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문제 정의
- 따라서 자연히 환자군과 대조군 사이에는 평균 연령에 차이가 있을 수 밖에 없다. 이에 본 연구에서는 대조군의 높은 연령 때문에 과거에 틱장애가 있었으나 이를 망각하거나 부정할 가능성을 최소화하기 위해 선별 과정에서 소아청소년정신과의사가 각 틱증상을 직접 시연하여 해당되는 경우 배제하는 방식을 택했다. 셋째, 본 연구는 틱장애군에서 DRD2 유전자 다형성과 연관되어 있는 것으로 보고된 바 있는 강박장애30)와 주의력결핍 과잉행동장애31) 등과 같은 다른 정신과 질환의 공존을 배제하지 않았다는 점이 제한점으로 생각된다.
- 이와 같이 도파민 D2 수용체 유전자의 TaqI A 제한효소 분절길이 다형성(restriction fragment length polymorphism, 이하 RFLP)의 TS와의 관련성에 대해서는 아직까지 찬반으로 논란이 되고 있다. 이에 본 저자들은 한국인 TS 그리고 CT 환자들과 정상인들을 대상으로 도파민 D2 수용체 유전자의 TaqI A 다형성의 빈도를 조사하여 도파민 D2 수용체 유전자와 틱장애의 유전적 관련을 파악하고자 하였다.
제안 방법
- 자동온도조절기(9000 M Perkin-Elmer, 미국)를 이용하여 증폭하였으며, 95℃에서 첫 5분간 변성을 시킨 후에 95℃에서 30초, 50℃에서 30초, 72℃에서 30초의 3단계를 35주기 반복한 후, 72℃에서 10분간 유지하였다. PCR 산물을 TaqI A 제한효소(New England Biolabs, 미국)로 16시간 반응시킨 후에, 2% agarose gel에서 100bp DNA 분자량 표지자(molecular weight marker, Takara, 일본)과 함께 전기영동하여 절단 양상을 확인하였다. 분석은 환자군과 대조군 여부를 모르는 연구자에 의해 이루어졌는데, 절단된 산물 중에 310bp 한 개의 band로 나타나는 것을 A1 대립유전자로, 그리고 130bp와 180bp 두 개의 band로 나타나는 것을 A2 대립유전자로 분류하였다.
- 그리고 이와 같은 배제 사유가 본인과 부계측과 모계측 4촌 이내의 친인척과 형제, 자매 또는 자녀 중에 있는 경우는 연구에서 배제하였다. 다음으로 틱과 관련하여서는 눈깜빡거림, 찡그리거나 입을 벌림, 고개 끄덕임, 어깨나 배 또는 상체를 으쓱거리거나 꿈틀거림, 팔다리의 반복되는 흔들거림이나 꿈틀거림과 같은 운동 틱과 킁킁거리거나 헛기침, 혀를 차거나 기타 다른 소리를 반복해서 내는 음성 틱을 대상자에게 직접 시연하여 존재 여부를 조사하였다. 그리고 이와 같은 운동 틱과 음성 틱이 본인과 부계측과 모계측 4촌 이내의 친인척과 형제, 자매 또는 자녀 중에 있는 경우를 제외하였다.
- PCR 산물을 TaqI A 제한효소(New England Biolabs, 미국)로 16시간 반응시킨 후에, 2% agarose gel에서 100bp DNA 분자량 표지자(molecular weight marker, Takara, 일본)과 함께 전기영동하여 절단 양상을 확인하였다. 분석은 환자군과 대조군 여부를 모르는 연구자에 의해 이루어졌는데, 절단된 산물 중에 310bp 한 개의 band로 나타나는 것을 A1 대립유전자로, 그리고 130bp와 180bp 두 개의 band로 나타나는 것을 A2 대립유전자로 분류하였다. 유전자형(genotype)은 한 개의 310bp band로 나타나는 경우는 A1A1 동형접합체, 310bp, 180bp, 130bp 세 개의 band로 나타나는 경우는 A1A2 이형접합체, 그리고 180bp, 130bp 두 개의 band로 나타나는 경우를 A2A2 동형접합체로 판정하였다.
- 시발체(5'-CCGTCGACGGCTGGCGAAGTTGTCTA-3'/5'-CCGTCGACCCTTCCTGAGTGTCATCA-3')를 사용하여 Genomic DNA를 중합효소연쇄반응(polymerase chain reaction, 이하 PCR) 시켰다. 사용된 표준 PCR은 100ng의 게놈 DNA가 포함된 25μl의 시료에 10pmol의 시발체, 50mM KCl, 10nM Tris-HCl(pH 8.3), 1.5mM MgCl2, dNTP 각 200μmol과 0.3U Taq DNA Polymerase(Takara, 일본)을 같이 넣어서 시행하였다. 자동온도조절기(9000 M Perkin-Elmer, 미국)를 이용하여 증폭하였으며, 95℃에서 첫 5분간 변성을 시킨 후에 95℃에서 30초, 50℃에서 30초, 72℃에서 30초의 3단계를 35주기 반복한 후, 72℃에서 10분간 유지하였다.
- 이들 중 본 조사의 대조군에 포함될 수 있는지를 조사하기 위해 추가 면담과 채혈에 자발적으로 응하는 사람 총 145명을 대상으로 하였다. 선별은 일대일 면접 방식으로 진행하였는데 우선 환자군과 동일한 배제 질환에 해당되는지를 조사하였고, 두 번째로 틱장애와 유전학적으로 밀접한 연관이 있는 강박장애23)가 과거에 있었거나 현재 있는지를 조사하였다. 그리고 이와 같은 배제 사유가 본인과 부계측과 모계측 4촌 이내의 친인척과 형제, 자매 또는 자녀 중에 있는 경우는 연구에서 배제하였다.
- 환자군과 대조군으로부터 정맥혈 10cc를 EDTA 시험관에 채혈하여 냉장보관하였다가 24시간 이내에 Wizard DNA 추출 키트(Promega, 미국)를 이용하여 DNA를 추출하였다. 시발체(5'-CCGTCGACGGCTGGCGAAGTTGTCTA-3'/5'-CCGTCGACCCTTCCTGAGTGTCATCA-3')를 사용하여 Genomic DNA를 중합효소연쇄반응(polymerase chain reaction, 이하 PCR) 시켰다. 사용된 표준 PCR은 100ng의 게놈 DNA가 포함된 25μl의 시료에 10pmol의 시발체, 50mM KCl, 10nM Tris-HCl(pH 8.
- 검증을 통해 분석하였다. 우선 TS와 CMT 전체 틱장애군과 대조군을 비교하였고, 다음으로 환자군 중에서 TS군만을 별도로 대조군과 비교 분석하였다. 유전자형의 분포를 Hardy-Weinberg 평형의 예측치와 비교하였다.
- 분석은 환자군과 대조군 여부를 모르는 연구자에 의해 이루어졌는데, 절단된 산물 중에 310bp 한 개의 band로 나타나는 것을 A1 대립유전자로, 그리고 130bp와 180bp 두 개의 band로 나타나는 것을 A2 대립유전자로 분류하였다. 유전자형(genotype)은 한 개의 310bp band로 나타나는 경우는 A1A1 동형접합체, 310bp, 180bp, 130bp 세 개의 band로 나타나는 경우는 A1A2 이형접합체, 그리고 180bp, 130bp 두 개의 band로 나타나는 경우를 A2A2 동형접합체로 판정하였다.
- 3U Taq DNA Polymerase(Takara, 일본)을 같이 넣어서 시행하였다. 자동온도조절기(9000 M Perkin-Elmer, 미국)를 이용하여 증폭하였으며, 95℃에서 첫 5분간 변성을 시킨 후에 95℃에서 30초, 50℃에서 30초, 72℃에서 30초의 3단계를 35주기 반복한 후, 72℃에서 10분간 유지하였다. PCR 산물을 TaqI A 제한효소(New England Biolabs, 미국)로 16시간 반응시킨 후에, 2% agarose gel에서 100bp DNA 분자량 표지자(molecular weight marker, Takara, 일본)과 함께 전기영동하여 절단 양상을 확인하였다.
- 환자군과 대조군으로부터 정맥혈 10cc를 EDTA 시험관에 채혈하여 냉장보관하였다가 24시간 이내에 Wizard DNA 추출 키트(Promega, 미국)를 이용하여 DNA를 추출하였다. 시발체(5'-CCGTCGACGGCTGGCGAAGTTGTCTA-3'/5'-CCGTCGACCCTTCCTGAGTGTCATCA-3')를 사용하여 Genomic DNA를 중합효소연쇄반응(polymerase chain reaction, 이하 PCR) 시켰다.
대상 데이터
- 정상 대조군은 같은 기간에 고려대학교 건강의학센터를 방문한 수진자 중에 기초설문조사에서 정신과적 치료 병력이 없는 경우를 대상으로 하였다. 이들 중 본 조사의 대조군에 포함될 수 있는지를 조사하기 위해 추가 면담과 채혈에 자발적으로 응하는 사람 총 145명을 대상으로 하였다. 선별은 일대일 면접 방식으로 진행하였는데 우선 환자군과 동일한 배제 질환에 해당되는지를 조사하였고, 두 번째로 틱장애와 유전학적으로 밀접한 연관이 있는 강박장애23)가 과거에 있었거나 현재 있는지를 조사하였다.
- 정상 대조군은 같은 기간에 고려대학교 건강의학센터를 방문한 수진자 중에 기초설문조사에서 정신과적 치료 병력이 없는 경우를 대상으로 하였다. 이들 중 본 조사의 대조군에 포함될 수 있는지를 조사하기 위해 추가 면담과 채혈에 자발적으로 응하는 사람 총 145명을 대상으로 하였다.
- 환자군은 2002년 3월부터 2004년 2월까지 순천향대학교 부속 부천병원과 가천의과대학 부속 인천길병원 정신과 외래에서 DSM-IV1)에 근거하여 TS와 CMT로 진단된 환자 중에 아동이나 청소년의 경우는 부모가 그리고 성인인 경우는 환자 자신이 본 연구에 자발적으로 참여하는 것에 동의한 경우를 대상으로 하였다. 대상군에서 제외기준은 정신지체와 전반적 발달장애를 함께 보이는 경우로 하였고, 과거력이나 현병력에서 뇌손상이나 경련성 질환을 비롯한 기질적 원인이 있거나 약물이나 알코올 문제가 있는 경우도 제외하였다.
데이터처리
- 우선 TS와 CMT 전체 틱장애군과 대조군을 비교하였고, 다음으로 환자군 중에서 TS군만을 별도로 대조군과 비교 분석하였다. 유전자형의 분포를 Hardy-Weinberg 평형의 예측치와 비교하였다. 통계분석은 SPSS v10.
- 유전자형의 분포를 Hardy-Weinberg 평형의 예측치와 비교하였다. 통계분석은 SPSS v10.0(SPSS Inc., Chicago, IL, 미국)를 이용하였고, 통계적 유의성 수준은 p<0.05으로 하였다.
- 환자군과 대조군 사이의 유전자형과 대립유전자의 발현 빈도는 χ2 검증을 통해 분석하였다. 우선 TS와 CMT 전체 틱장애군과 대조군을 비교하였고, 다음으로 환자군 중에서 TS군만을 별도로 대조군과 비교 분석하였다.
성능/효과
- 13) D2 수용체가 매개하는 신경전달은 사람의 운동을 조절하는데 핵심적인 역할을 하고 또한 보상이나 강화 기전과 관련이 된다. 이러한 도파민 D2 수용체 유전자가 TS와 관련된다는 연구 결과가 Comings 등에 의해 1991년에 처음으로 보고14)되었다.
- TS군만을 별도로 분석하였을 때 A1A1, A1A2, A2A2 유전자형의 빈도가 19.1%, 53.2%, 27.7%로 대조군의 빈도와 차이가 없었고, A1과 A2 대립유전자의 빈도가 45.7%와 54.3%로 역시 대조군의 빈도와 유의한 차이가 없었다.
- 환자 및 대조군에서 개인별로 DRD2 유전자의 TaqI A 다형성이 분석되었다. 그 결과 나타난 유전자형의 분포는 전체 틱장애군(p=0.55), TS군(p=0.54), 그리고 대조군(p=0.61)에서 모두 Hardy-Weinberg 평형을 위배하지 않았다.
- 그밖에 도파민 체계가 발병기전과 관련이 있을 수 있는 정신분열병, 양극성 장애와 주요우울장애가 있는 경우도 대상군에서 제외하였다. 그 결과 총 75명의 틱장애 환자(TS=47명, CMT=28명)가 연구에 포함되었으며, 이들의 평균 연령은 11.9±5.3세(범위=5~41세)였고, 남녀 구성비는 68：7이었다(표 1). 모든 대상은 가계력상 서로 관련이 없었다.
- 본 연구의 결과는 DRD2 TaqI A 다형성이 한국인의 틱장애와는 관련되어 있지 않다는 것을 의미한다. 본 연구를 포함하여 DRD2 유전자와 틱장애의 유전적 관련성을 규명하기 위한 현재까지의 연구 결과들을 종합해 보았을 때 연구에 따라 상반되는 결과가 나타난다는 것을 알 수 있었다. 향후 TS와 CMT를 구분하여 보다 많은 환자와 대조군을 포함한 대단위 연구를 통해 DRD2 유전자와의 관련성을 확인해 보는 과정이 필요하다.
- 본 연구에서는 TS와 CMT 환자가 이 DRD2 유전자 TaqI A 다형성과 관련이 없는 것으로 나타났다. 환자군 중에 보다 심한 형태인 TS만을 별도로 분석하였을 때에도 관련이 없었다.
- 본 연구의 결과는 DRD2 TaqI A 다형성이 한국인의 틱장애와는 관련되어 있지 않다는 것을 의미한다. 본 연구를 포함하여 DRD2 유전자와 틱장애의 유전적 관련성을 규명하기 위한 현재까지의 연구 결과들을 종합해 보았을 때 연구에 따라 상반되는 결과가 나타난다는 것을 알 수 있었다.
- CT와 TS을 구분해서 다양한 신경심리학적 및 정신사회적 장해, 동시 이환 질환과 같은 변인을 비교한 연구6)에서도 두 질환 모두 정상군과는 구분되면서 서로간에는 별 차이가 없이 유사하게 나타났다. 이러한 연구 결과들을 종합했을 때 CT와 TS이 공통된 원인인자를 갖는 서로 다른 표현형이며, TS이 CT의 보다 심한 형태의 아형으로 이해된다.
- 4%와 차이가 없었다(표 2). 전체 틱장애군의 대립유전자의 빈도는 A1과 A2가 각각 45.3%와 54.7%로, 대조군의 38.9%와 61.1% 유의한 차이가 없었다.
- 본 연구의 제한점은 다음과 같다. 첫째, 연구의 표본 크기가 작고, 둘째, 환자군과 대조군 간에 평균 연령의 차이가 있다는 점이다. 우리나라의 임상 실제에서 틱장애로 병원에 내원하는 경우는 대개 소아 혹은 청소년기 때가 많다.
- 환자 및 대조군에서 개인별로 DRD2 유전자의 TaqI A 다형성이 분석되었다. 그 결과 나타난 유전자형의 분포는 전체 틱장애군(p=0.
- 환자군과 대조군의 성별 분포에는 차이가 없었으나, 평균 연령은 환자군에 비해 대조군에서 유의하게 높았다(t=23.0, df=163, p<0.001).
후속연구
- 이에 본 연구에서는 대조군의 높은 연령 때문에 과거에 틱장애가 있었으나 이를 망각하거나 부정할 가능성을 최소화하기 위해 선별 과정에서 소아청소년정신과의사가 각 틱증상을 직접 시연하여 해당되는 경우 배제하는 방식을 택했다. 셋째, 본 연구는 틱장애군에서 DRD2 유전자 다형성과 연관되어 있는 것으로 보고된 바 있는 강박장애30)와 주의력결핍 과잉행동장애31) 등과 같은 다른 정신과 질환의 공존을 배제하지 않았다는 점이 제한점으로 생각된다. 마지막으로 설문조사를 통한 가족력에 대한 조사의 한계점을 들 수 있다.
- 본 연구를 포함하여 DRD2 유전자와 틱장애의 유전적 관련성을 규명하기 위한 현재까지의 연구 결과들을 종합해 보았을 때 연구에 따라 상반되는 결과가 나타난다는 것을 알 수 있었다. 향후 TS와 CMT를 구분하여 보다 많은 환자와 대조군을 포함한 대단위 연구를 통해 DRD2 유전자와의 관련성을 확인해 보는 과정이 필요하다.
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