선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 이러한 Ginsenoside Rg3가 다량 함유된 흑삼의 항암 효과를 검토.하기 위하여 1차적으로 여러 가지 암세포에 대한 in vitro 세포독성을 측정한 결과, 실험에 사용한 MCF-1 (human breast carcinoma cells line), HT-1080(Human human, Caucasian, fibrosarcoma cell line) 및 Hepa lClC7(Murine Hepatoma cell line) 암세포에 대해서 흑삼 추출물은 홍삼 추출물에 비해서 3-5 배정도 강한 세포독성을 나타내었다(Table 3).
- 이에 본 연구는 소량으로 경험적인 아닌 대량생산할 수 있는 표준화된 흑삼의 제조방법을 개발하였으며, 제조된 흑삼의 항암, 항전이, 비만억제 및 뇌기능 개선효과를 관찰하여 새로운 고부가가치 신기능성 가공인삼으로써의 개발 가능성을 타진하고자 하였다.
- 이와 같이 프리미엄 인삼 시대를 맞이하여 본 연구팀은 물과 불을 함께 사용하여 증숙하는 가장 대표적인 방법인 구증구폭(九蒸九曝)의 원리를 이용한 새로운 가공인삼을 개발하게 되었다. 구증구폭은 중국 송나라 이전부터 사용되었는데 검은깨, 흰콩, 대추, 광나무열매, 측백나무잎, 뽕잎, 검은콩 등 다양한 약재에 이용되어 왔으며, 대표적인 것으로 지황을 구증구폭한 숙지황이 있다.
제안 방법
- 세척된 수삼을 건조하지 않고 증숙 할 경우, 수삼이 터지는 경우가 많으므로 이를 방지하기 위하여 "C에서 24시간 건조하였다, 24시간 저온에서 말린 인삼을 증숙기로 사용한 옹기(Fi응. 1)에 넣고 증숙하였다. 옹기에 7 리터의 생수를 넣은 후 수삼을 부드러운 무명 천으로 다발모양으로 감싸서 뇌두 부분을 아래로 향하게 하여 옹기 안에 가지런히 세웠다.
- 9차 증숙하여 제조한 혹삼 추출물의 항암효과를 관찰하기우] 하여 여러 가지 암세포에 대한 in vitro 세포독성을 측정하였다 흑삼의 human breast carcinoma cells line인 MCF-1 에 대한 IC50 값은 304.39±21.79 昭/!也이었으며, 홍삼의 IC50 값은 1, 212.32±98 俸/戒로 나타났다.
- Fosman이 개발한 방법인 MTT법科으로 세포독성을 측정 MCF-1 (human breast carcinoma c이Is line), HT-1080(Human human, Caucasian, fibrosarcoma cell line), Hepa lClC7(Murine Hepatoma cell line) 를 10% FBS가 첨가된 RPMH640으로 5% CO2/ 37°C 배양기에서 배양하였다. 세포를 배양한 후 Trypsin-EDTA> 이용하여 세포를 배양용기로부터 분리하고 IxlO4 c이Is를 96well plate에 분주하고 24시간 배양한 후 약재를 농도별로 계대 희석하여 well당 100 成씩 분주하였다.
- Ginsenoside Rg3는 최근에 항암 및 뇌기능 개선 효과 등이 있다고 알려져 있어 많은 주목을 끌고 있다W 이에 착안하여본 연구팀이 개발한 흑삼제조 과정 중 생성되는 여러 가지 사포닌 중에서 Ginsenoside Rg3를 선정하여 그 함량을 측정하였다. 실험결과, 증숙하지 않은 백삼에는 Ginsenoside Rg3가 존재하지 않았다.
- In vitro 細胞毒性 測定에는 MCF-l(human breast carcinoma c이Is line), HT-1080(Human human, Caucasian, fibrosarcoma cell line), Hepa lClC7(Murine Hepatoma cell line)) 암세포를 使用하였는데 이들의 培養液은 모두 L-ghitamine이 포함된 RPMI 1640 培地에 56°C 水槽에서 30分間 加溫하여 不活性化시킨 fetal bovine serum(FBS)을 10% 包含하고 1% 扌斤生劑(penicillin-G 10만units/streptomycin 100 mg)와 NaHCO3 2 g을 添加하여 製造하였다
- Teruhiro의 방법으로 Lewis lung carcinoma cell을 마우스당 IxlO6 cells/旅의 濃度가 되도록 細胞 浮游液을 만들고 이 浮游液 을 BDF1 마우스의 왼쪽 겨드랑이에 移植하였다. 移植 後 24時間 부터 各 群을 6마리로 配定하였다.
- 24時間 부터 各 群을 6마리로 配定하였다. 대조군은 생리식염수 0.
- 시료는 대조군의 tumor volume이 약 2 血가 될 때까지 투여하였出약 2주). 그 후 tumor 크기를 측정한 다음 아래의 계산식으로 tumor 면적을 구하여 inhibition of tumor volume을 측정하였다.
- 금산에서 생산되어 유통되는 5년근 수삼을 구입한 뒤 건조한 백삼과 증숙 차수에 따른 인삼 추출물의 양을 측정하였다. 증숙하지 않은 백삼 1 g으로부터 얻은 추출물의 양은 42.
- 금산에서 재배된 5년근의 인삼을 구증구폭의 원리에 따라서 특수제작된 옹기(Fig. 1)에 넣고 증숙과 건조를 반복하였다. Fig.
- 移植 後 24時間 부터 各 群을 6마리로 配定하였다. 대조군은 생리식염수 0.2 m£ 을, 실험군은 흑삼 및 홍삼 추출물을 생리식염수에 현탁시킨 용액 0.2 做을 20 mg/kg/day의 농도로 마우스 복강에 매일 1회 주사하였다. 시료는 대조군의 tumor volume이 약 2 血가 될 때까지 투여하였出약 2주).
- 메탄올 추출물을 200 觇의 물에 현탁 시킨 후 200 竝의 에테르로 2회 추출하여 비극성 물질을 제거하였다. 물층은 물로 포화된 부탄올 200 戒을 가하여 3회 추출하였으며, 이로부터 얻어진 부탄올 분액을 모아 감압 건조한 잔사를 성분 분석 및 생리활성 측정을 위한 시료로 사용하였다.
- 이동상으로 사용한 A 용매는 CH3CN:H2O:5%acetic acid=15:80:5, B 용매는 CH3CN:H2O=80:20 이었다. 용매는 gradient elution system으로 0분(0%B), 0-10분(30%B), 10-25분 (50%B), 25-40(100%B)z 40-50분 (100%B)z 50-53분(0%B), 53-56분(0%B)으로 조절하였다. 전개 온도는 실온이었고 유속은 이었으며, 검출기는 ELSD-LT (Shimadzu, Japan)를 사용하여 Ginsenoside Rg3를 분석하였다.
- 이와 같은 맥락에서 본 연구팀은 새로운 고부가가치 신기능성 가공인삼을 개발하기 위하여 구증구폭의 원리를 이용하였다. 금산에서 재배된 5년근의 인삼을 구증구폭의 원리에 따라서 특수제작된 옹기(Fig.
- 용매는 gradient elution system으로 0분(0%B), 0-10분(30%B), 10-25분 (50%B), 25-40(100%B)z 40-50분 (100%B)z 50-53분(0%B), 53-56분(0%B)으로 조절하였다. 전개 온도는 실온이었고 유속은 이었으며, 검출기는 ELSD-LT (Shimadzu, Japan)를 사용하여 Ginsenoside Rg3를 분석하였다.
- 흑삼 추출물에 존재하는 인삼사포닌의 성분을 분석하기 위하여 위에서 제조한 흑삼 추출물 20 mg을 메탄올 1 戒에 녹인 후 0.45 例 필터로 여과한 여액을 HPLC 분석을 위한 시료로 사용하였다.
- 흑삼 추출물의 항암효과를 관찰하기 위하여 BDF1 마우스에 Lewis lung carcinoma를 이식한 모델을 이용하여 흑삼의 항암효과 틀 측정하였다. Table 4에서와 같이 대조군의 tumor volume은 2, 394.
대상 데이터
- 금산에서 구입한 5년근의 수삼을 특수 제작한 옹기에서 9 5C에서 증숙한 후 원적외열선이 내장된 건조기에서 60°C에서 건조하는 과정을 9회 반복하여 흑삼을 제조하였다. 건조 혹삼 1 g중에 백삼에는 존재하지 않고 홍삼에는 미량 존재하는 Ginsenoside Rg3가 10.
- 금산에서 생산되어 유통되는 5년근 수삼을 구입한 후, 대전대학교 본초학교실에서 규격에 맞는 것만을 선별한 후, 수삼을스크류 세척기에 넣고 10분간 총 3회 반복해서 세척하였다 이때 세척과정 중에 거피가 되지 않도록 주의하였다.
- 사용한 HPLC 징치는 Shimadzu LC-6AD(Japan) 이었으며, 컬럼은 Shiseido(5 卩m, 250x4.6 mm)를 사용하였다. 이동상으로 사용한 A 용매는 CH3CN:H2O:5%acetic acid=15:80:5, B 용매는 CH3CN:H2O=80:20 이었다.
- 실험에 사용된 동물은 자웅 4주령(18~20g)의 BDF1 계 생쥐로써 SLC, Inc(Japan) 사로부터 수입하여 실험당일까지 고형사료와 물을 充分히 공급하고 실온 22±2°C를 계속 유지하면서, 1 주일 간 실험실 환경에 적응시킨 후 실험에 사용하였다.
- 실험에 사용한 기구는 HPLC(Shimadzu LC-6AD, Japan), ELSD 검출기 (ELSD-LT, Shimadzuz Japan), 컬럼 (Shiseido, 5卩m, 250 x4.6mm, Japan), CO2 incubator(Vision scientific Co., Model VS-9108 MS), clean bench(Vision scientific Co., KMC-14001), centrifuge (Beckman Co., GS-6R), inverted microscope(Nikon Co., Japan), bright microscope(UFX-DX, Nikon), linear acceierator(Varian Co, U.S.A.), ELISA-readerfEmax, U.S.A), rotary vaccum evaporator(Buchi 461), autoclave (Hirayama, Japan), micro-pipet(Gilson? U.S.A), autostill WG25(Japan)z titer plate shaker(Labline Inst., U.S.A), culture flask(Falcon 3024), multiwell plate(96-w이 1, Falcon), conical tube, disposable pipet (5 M 10 M 25 mt Falcon) 및 syringe fiIter(0.22, 0.45 丿加, Falcon), 시약은 RPMI 1640, fetal bovine serum(FBS), dulbecco's phosphate buffered saline(D-PBS), HBSS(Hank's balanced salt solution), glycerol, bromophenol blue, trypsin -EDTA, 3-[4z5-di- methylthiazol-2-yl]-2/5-diphenyltetrazolium-bromide (MTT), pe- nicillin-streptomycin/ sodium hydroxide, trypan blue, phenol red, sodium azide 및 isopropanol 등은 Sigma 製品, ethanob HC1 은 Merck 製品, sodium bicarbonate는 Gibco 製品, 스크류세척기, 옹기증숙기, 냉풍건조기, 원적외선 건조기 등을 각각 使 用하였다
- 6 mm)를 사용하였다. 이동상으로 사용한 A 용매는 CH3CN:H2O:5%acetic acid=15:80:5, B 용매는 CH3CN:H2O=80:20 이었다. 용매는 gradient elution system으로 0분(0%B), 0-10분(30%B), 10-25분 (50%B), 25-40(100%B)z 40-50분 (100%B)z 50-53분(0%B), 53-56분(0%B)으로 조절하였다.
데이터처리
- 실험결과는 unpaired student's T-test를 사용하여 통계처리를 하였으며, P<0.05z P<0.01 및 P<0.001 수준에서 유의성을 검증하였다.
성능/효과
- 하기 위하여 1차적으로 여러 가지 암세포에 대한 in vitro 세포독성을 측정한 결과, 실험에 사용한 MCF-1 (human breast carcinoma cells line), HT-1080(Human human, Caucasian, fibrosarcoma cell line) 및 Hepa lClC7(Murine Hepatoma cell line) 암세포에 대해서 흑삼 추출물은 홍삼 추출물에 비해서 3-5 배정도 강한 세포독성을 나타내었다(Table 3). 또한 in vivo 실험에서 횩삼 추출물은 홍삼 추출물에 비해서 체중감소와 같은 부작용 없이 우수한 항암효과를 나타내었다(Table 4).
- 01). 또한 훙삼 20 mg을 투여한 군의 tumor volume은 1, 833.99±60.96 础로 23.3%의 유의성 있는 항암효과를 나타내었다(PV0.01). 즉, 혹삼의 항암효과는 비교물질로 사용한 기존의 항암제인 taxol에 비해서는 항암효과가 낮았지만, 홍삼에 비해서는 우수한 항암효과를 나타냄을 알 수 있었다 (Table 4).
- 05 mg 함유되어 있었다. 또한 흑삼 추출물은 홍삼 추출물에 비해 in vitro 세포독성 실험에서 여러 가지 암세포에 대해서 강한 세포독성을 나타냈으며, in vivo 실험에서도 우수한 항암효과를 나타내었다.
- 1 mg이었으며 증숙 과정을 거칠수록 추출물의 양이 증가되는 양상을 보였다. 마지막 9차 증숙 된 흑삼의 추출물은 98.9 mg으로써 증숙하지 않은 백삼보다 2배 정도 증가되었다(Table 1). 또한 인삼에 존재하는 여러 가지 사포닌 성분 중 최근에 항암 등 여러 가지 효과珍化)가 밝혀진 Ginsenosid은 Rg3의 함량을 분석한 결과 백삼에는 존재하지 않았지만 1차 증숙한 인삼에서는 0.
- 2에서와 같이 1차 증숙된 인삼은 전형적인 적갈색의 홍삼의 형태를 띠었으며, 2차 증숙을 거쳐 8차의 증숙 과정을 거치면 점점 색깔이 적갈색에서 흑색으로 변하는 것을 알 수 있었다. 마지막으로 9차 증숙과정을 거치면 완전히 외형이 흑색인 흑삼을 제조할 수 있었다.
- 1)에 넣고 증숙과 건조를 반복하였다. 본 연구의 실험조건인 95°C에서의 증숙과 60°C의 건조과정을 반복한 결과 Fig. 2에서와 같이 1차 증숙된 인삼은 전형적인 적갈색의 홍삼의 형태를 띄었다. 또한 2차 증숙을 거쳐 4차의 증숙 과정을 거치면 점점 색깔이 진해지다가 5차 증숙된 인삼은 부분적으로혹색을 나타내기 시작하였다.
- 1 腮이었다. 이에 비해서 1차 증숙 후의 추출물의 양은 62.1 哩이었으며증숙 횟수가 증가할 수록 추출물의 양이 증가되는 경향을 나타내었다. 특히, 마지막 9차 증숙된 흑삼의 경우 추출물의 양은 98.
- 실험결과, 증숙하지 않은 백삼에는 Ginsenoside Rg3가 존재하지 않았다. 이에 비해서 증숙 횟수에 따른 인삼 주출물의 양과 마찬가지로 1차 증숙된 인삼 1 g 중에는 0.22 mg이 존재하였으며 증숙 횟수가 증가할수록 Ginsenoside Rg3의 양이 증가되는 경향을 나타내었다. 특히, 마지막 9차 증숙된 흑삼의 경우 추출물의 양은 10.
- 01). 즉, 혹삼의 항암효과는 비교물질로 사용한 기존의 항암제인 taxol에 비해서는 항암효과가 낮았지만, 홍삼에 비해서는 우수한 항암효과를 나타냄을 알 수 있었다 (Table 4).
- 09 俸/敬 로 나타났다. 즉, 흑삼의 세포독성이 홍삼에 비해서 3-5배 정도 강함을 알 수 있었다(Table 3).
- 32±98 俸/戒로 나타났다. 즉, 흑삼의 세포독성이 홍삼에 비해서 3배 정도 강함을 알 수 있었다. Human human fibrosarcoma cell line인 HT-1080에 대한 흑삼의 IC50 값은 293.
- 효과를 검토.하기 위하여 1차적으로 여러 가지 암세포에 대한 in vitro 세포독성을 측정한 결과, 실험에 사용한 MCF-1 (human breast carcinoma cells line), HT-1080(Human human, Caucasian, fibrosarcoma cell line) 및 Hepa lClC7(Murine Hepatoma cell line) 암세포에 대해서 흑삼 추출물은 홍삼 추출물에 비해서 3-5 배정도 강한 세포독성을 나타내었다(Table 3). 또한 in vivo 실험에서 횩삼 추출물은 홍삼 추출물에 비해서 체중감소와 같은 부작용 없이 우수한 항암효과를 나타내었다(Table 4).
- 한편, 백삼과 증숙 차수에 따른 인삼 추출물의 양을 측정한바, 증숙하지 않은 백삼 1 g으로부터 얻은 추출물의 양은 42.1 mg 이었다, 1차 증숙 후의 추출물의 양은 62.1 mg이었으며 증숙 과정을 거칠수록 추출물의 양이 증가되는 양상을 보였다. 마지막 9차 증숙 된 흑삼의 추출물은 98.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.