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문제 정의
- 염증 매개 물질인 arachidonic acid 유리에 노니 추출물이 어떠한 영향을 미치는지를 관찰하였다. [3H]arachidonic acid로 표식된 Raw 264.
가설 설정
- 05). b: significantly different from DW-fed control (P<0.05).
제안 방법
- 345 nm와 Em. 398nm에서 형광을 나타내는 데 정제한 PLA2에 의해 가수 분해시 형광이 감소하는 원리를 이용하여 노니 추출액이 PLA2 활성에 미치는 억제 효과를 측정하였다. 조직 내 PLA2 활성을 조직 균질액을 이용하여 PLA2 활성을 측정하였다.
- 봉합사를 이용하여 3부위를 봉합한 후 매일 3일간 100 mg/kg 노니 분말을 증류수에 현탁시켜 경구투여 하였다. 3일 후 피부 절개를 한 부위에서 1 mm 두께로 피부 조직을 절취하였고 피부 절개를 하지 않은 왼쪽 등 부위에서 같은 크기의 조직을 절취하였다. 피부 절개를 한 후 증류수만을 경구 투여한 실험군을 대조군으로 간주하였다.
- 노니 추출물이 PLA2에 미치는 영향과 생체 내 항염증 효과를 관찰하였다. Melittin에 의한 arachidonic acid의 유리에 있어서 노니의 수용성 분획은 별다른 영향을 주지 않았으나 지용성 분획은 농도 의존적으로 arachidonic acid 유리를 억제하였다.
- 노니 추출물이 arachidonic acid 유리를 억제하는 것이 PLA2 에 직접 작용하는 지를 확인하기 위하여 Sigma사로부터 구입한 PLA2에 노니 추출물을 가하여 PLA2 활성 변화를 관찰하였다.
- 노니의 생체 내 항염증 효과를 관찰하기 위하여 증류수를 먹인 생쥐 대조군과 노니를 100mg/kg로 먹인 시험군으로 나누었다. 대조군과 시험군 모두 오른쪽 등 부위에 상처를 준 부위와 상처를 주지 않은 왼쪽 등 부위에서 피부조직을 절취하여 지질과산화, PLA2 활성 및 myeloperoxidase 활성을 측정하였다.
- arachidonic acid 유리에서와 마찬가지로 노니의 수용성 분획은 별다른 영향을 주지 않았지만 지용성 분획은 농도의존적2로 PLA2 활성을 억제하였다. 노니의 생체 내 항염증 효과를 관찰하기 위하여 증류수를 먹인 생쥐대조군과 노니를 100mg/kg로 먹인 시험군으로 나누고 피부조직을 절취하여 지질과산화, PLA2 활성 및 myeloper oxidase 활성을 측정하였다. 대조군과 시험군 모두에서 상처를 준 피부조직에서 지질과산화, PLA2 활성 및 myeloperoxidase 활성이 모두 유의하게 증가하였다.
- Labeling5] 끝난 후 serum- free DMEM으로 Im/씩 2회 세척하여 labeling 되지 않은 [3H]arachidonic acid를 제거하였다. 다시 serum-free DMEM을 1 ml 가 하고 노니 추출물을 처치한 후(최종 DMSO 농도는 0.1%로 조절) 1시간 배양한 후 상층액을 취하여 원심분리하고 세포가 없는 상층액 500 B를 취해 액체섬광계수기로 radioactivity를 측정하였다.
- 노니의 생체 내 항염증 효과를 관찰하기 위하여 증류수를 먹인 생쥐 대조군과 노니를 100mg/kg로 먹인 시험군으로 나누었다. 대조군과 시험군 모두 오른쪽 등 부위에 상처를 준 부위와 상처를 주지 않은 왼쪽 등 부위에서 피부조직을 절취하여 지질과산화, PLA2 활성 및 myeloperoxidase 활성을 측정하였다. 대조군과 시험군 모두에서 상처를 준 피부조직에서 지질과산화, PLA2 활성 및 myeloperoxidase 활성이 모두 유의하게 증가하였다 (Figs.
- 분리한 상층액을 rotary vacuum evaporator에서 김압농축한 후 freeze-dryer로 동결 건조하여 분말을 얻었다. 동결건조한 분말을 증류수에 녹여 수용성 분획을 얻었으며, 증류수에 녹지 않은 침전물은 다시 건조시킨 후 dimethylsulfoxide(DMSO)에 녹여 지용 성 분획으로 간주하여 실험하였다.
- Melittin에 의한 arachidonic acid의 유리에 있어서 노니의 수용성 분획은 별다른 영향을 주지 않았으나 지용성 분획은 농도 의존적으로 arachidonic acid 유리를 억제하였다. 노니 추출물이 arachidonic acid 유리를 억제하는 것이 PLA?를 직접 억제하여 일으키는지를 확인하기 위하여 정제된 PLA2에 노니 추출물을 가하여 PLA2 활성 변화를 관찰하였다. arachidonic acid 유리에서와 마찬가지로 노니의 수용성 분획은 별다른 영향을 주지 않았지만 지용성 분획은 농도의존적2로 PLA2 활성을 억제하였다.
- 가벼운 ether 마취하여 등 쪽의 털을 깨끗이 면도한 후 오른쪽 등 부위 피부조직을 3 cm 절개하였다. 봉합사를 이용하여 3부위를 봉합한 후 매일 3일간 100 mg/kg 노니 분말을 증류수에 현탁시켜 경구투여 하였다. 3일 후 피부 절개를 한 부위에서 1 mm 두께로 피부 조직을 절취하였고 피부 절개를 하지 않은 왼쪽 등 부위에서 같은 크기의 조직을 절취하였다.
- 13)이러한 결과로 미루어 볼 때 노니 추출물은 eicosanoid 생성 경로를 억제하는 것으로 추정되지만, arachidonic acid를 유리시키는 PLA2에 미치는 영향에 대한 보고는 없는 상태이다. 이 실험에서는 노니 추출물이 PLA?에 미치는 영향과 생체 내 항염증 효과를 관찰하였다.
- 피부 절개를 한 후 증류수만을 경구 투여한 실험군을 대조군으로 간주하였다. 절취한 조직을 이용하여 lipid peroxidation, PLA2 활성 및 myeloperoxidase 활성을 측정하였다.
- 398nm에서 형광을 나타내는 데 정제한 PLA2에 의해 가수 분해시 형광이 감소하는 원리를 이용하여 노니 추출액이 PLA2 활성에 미치는 억제 효과를 측정하였다. 조직 내 PLA2 활성을 조직 균질액을 이용하여 PLA2 활성을 측정하였다.
- 조직 내 지질과 산화를 측정하기 위하여 thiobarbituric acid reactive substances(TBARS)의 형광을 이용하였다. 조직을 0.
- 체중이 20-25 g 정도 되는 숫컷 Balb-c 생쥐를 이용하여 피부 절개 후 항염증 작용에 미치는 노니 추출액의 효과를 관찰하 였다. 가벼운 ether 마취하여 등 쪽의 털을 깨끗이 면도한 후 오른쪽 등 부위 피부조직을 3 cm 절개하였다.
- 3일 후 피부 절개를 한 부위에서 1 mm 두께로 피부 조직을 절취하였고 피부 절개를 하지 않은 왼쪽 등 부위에서 같은 크기의 조직을 절취하였다. 피부 절개를 한 후 증류수만을 경구 투여한 실험군을 대조군으로 간주하였다. 절취한 조직을 이용하여 lipid peroxidation, PLA2 활성 및 myeloperoxidase 활성을 측정하였다.
- 형광을 발생하는 10-pyren phosphatidylcholines- 기질로 이용하여 PLA2의 활성을 측정하는 방법을 이용하였다.14)10-Pyren phosphatidylcholine은 Ex.
대상 데이터
- Raw 264.7세포는 10% fetal bovine serum(FBS)과 peni- cillin/streptomysin(100 IU/50 μg/m/)을 함유한 Dulbecco's modified Eagle's medium(DMEM) 용액으로 37℃로 유지되는 5% CO2 배양기에서 배양하였다.
- 에서 구입하였다. Raw 264.7세포는 서울대학교 세포주 은행2로부터 구입 하였다.
- 원심분리 후 200 订 를 96 well plate에 옮기고 Ex: 485 nm, Em: 535nm에서 형광 측정하였다. 표준물질로서 는 malonylclialdehyde(l, l, 3, 3-tetrae- thoxypropane, Sigma)를 사용하였다.
- 화와이산 노니 열매분말은 (주)태영이엔티에서 구입하였다. PLA2(Sigma Code No, : P7778), thiobarbituric acid, hexadecyl trimethyl ammonium bromide(HTAB), 3, 3', 5, 5'-tetramethyl benzidine(TMB), N, N-dimethylformamide(DMF)들은 Sigma사 로부터 구입하였으며, [3H]arachidonic acid는 NEN으로부터, 10- pyren phosphatidylcholine는 Molecular Probe Co.
데이터처리
- 실험 결과는 평균士표준편차로 표기하였으며, 실험성적은 non paired Student's t test로 검정하였고 P 값이 5% 미만일 때 통계적으로 유의하다고 간주하였다.
성능/효과
- 3 - Effect of Noni on lipid peroxidation at the edges of the incision wounds in mice. Results are means ±SD from 6 mice per group, a: significantly different from non-incision control (P<0.05). b: significantly different from DW-fed control (P<0.
- 3 - Effect of Noni on lipid peroxidation at the edges of the incision wounds in mice. Results are means ±SD from 6 mice per group, a: significantly different from non-incision control (P<0.05). b: significantly different from DW-fed control (P<0.
- 급성 염증시 초기에는 호중구가 주로 관여하며 이후 대식세포가 관여하는데 myeloperoxidase^ 주로 호중구와 연관성이 있으며 PLA^와 lipid peroxidation^ 대식 세포와 밀접한 연관성이 있다.圮 흰 쥐에서 피부를 절개한 조직 내 myeloperoxidase 활성은 4시간, 12시간, 1일, 3일에 걸쳐 측정한 결과 3일까지 계속 증가하는 양상을 보였다.哄9)Myeloper- oxidase는 호중구에서 분비되는 효소로 초기 염증 과정에서 호중구의 침윤이 계속 증가하고 있음을 암시하여 준다.
- 3~5). 노니 분말을 투여한 시험군에서 상처를 주지 않은 피부조직의 지질과 산화물 생성은 대조군에 비해 유의하게 감소하였다. 피부를 절개한 조직에서 노니를 투여한 시험군의 지질 과산화, PLA2 활성 및 myeloperoxidase 활성은 대조군에 비하여 모두 유의하게 감소하였다.
- 대조군과 시험군 모두 오른쪽 등 부위에 상처를 준 부위와 상처를 주지 않은 왼쪽 등 부위에서 피부조직을 절취하여 지질과산화, PLA2 활성 및 myeloperoxidase 활성을 측정하였다. 대조군과 시험군 모두에서 상처를 준 피부조직에서 지질과산화, PLA2 활성 및 myeloperoxidase 활성이 모두 유의하게 증가하였다 (Figs. 3~5). 노니 분말을 투여한 시험군에서 상처를 주지 않은 피부조직의 지질과 산화물 생성은 대조군에 비해 유의하게 감소하였다.
- 노니의 생체 내 항염증 효과를 관찰하기 위하여 증류수를 먹인 생쥐대조군과 노니를 100mg/kg로 먹인 시험군으로 나누고 피부조직을 절취하여 지질과산화, PLA2 활성 및 myeloper oxidase 활성을 측정하였다. 대조군과 시험군 모두에서 상처를 준 피부조직에서 지질과산화, PLA2 활성 및 myeloperoxidase 활성이 모두 유의하게 증가하였다. 피부를 절개한 조직에서 노니를 투여한 시험군의 지질과 산화, PLA2 활성 및 myeloperoxidase 활성은 대조군에 비하여 모두 유의하게 감소하였다.
- 哄9)Myeloper- oxidase는 호중구에서 분비되는 효소로 초기 염증 과정에서 호중구의 침윤이 계속 증가하고 있음을 암시하여 준다. 이 실험 결과에서 사용한 염증 지표로 사용한 3가지 인자는 상처를 준 조직에서 모두 상처를 주지 않은 조직에 비해 증가하는 것으로 보아 염증치료의 지표로서 문제는 없을 것으로 사료된다. 이상의 결과를 종합하여 볼 때 in vitro assay와 동물 모델을 이용한 항염증 작용에서 노니의 지용성 성분 중에는 PLA2를 직접 억제하여 arachidonic acid 유리를 억제하며, 이러한 기전은 생체 내에서 항염증 작용을 나타내는 기전으로 사료된다.
- 이 실험 결과에서 사용한 염증 지표로 사용한 3가지 인자는 상처를 준 조직에서 모두 상처를 주지 않은 조직에 비해 증가하는 것으로 보아 염증치료의 지표로서 문제는 없을 것으로 사료된다. 이상의 결과를 종합하여 볼 때 in vitro assay와 동물 모델을 이용한 항염증 작용에서 노니의 지용성 성분 중에는 PLA2를 직접 억제하여 arachidonic acid 유리를 억제하며, 이러한 기전은 생체 내에서 항염증 작용을 나타내는 기전으로 사료된다.
- 피부를 절개한 조직에서 노니를 투여한 시험군의 지질과 산화, PLA2 활성 및 myeloperoxidase 활성은 대조군에 비하여 모두 유의하게 감소하였다. 이상의 결과를 종합하여 볼 때 宓 vitro assay와 동물 모델을 이용한 항염증 작용에서 노니의 지용성 성분 중에는 PLA2< 직접 억제하여 arachidonic acid 유리를 억제하며, 이러한 기전은 생체 내에서 항염증 작용을 나타내는 기전으로 사료된다.
- 노니 분말을 투여한 시험군에서 상처를 주지 않은 피부조직의 지질과 산화물 생성은 대조군에 비해 유의하게 감소하였다. 피부를 절개한 조직에서 노니를 투여한 시험군의 지질 과산화, PLA2 활성 및 myeloperoxidase 활성은 대조군에 비하여 모두 유의하게 감소하였다. 급성 염증시 초기에는 호중구가 주로 관여하며 이후 대식세포가 관여하는데 myeloperoxidase^ 주로 호중구와 연관성이 있으며 PLA^와 lipid peroxidation^ 대식 세포와 밀접한 연관성이 있다.
- 노니 분말을 투여한 시험군에서 상처를 주지 않은 피부조직의 지질과 산화물 생성은 대조군에 비해 유의하게 감소하였다. 피부를 절개한 조직에서 노니를 투여한 시험군의 지질 과산화, PLA2 활성 및 myeloperoxidase 활성은 대조군에 비하여 모두 유의하게 감소하였다. 급성 염증시 초기에는 호중구가 주로 관여하며 이후 대식세포가 관여하는데 myeloperoxidase^ 주로 호중구와 연관성이 있으며 PLA^와 lipid peroxidation^ 대식 세포와 밀접한 연관성이 있다.
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