍질 모두 200°C에서 볶은 시료가 가장 높았고, 생시료 <170°C<220°C<200°C의 순으로 볶음온도가 증가함에.따라 증가하였다.
- 이상의 결과로부터 옻나무 열수추출물의 암세포에 대한 성장저지효과는 HepG2와 WiDr세포에서 볶음처리가 효과 적 인 방법 인 것으로 사료되 었다. 그러나 SNU-1 과 MCF-7 세포에서는 그다지 영향을 미치지 못하였다.
- 알아보았다. 저농도보다 고농도어]서, 속보 다 껍질부분이, 170〜200°C범위로 볶음처리를 한 시료의 과 산화지질생성 억제능, 유리라디칼 소거능 및 암세포의 성장 저지효과가 높았다. 가장 높은 과산화지질생성 억제능은 200°C에서 볶은 속과 껍 질추출물을 500 Pg/mL의 농도로 첨 가 시 50.
- 4와 같다. 추 출물 첨가량이 증가함에 따라 암세포 생존율은 현저하게 감 소하였고, 속보다 껍질추출물의 암세포 성장저지효과가 더 높았다. 속추출물의 경우 100 Ug/mL의 농도에서의 암세포 생존율은 볶음처리한 3종류의 시료가 약 90%정도였으나, 500 IJg/mL의 농도에서는 170°C에서 볶은 시료가 80.
- 1과 같다. 추출물의 농도가 증가함에 따라 암세포 생존율은 감소하였 고 속보다 껍 질추출물을 첨 가한 군의 암세포 생 존율이 낮아 껍질이 속보다 암세포 성장저지에 효과적인 것으로 나타났 다. 속추출물의 경 우 100, 500 Ug/mL의 농도에서 생 시 료 첨 가군의 암세포 생존율은 각각 92.
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