고지방식이 흰쥐에서 산초나무 Butanol 및 Methylene Chloride 분획의 항혈전 및 항염증 작용 Anti-Thrombogenic and Anti-Inflammatory Effects of Solvent Fractions from Leaves of Zanthoxylum Schinifolium (Sancho Namu) in Rats Fed High Fat Diet원문보기
본 연구에서는 in vitro에서 검색된 산초나무 잎의 용매분획의 항혈전 및 항염증작용을 in vivo에서 확인하고자 고지방식이를 섭취한 흰쥐에게 n-butanol 분획과 methylene chloride분획을 1일 50, 100, 150 mg을 4주간 경구투여 하였다. 혈장 APTT 및 TT는 정상식이군에 비해 고지방식이군에서 유의적으로 감소되었으며, 고지방식이군에 methylene chloride분획 50 mg 이상 공급군은 유의적으로 증가되어 100 mg 이상 공급군은 정상식이군 수준이었다. 다형핵 백혈구 5#-lipoxygenase 활성과 leukotriene $B_4$ 함량이 정상식이군에 비해 고지방식이군에서 증가되었으며, 5#-lipoxygenase 활성은 두 용매 분획을 100 mg 이상 공급한 군들이 모두 감소하였다. 백혈구의 leukotriene $B_4$ 함량은 n-butanol 분획에 의하여 역시 100 mg 이상 공급으로 감소하였으나 methylene chloride 분획에 의하여는 150 mg 공급군에서만 감소하였다. 간 조직 마이크로솜의 cytochrome $P_{450}$ 함량은 정상식이군에 비해 고지방식이군에서 유의적으로 증가되었으며, 두 용매분획의 투여로 감소하는 경향이었으나 butanol 분획 150mg 투여군에서만 유의적으로 감소하였다. 간 조직 $O_2^-$M의 함량과 $H_2O_2$ 함량도 정상식이군에 비해 고지방식이군에서 증가되었으며, butanol 분획 100 mg 이상투여로 $O_2^-$의 함량이 감소하고 methylene chloride분획 100 mg이상에서 $H_2O_2$ 함량이 감소하였고 두 용매 분획을 150 gm 이상 투여하였을 때는 $O_2^-$와 $H_2O_2$함량이 모두 감소하였다. 간 조직 GST 활성과 GSH 함량 및 GSG/GSSG 비율은 정상식이군에 비해 고지방식이군에서 감소되었으며, 두 용매 분획 150 mg 투여로 유의적으로 증가되었으나 GSG/GSSG 비율은 100 mg이상 투여로 증가하였다. 결론적으로, 산초나무 잎의 methylene chloride분획은 고지방식이 흰쥐에서 혈행 장애와 염증 반응을 완화시키고, 간 조직에서의 자유라디칼 생성계를 약화시킬 뿐만 아니라, glutathione계의 환원상태를 유지시킴으로서 신체를 보호하는 효과가 있으며 butanol 분획은 항혈전 효과를 제외한 항염증 및 항산화작용에 의한 신체 보호 작용은 기대된다. 이러한 활성을 이용하면 날로 증가되는 지방섭취량에 의한 만성퇴행성질환을 억제하는데 우수한 기능성식품 소재로써 활용할 수 있다고 생각된다.
본 연구에서는 in vitro에서 검색된 산초나무 잎의 용매분획의 항혈전 및 항염증작용을 in vivo에서 확인하고자 고지방식이를 섭취한 흰쥐에게 n-butanol 분획과 methylene chloride분획을 1일 50, 100, 150 mg을 4주간 경구투여 하였다. 혈장 APTT 및 TT는 정상식이군에 비해 고지방식이군에서 유의적으로 감소되었으며, 고지방식이군에 methylene chloride분획 50 mg 이상 공급군은 유의적으로 증가되어 100 mg 이상 공급군은 정상식이군 수준이었다. 다형핵 백혈구 5#-lipoxygenase 활성과 leukotriene $B_4$ 함량이 정상식이군에 비해 고지방식이군에서 증가되었으며, 5#-lipoxygenase 활성은 두 용매 분획을 100 mg 이상 공급한 군들이 모두 감소하였다. 백혈구의 leukotriene $B_4$ 함량은 n-butanol 분획에 의하여 역시 100 mg 이상 공급으로 감소하였으나 methylene chloride 분획에 의하여는 150 mg 공급군에서만 감소하였다. 간 조직 마이크로솜의 cytochrome $P_{450}$ 함량은 정상식이군에 비해 고지방식이군에서 유의적으로 증가되었으며, 두 용매분획의 투여로 감소하는 경향이었으나 butanol 분획 150mg 투여군에서만 유의적으로 감소하였다. 간 조직 $O_2^-$M의 함량과 $H_2O_2$ 함량도 정상식이군에 비해 고지방식이군에서 증가되었으며, butanol 분획 100 mg 이상투여로 $O_2^-$의 함량이 감소하고 methylene chloride분획 100 mg이상에서 $H_2O_2$ 함량이 감소하였고 두 용매 분획을 150 gm 이상 투여하였을 때는 $O_2^-$와 $H_2O_2$함량이 모두 감소하였다. 간 조직 GST 활성과 GSH 함량 및 GSG/GSSG 비율은 정상식이군에 비해 고지방식이군에서 감소되었으며, 두 용매 분획 150 mg 투여로 유의적으로 증가되었으나 GSG/GSSG 비율은 100 mg이상 투여로 증가하였다. 결론적으로, 산초나무 잎의 methylene chloride분획은 고지방식이 흰쥐에서 혈행 장애와 염증 반응을 완화시키고, 간 조직에서의 자유라디칼 생성계를 약화시킬 뿐만 아니라, glutathione계의 환원상태를 유지시킴으로서 신체를 보호하는 효과가 있으며 butanol 분획은 항혈전 효과를 제외한 항염증 및 항산화작용에 의한 신체 보호 작용은 기대된다. 이러한 활성을 이용하면 날로 증가되는 지방섭취량에 의한 만성퇴행성질환을 억제하는데 우수한 기능성식품 소재로써 활용할 수 있다고 생각된다.
This study was performed to investigate anti-thrombogenic, anti-inflammatory effects of n-BuOH (B) and $CH_2Cl_2$ (MC) fractions extracted from Sancho (Zanthoxylum. schinifolium) leaves in rats fed high fat diets. The experimental animal groups were consisted of eight including one 5% fat...
This study was performed to investigate anti-thrombogenic, anti-inflammatory effects of n-BuOH (B) and $CH_2Cl_2$ (MC) fractions extracted from Sancho (Zanthoxylum. schinifolium) leaves in rats fed high fat diets. The experimental animal groups were consisted of eight including one 5% fat (N) and one 20% fat (H) without the test materials in diets and six H groups of feeding three levels (50, 100 and 150 mg/day) of the B and the MC fractions from Z. schinifolium, respectively. Plasma activated partial thromboplastin times and thrombin times of H group were decreased compared to the N group, but they were increased by feeding the MC fraction of 50 mg and over. Polymorphonuclear leukocyte 5#-lipo-xygenase activities and leukotriene $B_4$ contents of the H group were significantly increased compared to the N group, but they were decreased in the 100 mg and 150 mg of B fraction or the 150 mg of MC fraction fed groups. Liver cytochrome $P_{450}$, $O_2^-$, $H_2O_2$ and GSSG contents were increased by the high fat diet but decreased by feeding the B fraction or the MC fraction, while GSH content and glutathione S-transferase activity lowered by high fat diet were increased by feeding the two solvent fractions. The effects of the solvent fractions were evident at the level of 100 mg/day and over. The present results confirmed that two solvent fractions from the leaves of Z, schinifolium have enhancing effects on anti-thrombosis and anti-inflammation partly by antioxidant action and partly by direct modulation of the respective processeds. In conclusion, the n-BuOH and $CH_2Cl_2$ fractions from leaves of Z, schinifolium can be utilized as the proper ingredients of functional foods for preventing chronic degenerative disease.
This study was performed to investigate anti-thrombogenic, anti-inflammatory effects of n-BuOH (B) and $CH_2Cl_2$ (MC) fractions extracted from Sancho (Zanthoxylum. schinifolium) leaves in rats fed high fat diets. The experimental animal groups were consisted of eight including one 5% fat (N) and one 20% fat (H) without the test materials in diets and six H groups of feeding three levels (50, 100 and 150 mg/day) of the B and the MC fractions from Z. schinifolium, respectively. Plasma activated partial thromboplastin times and thrombin times of H group were decreased compared to the N group, but they were increased by feeding the MC fraction of 50 mg and over. Polymorphonuclear leukocyte 5#-lipo-xygenase activities and leukotriene $B_4$ contents of the H group were significantly increased compared to the N group, but they were decreased in the 100 mg and 150 mg of B fraction or the 150 mg of MC fraction fed groups. Liver cytochrome $P_{450}$, $O_2^-$, $H_2O_2$ and GSSG contents were increased by the high fat diet but decreased by feeding the B fraction or the MC fraction, while GSH content and glutathione S-transferase activity lowered by high fat diet were increased by feeding the two solvent fractions. The effects of the solvent fractions were evident at the level of 100 mg/day and over. The present results confirmed that two solvent fractions from the leaves of Z, schinifolium have enhancing effects on anti-thrombosis and anti-inflammation partly by antioxidant action and partly by direct modulation of the respective processeds. In conclusion, the n-BuOH and $CH_2Cl_2$ fractions from leaves of Z, schinifolium can be utilized as the proper ingredients of functional foods for preventing chronic degenerative disease.
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문제 정의
있다고 생각한다. 따라서 본 연구에서는 산화스트레스와 연관되어 전보에는 주로 항산화 효소 활성을 보고하였지만 이번에는 산화스트레스를 유발하는 시스템인 cytochrome P祝과 산화상태의 지표가 되는 이utathine계를 조사하였다. 고지방식이는 식후의 혈중 지방함량을 높이며 (postprandial hypertriglyceridemia) 이는 산화스트레스로 작용한다고 알려졌으나?。2D 이 작용이 체내에서 과산화물을 생성하는 cytb chrome 已即계와의 관련성에 대하여 조사된 바가 적다.
산초나무 잎 용매 분획의 항산화 활성도는 in vitro 시험방법에 따라서는 분획에 따른 차이가 있었으나 in 讨1, 。에서는 두 분획 모두 효과가 있었음◎을 보고한 바 있다. 본 논문에서는 산초나무 잎의 in vivo 항혈전 및 항염증 작용을 조사하였기에 이에 보고하고자 한다.
제안 방법
5' -Lipoxygenase는 Min 등의 방법'"을 이용하여 즉정하였다 즉, PMNL pellet를 incubation buffer (50 mM phosphate buffer + 1 mM EDTA + 0.1% gelatin) 에 현탁 (1.0 x 107 cell/mL) 시킨 후 hemogenizer를 이용하여 homogenate를 만들고 원심분리 (10, 000 x g, 10 min, 4 ℃) 하여 얻은 상층액은 5'-lipoxygenase 활성 측정 시료로 하였다. 효소시료 1.
따라서 이 양을 중심으로 하여 50 mg과 150 mg 투여군을 결정하였다. 각 군당 10마리씩 사육하였고 산초나무 잎의 butanol 및 methylene chloride 분획은 적당한 농도로 증류수에 분산시켜 상기 용량에 맞게 주사기 (18G-3"curved feeding needle, Braintree Scientific Inc., MA, USA)로 매일 4주간 경구 투여하였다. H 군에는 시료와 같은 양의 증류수 (약 0.
, MA, USA)로 매일 4주간 경구 투여하였다. H 군에는 시료와 같은 양의 증류수 (약 0.2 ml)를 투여하였다 실험 기간 동안 동물의 체중증가량은 3일에 한 번씩 측정하였고 식이섭취량은 매일 측정하였다.
채취한 혈액은 3, 000 X 时에서 10분간 원심 분리하여 혈장을 얻었다. 간 조직은 혈액 채취 후 즉시 적출하여 가아제로 피를 제거한 뒤 무게를 측정하였다. 각 간엽에서 일정량의 간 조직을 취하여 일부는 즉석 동결하려 보관하였고 일부는 10배의 280 mM sucrose/10 mM potassium chloride (KCD/10 mM HEPES 용액을 첨가하여.
5%을 기준으로 할 경우 200 g 정도의 체중을 가진 동물이 1일 섭취할 양이 100 mg으로 산정되었다. 따라서 이 양을 중심으로 하여 50 mg과 150 mg 투여군을 결정하였다. 각 군당 10마리씩 사육하였고 산초나무 잎의 butanol 및 methylene chloride 분획은 적당한 농도로 증류수에 분산시켜 상기 용량에 맞게 주사기 (18G-3"curved feeding needle, Braintree Scientific Inc.
본 연구에서는 in ■防ro에서 검색된 산초나무 잎의 용매 분획의 항혈전 및 항염증작용을 in 凭vo에서 확인하고자 고지방식이를 섭취한 흰쥐에게 n-butanol 분획과 methylene chloride 분획을 1일 50, 100, 150 mg을 4주간 경구투여하였다. 혈장 APTT 및 TT는 정상식이군에 비해 고지방식이 군에서 유의적으로 감소되었으며 , 고지방식 이군에 methylene chloride분획 50 mg 이상 공급군은 유의적으로 증가되어 100 mg 이상 공급군은 정상식이군 수준이었다.
본 연구에서는 산초나무 잎의 용매추출물의 항염증, 항혈전 효과를 in 에서 보다 명확히 볼 수 있도록 고지방식이로서 동물을 사육하였다. 고지방식이는 체내의 고지혈증을 유발하고 산화스트레스를 높이며2皿 체내 염증 작용2F과 혈전 생성理을 항진시키는 것으로 보고되었다.
사육 종료 후 실험동물을 12시간 절식 시킨 다음 가벼운 ether 마취 하에서 복부 대동맥으로부터 혈액을 heparin으로 처리한 주사기로 채취하고 간조직을 절제하였다. 채취한 혈액은 3, 000 X 时에서 10분간 원심 분리하여 혈장을 얻었다.
즉 간조직 약 1 g을 1 M perchloric acid 3 ml止를 가하여 산추출물을 얻고 이 산 추출액을 다시 4 M KQO로 중화하여 분석시료로 사용하였다. 산화형 이utathione (GSSG) 은 glutathione reductase 반응을 이용하였으며, 이 반응에서 소모된 NADPH양을 340 nm에서 측정하여 정량 하였으며, 환원형 이utathione (GSH) 은 glyoxalase 반응을 이용하여 생성된 S-lactosyl-GSH를 240nm에서 측정하여 정량 하였다.
4) 6 mL 로 희석하여 단백질 함량5] 1 mg/mL가 되게 한 다음 3~5 분 후 sodium dithionate를 30 mg가하여, 분광광도계의 흡광도를 영점 조정하였다. 영점 조정 후 450 nm와 490 nm 에서 흡광도 차이를 측정하여 함량을 계산하였다. 이때 분자 흡광계수는 91 로 하였다.
하여 Omura와 Sato"> 의 방법으로 측정하였다. 즉, microsome 용액 1 mL를 0.1 mM phosphate (pH 7.4) 6 mL 로 희석하여 단백질 함량5] 1 mg/mL가 되게 한 다음 3~5 분 후 sodium dithionate를 30 mg가하여, 분광광도계의 흡광도를 영점 조정하였다. 영점 조정 후 450 nm와 490 nm 에서 흡광도 차이를 측정하여 함량을 계산하였다.
6)로 정량하였고 internal standard 로 prostaglandin Br을 사용하였다. 채취한 PMNL 내에 존재하는 leukotriene B4 함량은 Amersham RIA Kit (TRK 940) 를 사용하여 liquid scintillation counter (LSC) 를 이용하여 상층액의 동위원소 활성을 측정하였다.
혈액응고 판정의 지표가 되는 APTT 및 TT의 측정은 각각의 kit 시약 (Sigma Diagnostics, No. A1801/A1926 과 No. A8713) 을 사용하였으며 Amelung Kcia micro (Sigma Diagnostics, Germany) 를 이용하여 응고 시간을 측정하였다.
대상 데이터
산초나무의 잎은 2004년 7월 경북 경산시 용성면 동아임장에서 구입하여, 동결 건조 후 분쇄한 후 Fig. 1에 나타난 바와 같은 방법으로 추출하고 실험에 사용할 용매분획을 제조하였다. 건조된 산초나무 잎 분말 3 kg을 상온에서 80% 메탄올 (15 L X 3회, 1회에 72시간씩 추출)로 추출한 후 rotary vacuum evaporator로 농축하여 초기 메탄올 추출물 약 650 g을 얻었다.
데이터처리
본 연구의 실험 결과는 각 군의 평균과 표준오차를 계산하였고 군간의 차이를 분산분석법 (one-way analysis of variance) 으로 조사하고 Tukey's test에 의하여 차이의 유의성을 p< 0.05 수준에서 검증하였다.
이론/모형
GST 활성도 측정은 Habig")의 방법에 따라 Lchloro- 2, 4-dinitrobenzene (DCNB) 와 GSH을 기질로 하여 25℃ 에서 20분간 반응하는 동안에 생성된 GSH-DCNB conju- gate를 340 nm에서 측정하였다. 효소 시료인 cytosol 0.
이 반응액을 37℃에서 2분간 반응시키면서 550 nm 에서 흡광도의 변화를 측정하여。2「의 함량을 산정하였다。2「 함량은 1 mg의 단백질이 1분간 생성시킨 reduced cytochrome c의 양을 nmole로 나타내었다. H2O2 함량은 Gay 등顷 의 방법에 따라, xylenol orange를 이용하여 560 nm에서의 H2O2 생성 정도를 흡광도 증가로 측정하였다. Mitochondria (100-200 "g protein) FOX 용액 (0.
각 간엽에서 일정량의 간 조직을 취하여 일부는 즉석 동결하려 보관하였고 일부는 10배의 280 mM sucrose/10 mM potassium chloride (KCD/10 mM HEPES 용액을 첨가하여. Potter-Elvejhem homo- genizer를 사용하여 마쇄하였다. 간 마쇄액을 3, 000 x g에서 10분간 원심분리한 후 상층액을 9, 000 rpm에서 15분간 원심분리하여 mitochondria 침전을 얻었고 상층액을 다시 105, 000 X g에서 1시간 원심분리하여 microsome 침전과 cytosol 상등액 시료를 얻었다 m 모든 실험 조건은 4 ℃를 유지하면서 행하였으며, 실험에 즉시 사용하지 않은 시료는 소량의 0.
" data-ocr-fix="">나타내었다. 각 효소의 단백질 정량은 Lowry 법'18에 따라 표준품으로 bovine serum albumin을 사용하여 측정하였다.
간조직 Q- 함량 측정은 Azzi 등惭의 방법에 따라 50 mM potassium phosphate buffer (pH 7.5) 에 기질인 90 mM succinate, 150 mM KC1, 30 mM KCN, 0.3 mM cytochrome c 및 분석시료인 미토콘드리아 현탁액 (1 mg 단백질WL) 200 “L 첨가하여 최종 반응액이 3 mL이 되게 하였다. 이 반응액을 37℃에서 2분간 반응시키면서 550 nm 에서 흡광도의 변화를 측정하여。2「의 함량을 산정하였다。2「 함량은 1 mg의 단백질이 1분간 생성시킨 reduced cytochrome c의 양을 nmole로 나타내었다.
간조직 cytochrome 已如의 함량 측정은 microsome을 시료로 하여 Omura와 Sato"> 의 방법으로 측정하였다. 즉, microsome 용액 1 mL를 0.
간조직 중의 glutathione 함량의 측정은 Bernt와 Berg- meyer의 방법戚에 따라서 측정하였다. 즉 간조직 약 1 g을 1 M perchloric acid 3 ml止를 가하여 산추출물을 얻고 이 산 추출액을 다시 4 M KQO로 중화하여 분석시료로 사용하였다.
성능/효과
백혈구의 leukotriene B4 함량은 n-butanol 분획에 의하여 역시 100 mg 이상 공급으로 감소하였으나 methylene chloride 분획에 의하여는 150 mg 공급 군에서만 감소하였다. 간 조직 마이크로솜의 cytochrome P硕 함량은 정상식이군에 비해 고지방식이군에서 유의적으로 증가되었으며, 두 용매분획의 투여로 감소하}는 경향이었으나 butanol 분획 150 mg 투여군에서만 유의적으로 감소하였다 간 조직。「의 함량과 压。2 함량도 정상식이군에 비해 고지방식이군에서 증가되었으며, butanol 분획 100 mg 이상 투여로 Q「의 함량이 감소하고 methylene chloride 분획 100 mg 이상에서 HA 함량이 감소하였고 두 용매 분획을 150 gm 이상 투여하였을 때는 Q「와 H2O2 함량이 모두 감소하였다. 간 조직 GST 활성과 GSH 함량 및 GSG/ GSSG 비율은 정상식이군에 비해 고지방식이군에서 감소되었으며, 두 용매 분획 150 mg 투여로 유의적으로 증가되었으나 GSG/GSSG 비율은 100 mg 이상 투여로 증가하였다.
2와 같다. APT는 정상식이 군은 (N) 76.5 ± 3.6초 고지방식이군 (H) 은 53.5 ± 2.5 초로 정상식이군에 비해 고지방식이군에서 30% 정도 감소하여 유의적 (p<0.05)인 차이를 나타내었고, 고지방식이에 butanol 분획을 공급한 군들 (HBL, HBM, HBH) 에서는 변화가 없었으나 methylene chloride분획 공급군들에서는 유의적으로, 농도 의존적으로 증가하는 경향을 보였다. 즉, HMCL, HMCM 및 HMCHe H군에 비해 각각 25%, 28% 및 32% 씩 증가하여 HMCM와 HMCH군은 정싱식이군 수준이었다.
Leukotriene B4 함량도 이와 유사한 경향으로 정상식이군 (N) 에 비해 고지방식이군 (H)에서 유의적으로 증가되었으며 산초잎의 두 용매 분획의 공급에 의해 농도 의존적으로 감소하는 경향을 나타내었다. Butanol 분획 100 mg 이상 공급군 (HBM 및 HBH) 과 methylene chloride분획 150 mg 공급군 (HMCH) 은 고지방식이군에 비해 각각 24%, 39% 및 33%씩 감소하여 유의적인 차이를 나타내었으며, 두 분획을 가장 높은 농도인 150 mg을 공급 시에는 정상식이군 수준이었다.
고지방식이군에 butanol 및 methylene chloride분획의 공급에 의해 농도 의존적으로 감소하는 경향을 나타내었으며, butanol 및 methylene chloride 분획 100 mg 이상 공급군 (HBM, HBH, HMCM 및 HMCH)은 고지방식이군에 비해 각각 15%, 28%, 11% 및 19%씩 감소하여 유의적인 차이를 나타내었으며, butanol 및 methylene chloride분획을 가장 높은 농도인 150 mg을 공급한 군 (HBH 및 HMCH) 은 정상식이군 수준이었다. Leukotriene B4 함량도 이와 유사한 경향으로 정상식이군 (N) 에 비해 고지방식이군 (H)에서 유의적으로 증가되었으며 산초잎의 두 용매 분획의 공급에 의해 농도 의존적으로 감소하는 경향을 나타내었다. Butanol 분획 100 mg 이상 공급군 (HBM 및 HBH) 과 methylene chloride분획 150 mg 공급군 (HMCH) 은 고지방식이군에 비해 각각 24%, 39% 및 33%씩 감소하여 유의적인 차이를 나타내었으며, 두 분획을 가장 높은 농도인 150 mg을 공급 시에는 정상식이군 수준이었다.
간 조직 마이크로솜의 cytochrome P硕 함량은 정상식이군에 비해 고지방식이군에서 유의적으로 증가되었으며, 두 용매분획의 투여로 감소하}는 경향이었으나 butanol 분획 150 mg 투여군에서만 유의적으로 감소하였다 간 조직。「의 함량과 压。2 함량도 정상식이군에 비해 고지방식이군에서 증가되었으며, butanol 분획 100 mg 이상 투여로 Q「의 함량이 감소하고 methylene chloride 분획 100 mg 이상에서 HA 함량이 감소하였고 두 용매 분획을 150 gm 이상 투여하였을 때는 Q「와 H2O2 함량이 모두 감소하였다. 간 조직 GST 활성과 GSH 함량 및 GSG/ GSSG 비율은 정상식이군에 비해 고지방식이군에서 감소되었으며, 두 용매 분획 150 mg 투여로 유의적으로 증가되었으나 GSG/GSSG 비율은 100 mg 이상 투여로 증가하였다.
백혈구의 leukotriene B4 함량은 n-butanol 분획에 의하여 역시 100 mg 이상 공급으로 감소하였으나 methylene chloride 분획에 의하여는 150 mg 공급 군에서만 감소하였다. 간 조직 마이크로솜의 cytochrome P硕 함량은 정상식이군에 비해 고지방식이군에서 유의적으로 증가되었으며, 두 용매분획의 투여로 감소하}는 경향이었으나 butanol 분획 150 mg 투여군에서만 유의적으로 감소하였다 간 조직。「의 함량과 压。2 함량도 정상식이군에 비해 고지방식이군에서 증가되었으며, butanol 분획 100 mg 이상 투여로 Q「의 함량이 감소하고 methylene chloride 분획 100 mg 이상에서 HA 함량이 감소하였고 두 용매 분획을 150 gm 이상 투여하였을 때는 Q「와 H2O2 함량이 모두 감소하였다. 간 조직 GST 활성과 GSH 함량 및 GSG/ GSSG 비율은 정상식이군에 비해 고지방식이군에서 감소되었으며, 두 용매 분획 150 mg 투여로 유의적으로 증가되었으나 GSG/GSSG 비율은 100 mg 이상 투여로 증가하였다.
결론적으로, 산초나무 잎의 methylene chloride 분획은 고지방식이 흰쥐에서 혈행 장애와 염증 반응을 완화시키고, 간 조직에서의 자유라디칼 생성계를 약화시킬 뿐만 아니라, 이u- tathione계의 환원상태를 유지시킴으로서 신체를 보호하는 효과가 있으며 butanol 분획은 항혈전 효과를 제외한 항염증 및 항산화작용에 의한 신체 보호 작용은 기대된다. 이러한 활성을 이용하면 날로 증가되는 지방섭취량에 의한 만성 퇴행성질환을 억제하는데 우수한 기능성식품 소재로써 활용할 수 있다고 생각된다.
78 ng/107 cells/min로 정상식이군에 비해 고지방식이 군에서 42% 정도 증가하였다. 고지방식이군에 butanol 및 methylene chloride분획의 공급에 의해 농도 의존적으로 감소하는 경향을 나타내었으며, butanol 및 methylene chloride 분획 100 mg 이상 공급군 (HBM, HBH, HMCM 및 HMCH)은 고지방식이군에 비해 각각 15%, 28%, 11% 및 19%씩 감소하여 유의적인 차이를 나타내었으며, butanol 및 methylene chloride분획을 가장 높은 농도인 150 mg을 공급한 군 (HBH 및 HMCH) 은 정상식이군 수준이었다. Leukotriene B4 함량도 이와 유사한 경향으로 정상식이군 (N) 에 비해 고지방식이군 (H)에서 유의적으로 증가되었으며 산초잎의 두 용매 분획의 공급에 의해 농도 의존적으로 감소하는 경향을 나타내었다.
혈장 APTT 및 TT는 정상식이군에 비해 고지방식이 군에서 유의적으로 감소되었으며 , 고지방식 이군에 methylene chloride분획 50 mg 이상 공급군은 유의적으로 증가되어 100 mg 이상 공급군은 정상식이군 수준이었다. 다형핵 백혈구 5* -lipoxygenase 활성과 leukotriene B4 함량이 정상식이군에 비해 고지방식이군에서 증가되었으며, 5' - lipoxygenase 활성은 두 용매 분획을 100 mg 이상 공급한 군들이 모두 감소하였다. 백혈구의 leukotriene B4 함량은 n-butanol 분획에 의하여 역시 100 mg 이상 공급으로 감소하였으나 methylene chloride 분획에 의하여는 150 mg 공급 군에서만 감소하였다.
">본 실험 결과도 이러한 식물 유래 성분효과와 유사하였다. 따라서 본 연구의 실험물질인 산초나무잎의 butanol 및 methylene chloride분획은 고지방식이 상태에서 cytochrome P此의 함량을 감소시킴으로써 체내 산화스트레스를 억제시키는 효과가 있다고 생각된다. GSH는체내에서 산화스트레스에 대처하는 대표적인 생리적 항산화제이며 GST는 GSH 생성 및 해독작용에 중요한 효소다.
5~1%를 참고하였다. 본 연구에서는 산초잎 추출물을 경구투여를 하였으므로 식이 내 함량이 0.5%을 기준으로 할 경우 200 g 정도의 체중을 가진 동물이 1일 섭취할 양이 100 mg으로 산정되었다. 따라서 이 양을 중심으로 하여 50 mg과 150 mg 투여군을 결정하였다.
고지방식이는 체내의 고지혈증을 유발하고 산화스트레스를 높이며2皿 체내 염증 작용2F과 혈전 생성理을 항진시키는 것으로 보고되었다. 본 연구에서도 정상식이의 지방함량을 5%에서 20%로 증가시켰을 때 혈전 생성 속도가 빨라지고 염증관련 효소 활성이 증가되고 leukotriene 가 증가하므로서 염증작용도 항진될 것임을 보여 주었다. 산초나무 잎의 butanol 분획 및 methylene chloride 분획을 경구로 투여하여 체내에 흡수되었을 때 이 과정을 억제할 수 있었다는 점은 in 祈〃。에서 검색한 효능을 확인 시켜 주었다는데 본 연구 결과에 큰 의의가 있다.
반면 methylene chloride 투여군에서는 150 mg을 투여한 HMCH군에서만 유의적인 증가를 볼 수 있었다. 산화형 glutathione (GSSG) 의 변화는 대체로 GSH의 결과에 반대였으며 종합적으로 GSH/ GSSG의 비율에서는 두 용매 분획의 투여 용량별 효과는 같았다.
실험동물에게 체중 증가는 전보에서 보고된 바와 같이 정상식이군 (N) 에 비해 고지방식이군 (FD 에서 34% 정도 증가하였다. 산초나무 잎의 butanol 및 methylene chloride 분획 공급 군에서는 이 증체량이 감소하는 경향이 보였다.
4와 같다. 정상식이군은 (N) 0.11 ± 0.04 nmol/ mg protein, 고지방식이군 (H)은 0.25 ± 0.04 nmol/mg protein으로 정상식이군에 비해 고지방식이군에서 127% 정도 증가하였고, 고지방식이군에 butanol 및 methylene chlo- ride분획의 공급에 의해 농도 의존적으로 감소하는 경향을 나타내었다. 그러나 유의적인 감소는 150 mg의 butanol 분획 공급 군 (HBH) 에서만 볼 수 있었다.
6과 같다. 정상식이군은 (N) 153.87 ± 9.40 nmol DNCB/mg protein/min, 고지방식이군 (H) 은 95.29 ±12.32 nmol DNCB/mg protein/min로 정상식이 군에 비해 고지방식이군에서 38% 정도 감소하여 유의적 (p < 0.05) 인 차이를 나타내었다、고지방식이군에 butanol 및 me-thylene chloride분획의 공급량의 증가에 따라 효소활성이 중가하는 경향을 나타났으나 butanol 및 methylene chloride 분획을 고용량인 150 mg (HBH 및 HMCH) 투여한 경우에만 고지방식이군에 비해 각각 30% 및 34%씩 유의적으로 증가하였다. 한편 간조직 glutathione 함량은 Table 2에 나타난 바와 같이 고지방식이 (H) 로 감소한 환원형 glutathione (GSH)가 butanol 용매 분획을 50 mg으로 저용량 투여했을 때부터 (HBL) 유의적으로 증가하였고 EBM, HBH군에서는정상군 (N) 의 80% 정도로 증가하였다.
05)인 차이를 나타내었고, 고지방식이에 butanol 분획을 공급한 군들 (HBL, HBM, HBH) 에서는 변화가 없었으나 methylene chloride분획 공급군들에서는 유의적으로, 농도 의존적으로 증가하는 경향을 보였다. 즉, HMCL, HMCM 및 HMCHe H군에 비해 각각 25%, 28% 및 32% 씩 증가하여 HMCM와 HMCH군은 정싱식이군 수준이었다. TT도 이와 유사한 경향으로 정상식이군은 (N) 67.
05) 인 차이를 나타내었다、고지방식이군에 butanol 및 me-thylene chloride분획의 공급량의 증가에 따라 효소활성이 중가하는 경향을 나타났으나 butanol 및 methylene chloride 분획을 고용량인 150 mg (HBH 및 HMCH) 투여한 경우에만 고지방식이군에 비해 각각 30% 및 34%씩 유의적으로 증가하였다. 한편 간조직 glutathione 함량은 Table 2에 나타난 바와 같이 고지방식이 (H) 로 감소한 환원형 glutathione (GSH)가 butanol 용매 분획을 50 mg으로 저용량 투여했을 때부터 (HBL) 유의적으로 증가하였고 EBM, HBH군에서는정상군 (N) 의 80% 정도로 증가하였다. 반면 methylene chloride 투여군에서는 150 mg을 투여한 HMCH군에서만 유의적인 증가를 볼 수 있었다.
혈장 APTT 및 TT는 정상식이군에 비해 고지방식이 군에서 유의적으로 감소되었으며 , 고지방식 이군에 methylene chloride분획 50 mg 이상 공급군은 유의적으로 증가되어 100 mg 이상 공급군은 정상식이군 수준이었다. 다형핵 백혈구 5* -lipoxygenase 활성과 leukotriene B4 함량이 정상식이군에 비해 고지방식이군에서 증가되었으며, 5' - lipoxygenase 활성은 두 용매 분획을 100 mg 이상 공급한 군들이 모두 감소하였다.
후속연구
따라서 항혈전 효과는 다양한 성분에 의하여 여러 기전에 의하여 나타날 수 있다고 보여 진다. 산초의 용매추출 물의 혈전 생성 억제 작용은 산초 잎 추출물에서 보여 준 혈청 지질상태 개선 효과‘a와 협력하여 동맥경화 예방에 우수한 효능을 나타낼 것이라고 생각한다.
항산화작용에 의한 신체 보호 작용은 기대된다. 이러한 활성을 이용하면 날로 증가되는 지방섭취량에 의한 만성 퇴행성질환을 억제하는데 우수한 기능성식품 소재로써 활용할 수 있다고 생각된다.
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