ELSD를 이용한 레시틴중의 포스파티딜콜린의 분석 Determination of Phosphatidylcholine in Korea Functional Foods Containing Lecithins using HPLC with Evaporative Light-Scattering Detector (ELSD)원문보기
본 연구는 세포막의 구성성분으로서 인체의 신진대사에 관여하는 물질인 인지질을 정량하기 위하여 인지질의 주요성분인 포스파티딜콜린에 대해 HPLC/ELSD를 이용한 신속, 정확한 분석법을 확립하였다. HPLC의 조건은 silica column을 사용하고 헥산:이소프로판올:물-30:60:8을 유속 0.5 ml/min으로 포스파티딜콜린을 분리하였고 ELSD 검출기를 사용하여 nebulizer온도는 $60^{\circ}C$. drift tube온도는 $75^{\circ}C$, carrier gas 30 psi로 하여 20 min내에 분리하였으며 검량선은 250 ppm$\∼$1,000 ppm으로 하여 정량하였다. 시료의 회수율은 $80\%$이상으로 높게 나타났으며 정량한계는 0.15 ppm이였다. 또한 이 분석법을 이용하여 실제 유통되고 있는 레시틴제품(난황레시틴 2종, 대두레시틴8종)에 대해 인지질의 함량과 포스파티딜함량을 조사한 결과, 인지질의 함량은 각각 81.5$\∼$83.3$\%$, $66.0\∼88.0\%$로 나타났으며 포스파티딜콜린의 함량은 각각 74.8$\∼$ 8.6$\%$및 $18.7\∼62.3\%$로 난황레시틴의 함량이 높게 나타났다.
본 연구는 세포막의 구성성분으로서 인체의 신진대사에 관여하는 물질인 인지질을 정량하기 위하여 인지질의 주요성분인 포스파티딜콜린에 대해 HPLC/ELSD를 이용한 신속, 정확한 분석법을 확립하였다. HPLC의 조건은 silica column을 사용하고 헥산:이소프로판올:물-30:60:8을 유속 0.5 ml/min으로 포스파티딜콜린을 분리하였고 ELSD 검출기를 사용하여 nebulizer온도는 $60^{\circ}C$. drift tube온도는 $75^{\circ}C$, carrier gas 30 psi로 하여 20 min내에 분리하였으며 검량선은 250 ppm$\∼$1,000 ppm으로 하여 정량하였다. 시료의 회수율은 $80\%$이상으로 높게 나타났으며 정량한계는 0.15 ppm이였다. 또한 이 분석법을 이용하여 실제 유통되고 있는 레시틴제품(난황레시틴 2종, 대두레시틴8종)에 대해 인지질의 함량과 포스파티딜함량을 조사한 결과, 인지질의 함량은 각각 81.5$\∼$83.3$\%$, $66.0\∼88.0\%$로 나타났으며 포스파티딜콜린의 함량은 각각 74.8$\∼$ 8.6$\%$및 $18.7\∼62.3\%$로 난황레시틴의 함량이 높게 나타났다.
Lecithin is a naturally occurring group of phospholipids found in nearly every living cell and has been widely used as the ingredient of functional foods. Lecithin has high content of phosphatidylcholine(PC), pharmaceutical material which promotes metabolism through the cell membrane. This study was...
Lecithin is a naturally occurring group of phospholipids found in nearly every living cell and has been widely used as the ingredient of functional foods. Lecithin has high content of phosphatidylcholine(PC), pharmaceutical material which promotes metabolism through the cell membrane. This study was carried out to improve the present inconvenient analytical method of PC in law for health & functional foods. The commodities used in this experiment, were two kinds of egg yolk and eight kinds of soybean lecithin functional foods. PC was separated with isocratic elution with hexane : isopropanol : D.W (30:60:8) through silica column (2.1$\times$150 mm) by HPLC with Evaporative Light-Scattering Detector (ELSD). The flow rate of the eluent was 0.5 ml/mim and infect volume was 10ul. The neubilizer temperature of detector was $60^{\circ}C$, drift tube temperature of that was $75^{\circ}C$ and gas flow was 30 psi. Quantification was carried out by external standardization. Limit of quantification was 0.15ppm. Lecithin contents of egg yolk and soybean Products were > $66\%$ and > $81\%$), respectively. Phosphatidylcholine contents of egg yolk and soybean products were > $74\%$ and > $18\%$, respectively.
Lecithin is a naturally occurring group of phospholipids found in nearly every living cell and has been widely used as the ingredient of functional foods. Lecithin has high content of phosphatidylcholine(PC), pharmaceutical material which promotes metabolism through the cell membrane. This study was carried out to improve the present inconvenient analytical method of PC in law for health & functional foods. The commodities used in this experiment, were two kinds of egg yolk and eight kinds of soybean lecithin functional foods. PC was separated with isocratic elution with hexane : isopropanol : D.W (30:60:8) through silica column (2.1$\times$150 mm) by HPLC with Evaporative Light-Scattering Detector (ELSD). The flow rate of the eluent was 0.5 ml/mim and infect volume was 10ul. The neubilizer temperature of detector was $60^{\circ}C$, drift tube temperature of that was $75^{\circ}C$ and gas flow was 30 psi. Quantification was carried out by external standardization. Limit of quantification was 0.15ppm. Lecithin contents of egg yolk and soybean Products were > $66\%$ and > $81\%$), respectively. Phosphatidylcholine contents of egg yolk and soybean products were > $74\%$ and > $18\%$, respectively.
레시틴의 인지질 정량은 레시틴중의 수분을 완전히 건고 시켜서 클로로포름/메탄올 혼액(2:1)으로 검체를 용해하여 지질이외의 성분이 완전히 제거되도록 하여 순수한 인지질 성분만을 아세톤으로 추출하고 원심분리한 상층액을 건고하고 항량하여 무게를 달아서 인지질 함량을 구하였다. 인지질의 함량은 난황레시틴에서 81.
포스파티딜콜린 표준용액 250 ppm, 500 ppm, 1000 ppm을 HPLC/ELSD에 주입하여 농도변화에 따른 검량선을 작성한 결과 1차식에 의한 검량선의 상관성(R2=o.977765)보다 2차식에 의한 상관성(R2=0.999998)이 높게 나타났으므로 2차식에 의한 검량선으로 시료의 포스파티딜콜린의 양을 정량하였다(Fig. 2). 이것은 Andrea에 따르면 ELSD의 특성상 검량선이 1차식보다 2차식이 더 정확하다고 보고되어있다17).
5 g씩을 정확히 달아 메탄올에 녹이고 초음파로 5분간 추출하여 100 ml로 정용하였으며, 이 용액 10 ml를 취하여 메탄올로 100 m가 되게 정용하고 여과하여 시험용액으로 하였다. 표준용액은 포스파티딜콜린 표준품을 메탄올에 녹여 100 ppm, 250 ppm, 500 ppm, 1000 ppm 으로 검량선을 작성하기 위해 HPLC로 분석하였다.
대상 데이터
1) 시약 - 2-propanol, methanol, hexane , chloroform등의 시약은 HPLC grade의 Merck 제품을 사용하였다.
2) 표준품 - phosphatidylcholinee Sigma-Aldrich에서 구입하여 사용하였다.
HPLC 는 Waters 600 pump, 717 autosampler 와 Evaporative Light-Scattering Detector(Waters 2420 ELSD)를 사용하였으며 분석조건은 다음과 같다(Table 1).
시료는 대두레시틴 제품 8종및 난황레시틴 제품 2종을 시중에서 구입하여 사용하였다.
성능/효과
drift tube 온도는 75℃에서 최적감도로 검출되었으며 carrier gas 로 사용되는 질소가스의 압력은 30 psi가 적당하였다. HPLC의 조건은 극성 칼럼인 silica column을 사용하였고, 이동상의 조성은 지질이 잘 분리될 수 있는 헥산: 이소프로판올: 물의 조성비를 40:50:8에서 30:60:8로 변화시켜 표준품의 분석한 결과, 40:50:8 및 36:56:8의 조성에서 peak가 broad하게 나타났으며 회수율 및 분리능이 떨어졌으나, 조성비가 30:60:8에서 retention time이 12.447로 최적조건을 나타내었다(Table 3). 이동상의 조성에 따른 ELSD 검출기의 감도의 차이는 nebulizer를 통과한 용매의 기화와 drift tube에서 형성된 시료 입자의 크기에 의존하기 때문에 이동상의 조성비에 따른 시료 입자의 형성에 따라 회수율이 크게 차이가 생길 수 있기 때문에 이동상 조건의 설정이 매우 중요하다.
3%로 나타났다. 대두레시틴 및 난황레시틴의 시료중의 인지질 함량은 거의 차이가 없었지만, 포스파티딜 콜린의 함량은 난황레시틴에서 훨씬 높게 나타났다. 또한 건강기능식품 공전의 레시틴제품의 규격은 인지질중 포스파티딜콜린의 함량은 대두레시틴제품에서 10.
대두레시틴 및 난황레시틴의 시료중의 인지질 함량은 거의 차이가 없었지만, 포스파티딜 콜린의 함량은 난황레시틴에서 훨씬 높게 나타났다. 또한 건강기능식품 공전의 레시틴제품의 규격은 인지질중 포스파티딜콜린의 함량은 대두레시틴제품에서 10.0% 이상, 난황레시틴제품에서 60.0 이상으로 규정되어 있으므로 이에 합당한 결과이며 기능물질인 포스파티딜콜린의 함량이 높게 나타난 제품이 기능성이 높을 것으로 기대된다(Table 5).
이것은 Andrea에 따르면 ELSD의 특성상 검량선이 1차식보다 2차식이 더 정확하다고 보고되어있다17). 또한 난황레시틴 및 대두레시틴에 대한 포스파티딜콜린의 회수율을 구하기 위하여 대두레시틴과 난황레시틴에 표준품 250 ppm을 첨가하여 3회 반복 실험한 결과, 모두 80% 이상의 높은 회수율을 나타내었다(Table 4). 또한 정량한계 (S/ N=10)는 0.
레시틴의 인지질 정량은 레시틴중의 수분을 완전히 건고 시켜서 클로로포름/메탄올 혼액(2:1)으로 검체를 용해하여 지질이외의 성분이 완전히 제거되도록 하여 순수한 인지질 성분만을 아세톤으로 추출하고 원심분리한 상층액을 건고하고 항량하여 무게를 달아서 인지질 함량을 구하였다. 인지질의 함량은 난황레시틴에서 81.5-83.3%, 대두레시틴에서 66.0~88.0%로 인지질의 원료에 관계없이 레시틴중 인지질의 함량은 높게 나타났다(Table 2).
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