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문제 정의
- 본 연구에서는 노니 열매 추출 엑기스를 이용하여 일반적으로 효험이 인정된 종양 억제, 세포 활성화에 의한 세포 재생 능력 평가를 항산화 작용에 의한 세포 변화 등에 의해 생리 활성 효과의 척도로서 실험을 하게 되었다. 이러한 노니에 대한 연구 결과는 국내에서는 처음 시도한 연구 결과로 정상 세포에 H2O2를 처리하고 노니 엑기스를 첨가할 경우 노니를 첨가한 세포군에서 항산화 효과가 인정되었으며, 암세포 실험에서는 노니를 첨가한 세포군에서 암 억제 효과가 인정되었기에 이를 보고한다.
- 활성 효과의 척도로서 실험을 하게 되었다. 이러한 노니에 대한 연구 결과는 국내에서는 처음 시도한 연구 결과로 정상 세포에 H2O2를 처리하고 노니 엑기스를 첨가할 경우 노니를 첨가한 세포군에서 항산화 효과가 인정되었으며, 암세포 실험에서는 노니를 첨가한 세포군에서 암 억제 효과가 인정되었기에 이를 보고한다. 이러한 연구 결과로부터 노니는 세포 재생 능력과 암 세포에도 공격적으로 작용한다는 새로운 사실을 확인할 수 있었다.
제안 방법
- 15분간 staining하였다. PBS로 2분씩 3회 잘 washing 한 후 세포가 붙어있는 slide glass만을 꺼내 배지를 흡입시키고(Kim wipes 이용), glycerol 10 以를 slide glass위에 떨어뜨린 후 세포가 자라 묻어있는 cover glass를 거꾸로 한 다음 형광현미경 (fluorescence microscope)으로 세포의 변화를 관찰하였다(9).
- 노니 추출 엑기스를 농도별로 희석하여 암 세포 주에 농도별로 첨가하여 MTT assay 법, Heochst 33342 염색법을 이용하여 항암 억제효과를 관찰하였다. 또 정상 세뇨관 세포를 이용하여 세포 재생 실험의 척도로 항산화 작용에 대한 내성 실험을 하였다.
- 미리 배양된 DU145 암 세포주에 노니 엑기스를 농도 별로 첨가하여 5일 동안 배양한 후 암 억제 효과의 척도 실험에 의한 암 세포의 변화를 관찰하였다(Fig. 3). 본 실험에서 암세포 주에 노니 엑기스를 0.
- 세포가 80% 이상 자랐을 때 DMEM 배지를 교대하고 DMEM 배지 1 m2를 넣은 다음 10 迎/碱의 heochst 33342 DNA핵 염색 시약을 첨가한 후 CO2 배양기에서 371 항온에서 15분간 staining하였다. PBS로 2분씩 3회 잘 washing 한 후 세포가 붙어있는 slide glass만을 꺼내 배지를 흡입시키고(Kim wipes 이용), glycerol 10 以를 slide glass위에 떨어뜨린 후 세포가 자라 묻어있는 cover glass를 거꾸로 한 다음 형광현미경 (fluorescence microscope)으로 세포의 변화를 관찰하였다(9).
- 세포의 재생 실험을 위해서 신장 정상세포인 MDCK 세뇨관 세포를 이용하여 각각 실험군에 노니 엑기스를 0.1 첨가 한 것과, 첨가시키지 않은 것을 각각의 세포에 처리하고 H2O2 0.1 mM를 동일하게 처리한 후 1시간 배양 후 세포의 형태를 측정하였다. Fig.
- 신장 정상세포인 MDCK세뇨관 세포에 노니 엑기스를 10 以씩 30분 처리한 후 각각의 셀라인에 H2O2 1 mM을 동일하게 처리하였다. 한 세포에는 H2O2만을 처리하고 대조군으로는 노니 엑기스를 혼합한 것을 각각 1시간 배양한 후 세포 형태의 변화를 현미경으로 관찰하였다.
- 2 I此을 첨가하여 1시간 동안 배양시켰다. 암 세포주에 노니 엑기스를 농도별로 처리하여 배양시킨 후 6일 동안 매일 각각의 well에 MTT (Sigma) 시약을 20 以 첨가하여 3시간 동안 배양하고 이후 Sorenson's glycine buffer (0.1 M glycine, 0.1 M NaCl, pH 8.0) 25 以와 DMSO 200 以를 첨가하고 shaker에서 10분간 흔들고 ELISA-reader로 570 nm에서 흡광도를 측정하였다(6-8).
- 암 세포주인 DU145세포를 96 well plate에 5 x 103 cells/well로 접종한 후에 10% FBS가 포함된 DMEM으로 24 시간동안 배양시킨 후 PBS 0.2 祀로 세척하고 Opti-MEM (Gibco) 0.2 I此을 첨가하여 1시간 동안 배양시켰다. 암 세포주에 노니 엑기스를 농도별로 처리하여 배양시킨 후 6일 동안 매일 각각의 well에 MTT (Sigma) 시약을 20 以 첨가하여 3시간 동안 배양하고 이후 Sorenson's glycine buffer (0.
- 자연식물 노니식물에서 엑기스를 추출하여 항 산화작용을 측정하였다. 시험관에서의 세포 재생 능력 등을 측정한 결과 암 세포 억제 및 세포 재생 능력, 항산화 작용이 인정되었다.
- 처리하였다. 한 세포에는 H2O2만을 처리하고 대조군으로는 노니 엑기스를 혼합한 것을 각각 1시간 배양한 후 세포 형태의 변화를 현미경으로 관찰하였다. 그 결과 田。2만 처리한 세포보다 노니 엑기스를 첨가하여 배양한 세포군에서 세포의 형태가 뚜렷하게 나타났다.
대상 데이터
- 노니는 폴리네시아산 100% 노니 열매 추출 엑기스를 사용하였다. 노니 추출 엑기스를 농도별로 희석하여 암 세포 주에 농도별로 첨가하여 MTT assay 법, Heochst 33342 염색법을 이용하여 항암 억제효과를 관찰하였다.
- 본 연구에 있어서는 동신대학교 생물자원연구센터 내에 소제하고 있는 우리 농산물 기능연구소를 이용하여 일부분의 실험이 이루어졌다. 연구원 여러분에게 심심한 감사를 표한다.
이론/모형
- 노니 추출 엑기스를 농도별로 희석하여 암 세포 주에 농도별로 첨가하여 MTT assay 법, Heochst 33342 염색법을 이용하여 항암 억제효과를 관찰하였다. 또 정상 세뇨관 세포를 이용하여 세포 재생 실험의 척도로 항산화 작용에 대한 내성 실험을 하였다.
성능/효과
- 한 세포에는 H2O2만을 처리하고 대조군으로는 노니 엑기스를 혼합한 것을 각각 1시간 배양한 후 세포 형태의 변화를 현미경으로 관찰하였다. 그 결과 田。2만 처리한 세포보다 노니 엑기스를 첨가하여 배양한 세포군에서 세포의 형태가 뚜렷하게 나타났다. 인체 내의 산화작용에 의한 피부 노화에 대해서는 이미 보고 되었고 항산화 작용에 대한 연구 보고가 암 기작에까지 영향을 끼친다는 사실은 이미 알려진 사실이다.
- 3). 본 실험에서 암세포 주에 노니 엑기스를 0.1, 0.5, 1 成 씩을 첨가하여 세포에 미치는 영향을 ELISA로 측정한 결과 노니 엑기스의 농도별 시간적 변화를 측정한 결과 시간이 흐름에 따라 점차적으로 암 세포의 억제 효과를 확인할 수 있었다. 이러한 결과로부터 노니 성분 중 미지의 마이나 성분이 암 세포를 직접적으로 억제시킬 수 있다는 능력이 확인된 것으로 추후 이러한 작용에 대한 기전에 대해 주의 깊게 연구해야 될 필요성이 있는 것으로 사료된다.
- 본 연구 결과로부터 노니 엑기스는 종양을 억제하고 항 암 효과가 있는 것으로 사료된다. 또한 노니 추출 엑기스에서는 일반적으로 Xeronine과 관련된 성분이 생리 활성 물질로 보고 되어 있는데, 특히 이 성분은 일종의 인삼 Saponine 성분과 유사한 것으로 에너지 대사에 영향을 끼치는 단백질 분자와 부합해서 단백질 활성을 강화시키고 에너지 대사를 촉진시킨다고 보고되고 있다(2).
- 자연식물 노니식물에서 엑기스를 추출하여 항 산화작용을 측정하였다. 시험관에서의 세포 재생 능력 등을 측정한 결과 암 세포 억제 및 세포 재생 능력, 항산화 작용이 인정되었다.
- 노니 엑기스는 정상적인 세포는 더 효과적인 일을 할 수 있도록 활성화시키며, 파손된 세포는 재생 능력을 부여한다고 알려져 있다(2). 이는 Fig. 2의 결과에서와 같이 정상 세포에 활성 산소가 작용하여 세포 사를 일으키는데 비해 노니 엑기스를 첨가 시험군에서는 세포사 과정에 있는 세포의 손상을 억제하는 효과가 있으며, 항산화 효과가 있는 것으로 확인되었다. 또한 암 억제 효과에 대한 in vitro 실험에서 보고된 바 있는 노니 엑기스 성분 중 어떤 마이나 성분이 암세포 번식을 억제하고 손상된 세포를 재생시킨다고 알려져 있지만 본 실험의 결과에서도 확실히 그 보고와 동일한 결과를 얻을 수 있었다.
- 이러한 노니에 대한 연구 결과는 국내에서는 처음 시도한 연구 결과로 정상 세포에 H2O2를 처리하고 노니 엑기스를 첨가할 경우 노니를 첨가한 세포군에서 항산화 효과가 인정되었으며, 암세포 실험에서는 노니를 첨가한 세포군에서 암 억제 효과가 인정되었기에 이를 보고한다. 이러한 연구 결과로부터 노니는 세포 재생 능력과 암 세포에도 공격적으로 작용한다는 새로운 사실을 확인할 수 있었다.
- 이러한 사실로 미루어 볼 때 노니의 마이나 성분 중 그 기전은 알 수 없으나 세포의 항산화 효과가 있을 것으로 사료된다. 이런 결과로부터 노니 액기스 성분은 항산화 작용은 물론 세포노화에 간접적으로 작용하는 마이나 성분이 작용한다는 확실한 사실을 알게 되었다(Fig. 1).
후속연구
- 추후 성분 검사를 통한 노니의 연구가 단계적으로 연구되어야 된다고 사료된다. 본 실험의 결과로는 노니의 어떤 마이나 성분이 작용되었을것이라는 추측의 결과로밖에 확인할 수 없었으나 추후 노니의 성분 검사에 대한 중요한 지표로 사용되리라 생각한다. 노니의 연구에 대해서는 계속해서 연구를 거듭하여 이러한 미지의 의구심을 독해할 수 있도록 전력을 기울여 좋은 결과를 보고할 수 있으리라 생각한다.
- 본 연구 결과는 노니 추출물이 암 세포 억제 및 세포 재생능력이 인정된 결과로 이를 계기로 노니의 연구가 활성화되어 노니의 약리 효과 등의 기전이 밝혀지기를 기대한다.
- 5, 1 成 씩을 첨가하여 세포에 미치는 영향을 ELISA로 측정한 결과 노니 엑기스의 농도별 시간적 변화를 측정한 결과 시간이 흐름에 따라 점차적으로 암 세포의 억제 효과를 확인할 수 있었다. 이러한 결과로부터 노니 성분 중 미지의 마이나 성분이 암 세포를 직접적으로 억제시킬 수 있다는 능력이 확인된 것으로 추후 이러한 작용에 대한 기전에 대해 주의 깊게 연구해야 될 필요성이 있는 것으로 사료된다.
- 또한 암 억제 효과에 대한 in vitro 실험에서 보고된 바 있는 노니 엑기스 성분 중 어떤 마이나 성분이 암세포 번식을 억제하고 손상된 세포를 재생시킨다고 알려져 있지만 본 실험의 결과에서도 확실히 그 보고와 동일한 결과를 얻을 수 있었다. 추후 성분 검사를 통한 노니의 연구가 단계적으로 연구되어야 된다고 사료된다. 본 실험의 결과로는 노니의 어떤 마이나 성분이 작용되었을것이라는 추측의 결과로밖에 확인할 수 없었으나 추후 노니의 성분 검사에 대한 중요한 지표로 사용되리라 생각한다.
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