To determine 8 anti-impotence drug/drug-like compounds such as sildenafil, vardenafil, tadalafil, homosildenafil, hydroxyhomosildenafil, aminotadalafil, pseudovardenafil and hongdenafil in foods, simultaneously, high performance liquid chromatography(HPLC) and liquid chromatography-mass spectrometry...
To determine 8 anti-impotence drug/drug-like compounds such as sildenafil, vardenafil, tadalafil, homosildenafil, hydroxyhomosildenafil, aminotadalafil, pseudovardenafil and hongdenafil in foods, simultaneously, high performance liquid chromatography(HPLC) and liquid chromatography-mass spectrometry (LC/MS) were used. The HPLC/UV analysis was performed on a column of capcellpak $C_{18}$ with 0.1% sodium-1-hexansulfonate in 0.2M ammonium formate/acetonitrile as a mobile phase. Mass spectra of the compounds by LC/MS were investigated with SCAN mode(Mass range and Fragment voltage) and SIM(Selected Ion Monitoring) mode (Ion target and Fragment voltage). The results follow as; 1. The HPLC/UV analysis was detected from 5 out of 63 samples. The content of sildenafil was in the range of 32.80 ppm ${\sim}$ 60.13 ppm from 4 out of 5 samples. The contents of sildenafil, vardenafil, homosildenafil were in the range 47.14 ppm from 1 out of 5 samples. 2. The conformed result of LC/MS was equal of detected from 5 out of 63 samples in HPLC/UV analysis. An easily available, simultaneous determination of 8 standards in adulterated health related foods was established by using a combination of LC/MS methods.
To determine 8 anti-impotence drug/drug-like compounds such as sildenafil, vardenafil, tadalafil, homosildenafil, hydroxyhomosildenafil, aminotadalafil, pseudovardenafil and hongdenafil in foods, simultaneously, high performance liquid chromatography(HPLC) and liquid chromatography-mass spectrometry (LC/MS) were used. The HPLC/UV analysis was performed on a column of capcellpak $C_{18}$ with 0.1% sodium-1-hexansulfonate in 0.2M ammonium formate/acetonitrile as a mobile phase. Mass spectra of the compounds by LC/MS were investigated with SCAN mode(Mass range and Fragment voltage) and SIM(Selected Ion Monitoring) mode (Ion target and Fragment voltage). The results follow as; 1. The HPLC/UV analysis was detected from 5 out of 63 samples. The content of sildenafil was in the range of 32.80 ppm ${\sim}$ 60.13 ppm from 4 out of 5 samples. The contents of sildenafil, vardenafil, homosildenafil were in the range 47.14 ppm from 1 out of 5 samples. 2. The conformed result of LC/MS was equal of detected from 5 out of 63 samples in HPLC/UV analysis. An easily available, simultaneous determination of 8 standards in adulterated health related foods was established by using a combination of LC/MS methods.
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문제 정의
현재 식품 규격에는 호모실데나필, 하이드록시 호모실데 나필, 홍데 나필, 아미 노타다라필, 슈도 바데나필 5종을 관리하고 있으나, 본조사연구에서는 식품의 안전성 및 건강성을 확보하기 위하여 발기부전치료제 3종과 발기부전치료제 유사물질 5종 등 총 8종에 대해 기존 검사법인 HPLC/UV외에 LC/MS를 사용하여 분석을 실시하였다.
제안 방법
HPLC/UV분석은 머무름시간(Reten -tion time) 및 피이크면적법에 의해 정량을 하였고, 확인 검사로 LC/ MS의 경우는 SCAN에서 Mass Range를 100 ~ 510, Fragment volt -age를 300V으로 정한 후, 여기서 깨지는 Ion target을 확인한 후, SIM(Selected Ion Monitoring) 과정에서 SIM Ion 및 Fragment voltage를 지정한 후 분석을 통해 표준물질 8종 및 검출된 5건의 시료에 대한 확인 검사가 이루어졌다.
HPLC/UV에서 검출된 5건의 확인 검사를 위해 LC/MS에서 2개의 이동상 물질로 분리 및 분석을 하였다. LC/MS는 시료처리 시간과 분석 시간이 짧고, 분자량을 근거로 분석물질을 확인하는 것이 매우 선택성이 높기 때문에 신속하고 정확하게 분석물질의 분자량을 측정할 수 있다.
LC/MS 의 정량 분석법은 SCAN 에서 Mass Range를 100~510, Fragment Voltage를 300V 로 실험을 진행한 후 Ion target을 결정하였다. SIM Ione 홍데나필 467.
검출된농도는 최저 32.80 ppm에서 최고 60.13 ppm로 분석되었고, 발기부전치료제 및 유사물질이 검출된 시료는 LC/ MS를 통해서확인검사를 실시하였다(Table 3).
본 연구는 2005년 1월~12월까지 유통중인 식품 63건을 대상으로 발기부전치료제 및 유사물질 8종에 대해 HPLC/UV 및 LC/MS로 분석하였다.
본 조사연구는 시중에 유통되는 식품 63 건을 대상으로 발기부전 유사물질이 식품에첨가되어 유통되는 것을 차단하고 식품의 안전성 확보를 하기 위해 HPLC/UV 및 LC/ MS를 이용하여 발기부전치료제 및 유사물질 8종(타다라필, 바데나필, 실데나필, 홍데나필 , 아미노타다라필, 하이드록시 호모실데 나필, 호모실데나필, 슈도바데나필)에 대해 검사를 수행하였으며 그 분석 결과는 다음과같다.
시료의 전처리는 직접 법과 추출법으로 동시에 수행하였다。직접법은 시료를 일정량(1회 복용량)을 메탄올에 녹여 초음파로 추출하여 원심분리 후 멤브레인 필터(0.2 网)로 여과하였다.
회수율을 측정하기 위해 식품 63건 중발기부전유사물질이 들어 있지 않은 5건(음료류 2건, 건강기능식품 2건 및 다류 1건) 에 표준물질 8종을 일정량 첨가하여 시료로조제한 후 실험을 수행하였다(Table 2).
대상 데이터
HPLC/UV 및 LC/MS (Agilent 1100 series, USAX 사용하였으며, Ci8 칼럼 (Shiseido Capcellpak Cat. No. 90104, Japan)은 길이 4.6mm I.D. x 250 mm, 5 ㎛로 사용하였다.
2. 대상 : 시중에서 유통되는 다류 8 건, 음료류 8건, 인삼제품 류 16건, 기타식품 4건, 규격 외 일반 가공식품 5건, 건강기능식품 15건, Unk-nown 7건 등 총 63건(Fig. 1).
칼럼은 Cis (4.6mm I.D. x 250 mm , 5㎛)을 사용하였으며, 이동상으로는 0.1% sodium - 1 - hexane sulfonate# 함유하는 0.2M Ammo -nium formate 과 Acetonitrile의 혼합용액을 사용하였다. 시료는 5ml를 주입하였고, 유속은 1.
표준품은 식품의약품안전청에서 실데나필, 바데나필, 타다라필, 호모 실데나필, 홍데나필, 하이드록시호모실데나필, 아미노타다라필, 슈도바데나필 8종을 분양받아 사용하였으며, 시약은 HPLC용 및 특급시약 (Wako, Japan)을 사용하였다.
성능/효과
표준물질 8종에 대한 HPLCAJV 동시다 성분 분석 결과 홍데나필(9.235 min)이 가장 빨리 검출되었으며, 아미노타다라필(12.065min), 하이드록시호모실데 나필(14.442min), 타다라필 (15.120min), 바데나필(17.492min), 실데나필 (17.823 min), 호모 실데나필(20.023min), 슈도바데나필(22.882 min) 순으로 분리되었고, 총 분석 시간은 약 30분이 소요되었다 "(Fig. 2).
1. HPLC/UV로 표준품 8종의 동시다 성분분석법을 실시하여 조건을 설정 후 검사한 결과, 총 63건 중 5건이 검출되었다. 검출된 5건은 모두 원산지는 중국산이며, 식품 유형은 다류 1건과 건강기능식품으로 추정되는 4건에서 검출되었다.
2. LC/MS를 이용하여 발기부전치료제 및유사물질이 검출된 5건의 시료에 대한 LC/MS 확인 검사는 기기 조건을 수립 후 개별 표준품 8종에 대해 SCAN과정 및 SIM Ion을 적용시켜 실험한 결과 모두 동일하게검출되었다.
검출된 5건은 모두 원산지는 중국산이며, 식품 유형은 다류 1건과 건강기능식품으로 추정되는 4건에서 검출되었다. 5건 중 4건은 모두 실데나필로 최저 32.80 ppm에서 최고 60.13 ppm이 검출되었다. 나머지 1건은 실데나필, 바데나필, 호모 실데나필 성분이 동시에 검출된 경우 47.
LQBR로 확인 검시한 결과 5간은 HPLQUV의 검사 결과와 동알하게 검출되었다
검출된 5건은 모두 원산지는 중국산이며, 식품유형은 다류 1건과 건강기능식품으로 추정되는 4건에서 검출되었다. 검출된농도는 최저 32.
검출된 5건은 모두 원산지는 중국산이며, 식품유형은 다류 1건과 건강기능식품으로 추정되는 4건에서 검출되었다. 검출된농도는 최저 32.
유통중인 식품 63건에 대한 HPLC/UV 동시다성분 분석 결과 5건이 검출되었는데, 4건은 실데나필, 1건은 실데나필, 홍데나필, 호모실데나필이 동시에 검출된 경우이다.
후속연구
앞으로 신속하고 정확한 분석을 위해 LC/MS를 이용한 동시다 성분 분석이 이루어질 수 있도록 이동상 물질의 변화와 분석조건의 확립을 위한 심도 있는 연구가 진행되어야 할 것으로 사료된다.
참고문헌 (12)
식품의약품안전청 식품안전평가부: 식품중 발기부전 치료제 및 유사물질(행정간행물등록;11-1470000-000528-01),2004
Alan M Laties, Eberhart zre -nner: Viagra and ophthlm -ology, Progrss in Retinal and Research, 21, 485-506, 2002
Takako Moriyasu : Identifica -tion system for silde -nafil in health foods, Japan Yakugaku zasshi, 121(10), 765-769, 2001
M.H.Shin,M.K.Hong, W.S.Kim, Y.J. Lee and Y.C.Jeoung: Identification of a new ana -logue of sildenafil added illegally to a functional food marketed for penile erectile dysfunction, Food Addit. Contam., 20(9), 793-796, 2003
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