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문제 정의
- 따라서 고가의 진흙버섯을 저가로 낮추어 기능성식 품의 다양화 및 동물약품시장에서 응용이 가능한 제품 출시를 기대하고 있다. 동물약품에서의 응용을 위하여 열수추출 방법 대신에 다양한 에탄올을 이용한 추출을 할 경우 더 많은 생리활성을 포함할 수 있어 항산화 및 항암활성을 기준으로 하여 각각에 대한 최적의 자실체 추출용 에탄올 농도를 정하고자 본 실험을 실시하였다.
제안 방법
- gilvus는 3개월 동안 참나무 원목과 톱밥 배지에서 속성으로 재배된 것으로 경상북도 농업기술원에서 공급 받아 사용하였다. 각각의 P. gilvus에 대한 황산화작용 및 황암활성을 비교하고자 자실체를 건조하여 분쇄한 후 D.W., 20%, 40%, 60% 그리고 80% 에탄올을 1:10의 비율로 혼합하여 실온에서 7시간 동안 진탕 추출하였으며 이 과정을 2회 반복하였다. 감압 농축된 시료는 0.
- 본 연구에서는 참나무원목과 톱밥에서 재배된 마른진흙버섯(Phellinus gilvus)의 자실체의 원소구성비를 분석하였으며 또한 열수추출, 20%, 40%, 60% 그리고 80% 에탄올 추출물에 대한 항산화 및 항암활성을 조사하였다. 참나무 원목과 톱밥에서 재배된 자실체의 원소함량은 carbon이 47.
- SRB법에서 염색된 세포들은 microplate reader(Molecular Devices, USA)를 이용하여 490 nm에서 그 흡광도를 측정하였다. 종양 세포들에 대한 시험물질의 효과를 평가하기 위하여 세포수의 측정은 시험물질을 처치한 well의 흡광도를 시험물질을 처치하지 않은 음성대조군 well의 흡광도로 나누어 %로 나타내었다.
- 항암활성 측정을 위하여 마우스 유래 종양 세포주인 암세포주인 sarcoma 180를 한국세포주은행(KOREAN CELL LINE BANK)에서 분양받았다. 종양세포주의 배양 및 유지를 위한 배지는 RPMI 1640을 이용하였으며 fetal bovine serum(FBS) 10%를 첨가하고, penicillin과 streptomycin을 100 units/ml와 100 mg/ml의 농도가 되게 배양액에 첨가하였다. 암세포는 37℃에서 5% CO2 세포배양기에서 배양하여 sulforhodamine B(SRB)법을 시행하였다.
- 참나무 원목과 톱밥에서 재배된 마른진흙버섯 자실체에 대한 원소분석비를 비교하고자 각각 건조된 진흙버섯을 분쇄기로 분말화하여 각각의 진흙버섯 분말로부터 3군데에서 1 g을 각각 취하여 Elemental Analyzer(FISONS, EA 1110)로 탄소(C), 수소(H), 그리고 질소(N)을 정량 분석하여 비교하였다.
- 항산화 능력으로 1, 1-diphenyl-2-picryl hydrazyl (DPPH)에 대한 환원력으로 측정하였다. 각 시료 4 ml (1,000 µg/ml)에 1.
대상 데이터
- P. gilvus는 3개월 동안 참나무 원목과 톱밥 배지에서 속성으로 재배된 것으로 경상북도 농업기술원에서 공급 받아 사용하였다. 각각의 P.
- 여과물의 최고 농도는 rotating vacuum evaporator(modulspin31, Biotron, Korea)을 이용하여 30 µg/ml로 제조하고 이를 Phosphate Buffer Saline(PBS)에 각각 희석하였다. 항암제인 독소루비신 (DOX)(Adriamycin ,Ildong Pharm., Korea)도 PBS에 희석하여 10, 1, 0.1, 0.01, 및 0.001 mM 농도로 제조하여 실험 전까지 4℃에 보관하였다.
- 항암활성 측정을 위하여 마우스 유래 종양 세포주인 암세포주인 sarcoma 180를 한국세포주은행(KOREAN CELL LINE BANK)에서 분양받았다. 종양세포주의 배양 및 유지를 위한 배지는 RPMI 1640을 이용하였으며 fetal bovine serum(FBS) 10%를 첨가하고, penicillin과 streptomycin을 100 units/ml와 100 mg/ml의 농도가 되게 배양액에 첨가하였다.
데이터처리
- The value are mean±SD. Statistical analysis was perforemed by student’s t-test.
- 통계분석은 SAS statistical package(release 8.1 SAS Institute, USA)를 이용하여 ANOVA를 실시하고 그 유의 수준은 p <0.05로 하였다. 참나무 원목과 톱밥으로 재배된 마른진흙버섯의 자실체의 원소 함량의 구성비를 비교하여 그 결과를 Table 1에 나타내었다.
이론/모형
- 종양세포주의 배양 및 유지를 위한 배지는 RPMI 1640을 이용하였으며 fetal bovine serum(FBS) 10%를 첨가하고, penicillin과 streptomycin을 100 units/ml와 100 mg/ml의 농도가 되게 배양액에 첨가하였다. 암세포는 37℃에서 5% CO2 세포배양기에서 배양하여 sulforhodamine B(SRB)법을 시행하였다. SRB법에서 염색된 세포들은 microplate reader(Molecular Devices, USA)를 이용하여 490 nm에서 그 흡광도를 측정하였다.
- , USA)에 여과하였다. 여과물은 glucose를 기준으로 한 anthrone 법에 따라 총당을 측정하여 농도를 결정하였다. 여과물의 최고 농도는 rotating vacuum evaporator(modulspin31, Biotron, Korea)을 이용하여 30 µg/ml로 제조하고 이를 Phosphate Buffer Saline(PBS)에 각각 희석하였다.
성능/효과
- 2). Fig. 2로부터 항암활성을 처리별 항암활성을 비교하고자 참나무 원목에서 열수추출, 20%, 40%, 60% 그리고 80%의 에탄올 추출물에 대한 항암활성(IC50) 결과 148, 99, 83, 75 그리고 24 µg/ml의 수치를 보여주었으며 참나무 톱밥에서는 63, 32, 24, 20 그리고 18 µg/ml의 IC50 값을 보여주었다. 이러한 결과로 참나무 원목보다는 톱밥에서 재배된 마른진흙버섯이 항암성분이 증가되는 결과로 나타났다.
- 2로부터 항암활성을 처리별 항암활성을 비교하고자 참나무 원목에서 열수추출, 20%, 40%, 60% 그리고 80%의 에탄올 추출물에 대한 항암활성(IC50) 결과 148, 99, 83, 75 그리고 24 µg/ml의 수치를 보여주었으며 참나무 톱밥에서는 63, 32, 24, 20 그리고 18 µg/ml의 IC50 값을 보여주었다. 이러한 결과로 참나무 원목보다는 톱밥에서 재배된 마른진흙버섯이 항암성분이 증가되는 결과로 나타났다. 에탄올이 함유된 추출용매에 추출되는 것으로 보아 항암활성을 나타내는 성분은 β-글루칸은 아닌 것으로 추측이 되며 단백다당체 혹은 다당체 이외의 물질일 가능성이 높은 것으로 생각되었다 [8].
- 46%로 차이가 없었다. 전자공여능 활성은 40%와 60% 에탄올에서 가장 좋은 활성을 보여주었다. 항암활성은 참나무 원목에서 열수추출, 20%, 40%, 60% 그리고 80%의 에탄올 추출물에 대한 항암활성(IC50)은 148, 99, 83, 75 그리고 24 µg/ml의 수치를 보여주었으며 참나무 톱밥에서는 63, 32, 24, 20 그리고 18 µg/ml의 IC50 값을 보여주었다.
- 2와 Table 2에 나타내었다. 참나무 원목과 톱밥에서 자란 자실체에서 추출한 추출물은 모두 용량-의존적인 결과를 보여주었으며 에탄올 함량에 따른 모든 추출물에서도 참나무 원목 재배보다 참나무 톱밥에서 더 높은 항암활성을 보여주었다(Fig. 2). Fig.
- 톱밥에서 재배된 자실체에서 전자공여능에 대한 활성의 차이는 나타나지 않았으나 농도에 따라 전자공여능의 활성이 증가함을 보여주었다. 추출용매를 비교시 40%와 60% 에탄올에서 가장 좋은 활성을 보여주었다.
- 1에 나타내었다. 톱밥에서 재배된 자실체에서 전자공여능에 대한 활성의 차이는 나타나지 않았으나 농도에 따라 전자공여능의 활성이 증가함을 보여주었다. 추출용매를 비교시 40%와 60% 에탄올에서 가장 좋은 활성을 보여주었다.
- 전자공여능 활성은 40%와 60% 에탄올에서 가장 좋은 활성을 보여주었다. 항암활성은 참나무 원목에서 열수추출, 20%, 40%, 60% 그리고 80%의 에탄올 추출물에 대한 항암활성(IC50)은 148, 99, 83, 75 그리고 24 µg/ml의 수치를 보여주었으며 참나무 톱밥에서는 63, 32, 24, 20 그리고 18 µg/ml의 IC50 값을 보여주었다.
후속연구
- 에탄올이 함유된 추출용매에 추출되는 것으로 보아 항암활성을 나타내는 성분은 β-글루칸은 아닌 것으로 추측이 되며 단백다당체 혹은 다당체 이외의 물질일 가능성이 높은 것으로 생각되었다 [8]. 이상의 결과로부터 톱밥에서 속성으로 재배되는 마른진흙버섯의 자실체을 에탄올로 추출한 추출물에 대하여 항암활성 등을 비롯한 다양한 생리활성이 검증될 경우 동물약품 원료로서 가능성이 기대된다.
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