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문제 정의
- 민간에 서는 항종양, 항그람양성균, 항산화, 해열, 이뇨 및 항당뇨 등의 효능이 알려져 있으나(11), 체계적 인 연구는 미흡한 실정이다. 이에 본 연구에서는 말굽버섯의 항당뇨 효과 규명의 일환으로 streptozotocin으로 당뇨를 유발한 실험동물에 말 굽버섯 추출물을 투여하여 혈당, 지질대사 및 면역세포에 미치는 영향을 관찰하였다.
가설 설정
- 3)NS: Not significantly different at 5% level.
- 3)Values are mean + SD of seven rats from each group.
- 3)Values are mean ± SD of seven rats from each group.
- 0 mL에 효소액 200 虬를 가종]•여 ice bath상에서 20분간 방치 하였다. Test에는 alkaline dimethyl sulfoxide(DMSO) 용액 0.5 mL, blank에는 nonalkaline DMSO 용으耳 0.5 mL를 각각 가하였다. 37℃에서 30 분간 반응시키고 파장 550 nm에서 감소되는 cytochrome C의 흡광도를 측정하였다.
제안 방법
- 5 mL를 각각 가하였다. 37℃에서 30 분간 반응시키고 파장 550 nm에서 감소되는 cytochrome C의 흡광도를 측정하였다. Catalase 활성은 Aebi의 방법 (15) 에 준하여 50 mM potassium phosphate buffer(pH 7.
- 상징액을 다시 105,000xg에서 1시간동안 초원심분리하여 얻은 상징 액을 cytosol 분획으로 하였다. Mitochondria 분획 에서 는 catalase 활성을 측정 하였 고, cytosol 분획에서는 glutathione peroxidase와 superoxide dismutase의 활성을 측정하였다. 이상의 모든 조작을 따로 규정이 없는 한 4℃에서 행하였고, 효소원은 사용 전까 지 -70℃에서 보관하였다.
- , Japan)를 이용하여 파장 660 nm에서 탁도(산란광강도) 변화량을 측정하였다. 단클론 항 체(mono시onoal antibody)를 이용하여 면역세포의 분획을 측정하였다. Rat whole blood에 total T c이1의 antibody는 MOUSE ANTI RAT CD3:FITC, helper T c이1의 antibody 는 MOUSE ANTI RAT CD4:RPE, suppressor T cell의 antibody는 MOUSE ANTI RAT CD8:RPE, B c이1의 antibodye MOUSE ANTI RAT CD45RA:RPE을 사용하였 고, controle Mouse IgG 1 R-PE/Cy5(PE)와 Mouse IgM을 혼합하였다.
- 예비 실험 결과에 준하여 본 연구에서는 그룹 당 7마리씩 나누어 Table 1과 같이 사육하였다. 대조군(Control)은 생리 식 염 수를 1일 1회 2주간 경 구투여 하고, 당뇨군①M)은 당뇨 유발 후 생리식염수를 1일 1회 2주간 투여하였다. 말굽버섯 추출물 투여군은 당뇨 유발 후 말굽버섯 추출물을 1일 1회 2주간 경구 투여 하였다.
- 본 실험에 사용한 말굽버섯은 영진무역(주)에서 제공 받 았다. 말굽버 섯 1 kg을 환류 하에서 3회 걸쳐 각각 메탄올과 물로 추출하였다. 추출물을 여과하여 진공농축기에서 증발 시킨 후 동결건조하여 고체상의 말굽버섯 메탄올 추출물 46.
- 말굽버 섯(Femes fcmenfarMs)이 당뇨에 미치는 영향을 연구할 목적으로 실험동물에 STZ를 투여 하여 당뇨를 유발 시킨 후 말굽버섯 물추출물과 메탄올 추출물을 2주간 투여 하여 혈당, 지질함량 및 면역에 미치는 영향을 검토한 결과는 다음과 같다. 혈당은 당뇨로 인해 증가하였으나 말굽버 섯 추출물 투여군에서 유의적으로 감소를 보였다.
- 대조군(Control)은 생리 식 염 수를 1일 1회 2주간 경 구투여 하고, 당뇨군①M)은 당뇨 유발 후 생리식염수를 1일 1회 2주간 투여하였다. 말굽버섯 추출물 투여군은 당뇨 유발 후 말굽버섯 추출물을 1일 1회 2주간 경구 투여 하였다. 이때 말굽버 섯 추출물 투여 군은 말 굽버 섯 물 추출물 200 ㎎/㎏ body weight 투여 군(DM-FW 200)과 말굽버 섯 메 탄올 추출물 200 ㎎/㎏ body weight 투 여군(DM-FM 200)으로 나누어 사육하였다.
- 실험동물은 처치 전 12시간동안 절식시 켰고, CO2 gas로 가볍 게 마취 시 킨 후, 복부 정중선을 따라 개복하고 복부 대 동맥에서 혈액을 채취하여 혈당을 측정하고 혈액의 일부는 EDTA tube에 넣어 전혈을 얻고, 나머지 혈액은 실온에서 30분간 방치한 후 원심분리기로 700Xg에서 15분간 원심분 리하여 혈청을 분리시켜 즉시 사용하였다. 간장은 생리식염 수로 관류시켜서 조직내 혈액을 제거하고 적출하여 생리식 염수로 씻고 여지로 조직에 남아있는 혈액 및 기타 이물질을 제거 하였다.
- 말굽버섯 추출물 투여군은 당뇨 유발 후 말굽버섯 추출물을 1일 1회 2주간 경구 투여 하였다. 이때 말굽버 섯 추출물 투여 군은 말 굽버 섯 물 추출물 200 ㎎/㎏ body weight 투여 군(DM-FW 200)과 말굽버 섯 메 탄올 추출물 200 ㎎/㎏ body weight 투 여군(DM-FM 200)으로 나누어 사육하였다.
- 항 C3의 항체를 polyethylen latex 입자에 감작시켜 제 조된 latex 시 약과 검 체 를 cell내에서 혼합 반응시 키 면 latex 입자에 감작시킨 항 C3 항체와 검체중의 C3가 반응하여 latex 응집반응이 일어난다. 이상의 응집반응을 nephelometry 분석 장치 (LX-2200, Aloka Co., Japan)를 이용하여 파장 660 nm에서 탁도(산란광강도) 변화량을 측정하였다. 단클론 항 체(mono시onoal antibody)를 이용하여 면역세포의 분획을 측정하였다.
- 혈당은 Lifescan One Touch Test(Lifescan, USA)로 측정하였다. 혈청 albumin 함량은 Hitachi 7600-020/7170-§- kit(아산제 약), total bilirubin 함량은 Hitachi 7600-020/7170 용 kit(Eiken사), creatinine 함량은 Hitachi 7600-020/7170-§- kit(Daiichi사) 및 blood urea nitrogen(BUN) 함량은 Hitachi 7600-020/7170용 kit(Eiken사)를 사용하여 automatic analyzer(Hitachi 7600-020, Hitachi Co.
- 혈당은 Lifescan One Touch Test(Lifescan, USA)로 측정하였다. 혈청 albumin 함량은 Hitachi 7600-020/7170-§- kit(아산제 약), total bilirubin 함량은 Hitachi 7600-020/7170 용 kit(Eiken사), creatinine 함량은 Hitachi 7600-020/7170-§- kit(Daiichi사) 및 blood urea nitrogen(BUN) 함량은 Hitachi 7600-020/7170용 kit(Eiken사)를 사용하여 automatic analyzer(Hitachi 7600-020, Hitachi Co., Japan)로 측정하였다. 혈청의 중성지방과 총 콜레스테롤 함량은 표준 효소법에 의한 kit(아산제 약)를 사용하여 측정하였다.
- 22 mM-1 • cm-1 을 이용하여 활성도를 선정하였으며, 효소활성 단위는 1분 당 1 mg protein이 분해하는 NADPH의 양을 nmole로 표시 하였다. 혈청의 보체 C3의 측정은 Latex 응집반응을 응용하여 면역 화학 분석 장치를 이용한 광학적 측정법으로 시행되었다. 항 C3의 항체를 polyethylen latex 입자에 감작시켜 제 조된 latex 시 약과 검 체 를 cell내에서 혼합 반응시 키 면 latex 입자에 감작시킨 항 C3 항체와 검체중의 C3가 반응하여 latex 응집반응이 일어난다.
대상 데이터
- 5)에 용해하여 꼬리정맥에 주사하여 당뇨를 유도하였다. 1주일 경과 후 꼬리정맥에서 혈액을 채혈하였고, 혈당이 300 mg/ dL 이상인 것을 당뇨 유발로 간주하여 실험대상으로 하였다. 예비 실험 결과에 준하여 본 연구에서는 그룹 당 7마리씩 나누어 Table 1과 같이 사육하였다.
- 단클론 항 체(mono시onoal antibody)를 이용하여 면역세포의 분획을 측정하였다. Rat whole blood에 total T c이1의 antibody는 MOUSE ANTI RAT CD3:FITC, helper T c이1의 antibody 는 MOUSE ANTI RAT CD4:RPE, suppressor T cell의 antibody는 MOUSE ANTI RAT CD8:RPE, B c이1의 antibodye MOUSE ANTI RAT CD45RA:RPE을 사용하였 고, controle Mouse IgG 1 R-PE/Cy5(PE)와 Mouse IgM을 혼합하였다. 암소에서 incubation 시킨 후 optyTysing sohition을 첨가하여 다시 암소에서 incubation 중卜였다.
- 본 실험에 사용한 말굽버섯은 영진무역(주)에서 제공 받 았다. 말굽버 섯 1 kg을 환류 하에서 3회 걸쳐 각각 메탄올과 물로 추출하였다.
- 실험동물은 (주)대한 바이오 링크로부터 분양 받아 일정한 조건 (온도 22±1℃, 습도 55 ±3%, 명 암 12시간 light/dark cycle)으로 1주 동안 적 응시 킨 Sprague-Dawley계 웅성 흰 쥐(평균체중 200±10g)를 사용하였다. 실험식이는 AIN-76 (12)의 식이조성에 준하여 제조하여 사용하였다.
데이터처리
- 본 실험에서 얻어진 결과는 평균치 土표준편차로 표시하 였고, 통계적 유의성은 5% 수준에서 Duncan's multiple range test로 검정하였다.
이론/모형
- 37℃에서 30 분간 반응시키고 파장 550 nm에서 감소되는 cytochrome C의 흡광도를 측정하였다. Catalase 활성은 Aebi의 방법 (15) 에 준하여 50 mM potassium phosphate buffer(pH 7.0) 중에 기질인 10 mM H2O2의 환원되는 정도를 파장 240 nm에서 홉광도의 변화를 읽고 분자흡광계수 0.041 mM-1 • 을 이용하여 활성도를 산정하였으며, 효소활성의 단위는 1분당 1 mg protein이 분해하는 hydrogen peroxide의 양을 Jimole 로 표시하였다. Glutathione peroxidase(GSH-Px) 활성은 Paglia와 Valentine의 방법 (16)에 준하여 hydrogen peroxide 및 glutathione0] 함유된 0.
- 041 mM-1 • 을 이용하여 활성도를 산정하였으며, 효소활성의 단위는 1분당 1 mg protein이 분해하는 hydrogen peroxide의 양을 Jimole 로 표시하였다. Glutathione peroxidase(GSH-Px) 활성은 Paglia와 Valentine의 방법 (16)에 준하여 hydrogen peroxide 및 glutathione0] 함유된 0.1 M potassium phosphate buffer(pH 7.2) 중에 효소액 을 가하여 37℃에서 파장 340 nm 에서 흡광도의 변화를 읽 고 분자흡광계수 6.22 mM-1 • cm-1 을 이용하여 활성도를 선정하였으며, 효소활성 단위는 1분 당 1 mg protein이 분해하는 NADPH의 양을 nmole로 표시 하였다. 혈청의 보체 C3의 측정은 Latex 응집반응을 응용하여 면역 화학 분석 장치를 이용한 광학적 측정법으로 시행되었다.
- 간조직 중의 지 질 은 Folch 등의 방법(13)에 준하여 추출한 후 혈청 지질농도 측정 과 동일한 방법으로 실 시 하였다. Superoxide dismutase (SOD) 활성 은 Marklund와 Marklund의 방법 (14)에 준하여 0.2 M potassium phosphate buffer(20 µM cytochrome C,100 μM EDTA 함유 pH 8.6) 1.0 mL에 효소액 200 虬를 가종]•여 ice bath상에서 20분간 방치 하였다. Test에는 alkaline dimethyl sulfoxide(DMSO) 용액 0.
- 혈청의 중성지방과 총 콜레스테롤 함량은 표준 효소법에 의한 kit(아산제 약)를 사용하여 측정하였다. 간조직 중의 지 질 은 Folch 등의 방법(13)에 준하여 추출한 후 혈청 지질농도 측정 과 동일한 방법으로 실 시 하였다. Superoxide dismutase (SOD) 활성 은 Marklund와 Marklund의 방법 (14)에 준하여 0.
- Phosphate buffer saline을 첨가하고 원심분리 하여 상증을 제거 하고 다시 phosphate buffer saline 혼합 후 재원심 분리 하여 상층을 제거 하고 匸+시 phosphate buffer saline을 혼합하여 foow cyto meter(COULTER EPICS XL, COULTER사" 제 품, USA)를 이용하여 측정한 후 백분율로 나타내었다. 단백 질의 함량은 Lowry 등의 방법 (17)에 준하여 bovine serum albumin(Sigma)을 표준품으로 하여 측정하였다.
- 실험동물은 (주)대한 바이오 링크로부터 분양 받아 일정한 조건 (온도 22±1℃, 습도 55 ±3%, 명 암 12시간 light/dark cycle)으로 1주 동안 적 응시 킨 Sprague-Dawley계 웅성 흰 쥐(평균체중 200±10g)를 사용하였다. 실험식이는 AIN-76 (12)의 식이조성에 준하여 제조하여 사용하였다. Streptozotocin(STZ) 50 ㎎/㎏을 0.
- , Japan)로 측정하였다. 혈청의 중성지방과 총 콜레스테롤 함량은 표준 효소법에 의한 kit(아산제 약)를 사용하여 측정하였다. 간조직 중의 지 질 은 Folch 등의 방법(13)에 준하여 추출한 후 혈청 지질농도 측정 과 동일한 방법으로 실 시 하였다.
성능/효과
- 2)One unit superoxide dismutase activity was defined as the which inhibited the reduce of alkaline DMSO-mediated cytochrome C by 50%.
- B cell과 T cell의 분포에 미치는 영향을 관찰한 결과는 Table 6과 같다. B cell과 T cell 모두 대 조군에 비하여 DM군 에서 유의한 감소를 보였고, 말굽버섯 추출물 투여군로 대조 군 수준에는 미치지 못하였으나 DM군에 비해 유의하게 증 가하였다. 인체에서 면역기능을 담당하는 세포는 T cell과 B cell 이외에도 대식구 자연 살해 세포 등 다양한 것들이 있으나 T cell과 B celle 유전자의 재조합에 의하여 clonal distribution을 보이는 수용체를 가지고 각종 병원체에 대해 특이적으로 대처하는 점에서 면역계에서 가장 큰 몫을 하는 세포들이다(37).
- 혈청 보체 C3의 함량은 대조군에 비하여 DM군에서 유의한 감소를 보였고, DM-FM 200군에서 대조군 수준으로 회복이 관찰되었다. B cell과 T celle DM군에서 유의한 감소를 보였고, 말굽버 섯 추출물 투여로 유의적으로 증가되었다. Helper T cell과 suppressor T cell의 분포는 DM군에서 유의 하게 감소되 었 으나, 말굽버섯 추출물 투여로 유의한 증가를 나타내었다.
- 혈청 중 total bilirubin 함량은 DM군이 대조군에 비해 유 의적으로 증가되었는데, 이것은 Shou 등(21)과 비슷한 결과를 보였다. DM-FW 200군과 DM-FM 200군은 DM군과 비교하여 현저한 감소를 보였고, 특히 DM-FM 200군은 대조 군 수준으로 감소되었다. 혈청 total bilirubin 함량은 간질환 (간염, 간경변, 감암), 담도계 질환, 용혈성 질환 및 체질성 황달 등의 증상에서 증가하는 것으로 알려져 있으며(22), 말 굽버 섯 메 탄올 추출물의 투여 로 STZ 유도 당뇨 흰쥐 에 발생되는 산화적 스트레스로 인한 간손상을 억제시키는 것으로 사료된다.
- 1과 같다. DM군의 혈당 함량은 847.4 + 33.18 mg/dL로 대조군 191.0 + 27.22 mg/dL에 비해 유의적인 증가를 보였다• DM-FW 200군과 DM-FM 200군은 각각 518 + 48.23 mg/dL, 442.8 ± 26.86 mg/dL로 대조군 수준에는 미치지 못하였으나 DM군과 비교하여 현저한 감소를 보였다. 당뇨를 유발하기 위하여 사용한 STZ는 췌장 6-cell에서 절대적인 인슐린 부족을 유발하기보다는 초기단계에서 포 도당에 대한 신속한 인슐린 분비 반응을 손상시 켜 고혈당을 유발시키는 것으로 알려져 있는데(18), 이는 STZ 투여로 체 내에 생성된 nitric acid가 superoxide anion과 반응하여 peroxinitrite가 생성되었기 때문이다(19).
- 말굽버섯 추출물 투여군의 catalase의 활성은 DM군에 비하여 증가하는 영향을 보였으나 통계적 유의성 은 관찰되지 않았다. GSH-Px의 활성은 DM군에서 감소하 였으나 DM-FW 200군과 DM-FM 200군은 DM군과 비교하여 유의한 증가를 보였다. 생체에는 oxidation stress에 의해 생성된 free radical이나 peroxide의 독작용을 저지 하는 free radical scavenging system이 존재 하고 있어 (33) 여러가지 손상으로부터 생 체 를 보호할 수 있다.
- 혈청과 간의 총콜레스테롤과 중성지방 함량은 말굽버섯 추출물 급여로 DM군에 비하여 현저한 감소를 나타내었다. HDL-콜레스테 롤 함량과 GSH-Px의 활성은 말굽버섯 추출물 급여 시 에는 DM군과 비교하여 유의한 증가가 나타났다. 혈청 보체 C3의 함량은 대조군에 비하여 DM군에서 유의한 감소를 보였고, DM-FM 200군에서 대조군 수준으로 회복이 관찰되었다.
- 혈청과 간의 총콜레스테롤 함량과 중성지방 함량은 대조군에 비하여 DM군에서 유의적인 증 가를 보였으나, 말굽버 섯 추출물 급여 로 뚜렷한 감소를 나타 내 었다. HDL-콜레스테롤 함량은 DM군에서 현저 한 감소를 보였으나, 말굽버 섯 추출물 투여 군에서 유의한 증가가 나타났다. 당뇨가 잘 조절되지 않은 상태에서는 간에서 very low density lipoprotein(VLDL)의 생성이 증가되어 혈중 VLDL과 low density lipoprotein(LDL)의 농도를 증가시 켜 콜레스 테롤 함량이 증가된다(26)고 하는데, 본 실험의 결과 말굽버 섯의 추출물이 혈청과 간의 콜레스테롤 함량을 낮추는데 효과가 있는 것으로 보인다.
- B cell과 T celle DM군에서 유의한 감소를 보였고, 말굽버 섯 추출물 투여로 유의적으로 증가되었다. Helper T cell과 suppressor T cell의 분포는 DM군에서 유의 하게 감소되 었 으나, 말굽버섯 추출물 투여로 유의한 증가를 나타내었다. 이상의 결과를 종합하여 볼 때 말굽버 섯의 물 추출물과 메 탄 올 추출물은 혈당조절 기능, 지질대사 개선 및 면역작용을 활성 화시 킴 으로서 STZ의 투여 로 인한 당뇨의 증상을 완화 시키는 것으로 사료된다.
- Helper T cell과 suppressor T cell 분포에 미치는 영향을 관찰한 결과를 Table 7에 나타내었다. Helper T cell의 분포 는 DM군에서 유의 하게 감소하였고, 말굽버 섯 추출물 투여 로 현저히 회복되었다. Suppressor T cell 분포는 DM군에서 유의하게 감소되었으나, DM-FW 200군과 DM-FM 200군 에서는 대조군 수준으로 회복되었다.
- 본 실험에서 STZ 투여로 인한 C3의 감소 는 당뇨로 인한 신장 및 간의 이상을 의심할 수 있는데 DM 군에서 신장질환의 이상 지표를 나타내는 BUN의 증가와 간장의 이상 지표인 total bilirubin 증가와 관련된다고 여겨 진다. STZ에 의한 당뇨 발생으로 생체기능이 저하되는 것을 말굽버섯 추출물을 투여 함으로서 간과 신장의 기능을 회복 하는데 기여하는 것으로 사료된다.
- Helper T cell의 분포 는 DM군에서 유의 하게 감소하였고, 말굽버 섯 추출물 투여 로 현저히 회복되었다. Suppressor T cell 분포는 DM군에서 유의하게 감소되었으나, DM-FW 200군과 DM-FM 200군 에서는 대조군 수준으로 회복되었다. Helper T cell과 suppressor T celle T cell의 subset로 서로 정반대의 기능을 가지고 있다.
- 말굽버섯 추출물 투여군의 경우 DM군에 비해 crealinine의 함량이 감소하였으나 유의적인 차이는 나 타나지 않았다. 또한 혈청 중 BUN 함량은 대조군에 비하여 DM군에서 현저히 증가되었고, DM-FW 200군 및 DM-FM 200군은 대조군 수준에는 미치지 못하였으나 DM군에 비해 유의적 감소를 보였다. 혈중 creatininee- BUNe 신장 질환 과 관계가 대단히 커서 신장기능의 지표로 중요시 되고, creatininee 근육단백의 최종 대사산물로서 근육의 수축에너지로 creatine phosphate에서 생성된 creatine이 탈수되어 생긴 것으로 외인성 또는 신장 이외의 영향을 받지 않고 신 사구체로 여과되어 재흡수 과정 없이 신세뇨관에서 대부분 소변으로 배설된다.
- 이는 STZ 유발 당뇨 흰쥐의 SOD, catalase 및 GSH-Px 의 효소 활성이 감소한다는 L'Abbe와 Trick(30) 및 Matkovics 등(31)의 연구 결과와 일치하였다• 이러한 현상은 당뇨유발 초기에는 superoxide radical을 제거하기 위해 그 활성이 증 가하지만 시간이 길어지면 세포의 항상성 능력을 초과하게 되고 그 결과 지질과산화가 촉진되어 세포 소기관들의 과산 화적 손상이 가속화됨으로써 효소활성이 저하된 것으로 보 고 있다(32). 말굽버섯 추출물 투여군의 catalase의 활성은 DM군에 비하여 증가하는 영향을 보였으나 통계적 유의성 은 관찰되지 않았다. GSH-Px의 활성은 DM군에서 감소하 였으나 DM-FW 200군과 DM-FM 200군은 DM군과 비교하여 유의한 증가를 보였다.
- 특히 세포성 면역장애로 감염성 질환이 동반되고 악성종양의 발생빈도 가 증가하며 특이 항체반응이 감소한다(40,41). 본 실험 결과 로 보아 당뇨로 인한 대사 이상으로 산화적 스트레스로 인한 면역의 기능이 저하되었으나 말굽버섯 추출물의 급여가 B cell과 T cell을 증가시켜 면역기능 회복에 도움을 주는 것으로 여겨진다.
- 또한 GSHPx는 catalase와는 달리 세포 내에서 压。2뿐만 아니라 지 질 과산화의 분해를 촉매하여 손상된 세포막 보호에 중요한 역할을 한다(36). 본 실험 결과로 볼 때 STZ 투여로 인한 조직 의 과산화적 손상을 말굽버 섯 추출물 투여 로 GSH-Px의 활 성을 증가시켜 H2O2와 지질과산화를 억제함으로서 조직손 상을 완화시키는 것으로 사료된다.
- 만성 간질환, 간경변, 급성 중증간염, 막성 증식성 사구체신염, 급성 사구체신염, 지방이영양증(lipodystrophy) 등과 같은 질병 발생 시 C3의 감소를 보이는 것으로 알려져 있다(25). 본 실험에서 STZ 투여로 인한 C3의 감소 는 당뇨로 인한 신장 및 간의 이상을 의심할 수 있는데 DM 군에서 신장질환의 이상 지표를 나타내는 BUN의 증가와 간장의 이상 지표인 total bilirubin 증가와 관련된다고 여겨 진다. STZ에 의한 당뇨 발생으로 생체기능이 저하되는 것을 말굽버섯 추출물을 투여 함으로서 간과 신장의 기능을 회복 하는데 기여하는 것으로 사료된다.
- BUNe 아미노산의 탈 아미노반응으로 생성된 암모니 아로 주로 간의 요소회로를 거쳐 생성되는데 단백 이화작용 이 항진될 때, 즉 간경변, 장관출혈, 당뇨병성 acidosis 및 당뇨병성 신증, 탈수, 급만성 신장염 등과 같이 조직단백의 붕괴가 발생할 때 과잉으로 생성되거나 중증 심부전으로 신 장 혈류량이 감소되거나 신부전으로 신장 배설기능 장애가 일어날 때 증가하는 것으로 알려져 있다(25). 본 실험의 결과 로 볼 때 말굽버섯 추출물의 투여는 당대사 장애를 회복시켜 단백 이 화작용을 감소시 키고, 당뇨합병 증인 acidosis를 완화 시킬 수 있을 것으로 사료된다.
- 혈청 중의 albumin 함량은 당뇨 신증후군의 임상인자로 단백 이화작용의 증가를 확인하는 요소로 알려져 있다(20). 본 실험의 결과로 볼 때 당뇨가 유발된 흰쥐의 인슐린 함량의 저하로 인하여 당신생을 위해 단백이화를 촉진시켜 albumin의 신장배설을 증가시킴으로써 혈청 중의 albumin 함량이 감소되었으나, 말굽버섯 추출물의 급여로 단백질 이 화작용이 감소되어 조직보호에 기여하는 것으로 여겨진다.
- 당뇨를 유발하기 위하여 사용한 STZ는 췌장 6-cell에서 절대적인 인슐린 부족을 유발하기보다는 초기단계에서 포 도당에 대한 신속한 인슐린 분비 반응을 손상시 켜 고혈당을 유발시키는 것으로 알려져 있는데(18), 이는 STZ 투여로 체 내에 생성된 nitric acid가 superoxide anion과 반응하여 peroxinitrite가 생성되었기 때문이다(19). 본실험의 결과 말 굽버섯 추출물의 급여가 STZ로 손상된 췌장 6-cell의 인슐 린 반응 기능을 회복시켜 혈당 증가를 억제시키는 것으로 사료된다.
- Helper T cell과 suppressor T cell의 분포는 DM군에서 유의 하게 감소되 었 으나, 말굽버섯 추출물 투여로 유의한 증가를 나타내었다. 이상의 결과를 종합하여 볼 때 말굽버 섯의 물 추출물과 메 탄 올 추출물은 혈당조절 기능, 지질대사 개선 및 면역작용을 활성 화시 킴 으로서 STZ의 투여 로 인한 당뇨의 증상을 완화 시키는 것으로 사료된다.
- HDL-콜레스테 롤 함량과 GSH-Px의 활성은 말굽버섯 추출물 급여 시 에는 DM군과 비교하여 유의한 증가가 나타났다. 혈청 보체 C3의 함량은 대조군에 비하여 DM군에서 유의한 감소를 보였고, DM-FM 200군에서 대조군 수준으로 회복이 관찰되었다. B cell과 T celle DM군에서 유의한 감소를 보였고, 말굽버 섯 추출물 투여로 유의적으로 증가되었다.
- 혈청 중 creatinine과 BUN 함량에 미치는 영향을 관찰한 결과(Table 3), DM군의 creatinine-^ 함량은 대조군과 비교하여 증가하는 경향은 보였으나 통계적 유의성은 없었다. 이는 당뇨가 유발된 횐쥐 의 혈 청 중 creatininee, 함량이 증 가한다고 보고한 Yun 등(23)과 Kwack 등(24)의 결과와는 다르게 나타났다.
- 혈청 중 albumin과 total bilirubin의 함량에 미치는 영향을 Table 2에 나타내었다. 혈청 중의 albumin 함량의 경우 DM군은 대조군에 비하여 유의적으로 감소되었으며, 말굽 버섯 추줄물 투여로 대조군 수준에는 미치지 못하였으나 DM군에 비하여 유의적인 증가를 보였다. 혈청 중의 albumin 함량은 당뇨 신증후군의 임상인자로 단백 이화작용의 증가를 확인하는 요소로 알려져 있다(20).
- 말굽버섯 추출물이 혈청 및 간의 지방함량에 미치는 영향 은Table4에 나타내었다. 혈청과 간의 총콜레스테롤 함량과 중성지방 함량은 대조군에 비하여 DM군에서 유의적인 증 가를 보였으나, 말굽버 섯 추출물 급여 로 뚜렷한 감소를 나타 내 었다. HDL-콜레스테롤 함량은 DM군에서 현저 한 감소를 보였으나, 말굽버 섯 추출물 투여 군에서 유의한 증가가 나타났다.
- 혈당은 당뇨로 인해 증가하였으나 말굽버 섯 추출물 투여군에서 유의적으로 감소를 보였다. 혈청과 간의 총콜레스테롤과 중성지방 함량은 말굽버섯 추출물 급여로 DM군에 비하여 현저한 감소를 나타내었다. HDL-콜레스테 롤 함량과 GSH-Px의 활성은 말굽버섯 추출물 급여 시 에는 DM군과 비교하여 유의한 증가가 나타났다.
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