선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 현재 발기부전치료제 및 유사물질등의 부정유해물질 검사가 주로 건강기능식품을 중심으로 이루어지고 있으나, 최근, 주류, 다류, 기타가공품 등의 식품 및 인터넷에서 성기능 강조한 제품을 대상으로 발기부전치료제 및 그 유사물질이 검출됨에 따라 식품을 대상으로 검사와 전반적인 실태조사가 필요하다. 따라서 유통되고 있는 식품에서 발기부전치료제 및 그유사물질 24종을 대상으로 발기부전치료제 및 그 유사물질의 혼입 실태를 모니터링하고자 하였다. 또한 현재까지는 HPLC/PDA(7-15), LC/MS/MS(10, 18-28), GC/MSD(29-31) 및 NMR(9,32-34)를 이용하여 sildenafil, vardenafil, tadalafil 및 그 대사물질의 분석방법 및 구조를 규명한 보고가 되어 있다.
- 또한 현재까지는 HPLC/PDA(7-15), LC/MS/MS(10, 18-28), GC/MSD(29-31) 및 NMR(9,32-34)를 이용하여 sildenafil, vardenafil, tadalafil 및 그 대사물질의 분석방법 및 구조를 규명한 보고가 되어 있다. 발기부전치료제 및 그 유사물질 24종에 대하여 동시분석이 가능한 동시분석법을 최적화하여, 유통 중인 검체에 대하여 발기부전치료제 및 그 유사물질이 함량을 분석하여 함유 실태를 파악하고자 하였다.
- 본 연구는 국내/수입 유통되는 식품과 건강기능식품의 발기부전치료제 및 그 유사물질 혼입 농도를 모니터링하고, 그 결과를 바탕으로 식품의 안전성을 확보하고자 하였다. 전국에서 유통 중인 식품 및 건강기능식품 총 226건을 구입하고 24종의 발기부전치료제 및 그 유사물질을 HPLC/PDA 및 LC-ESI-MS-MS를 이용하여 분석하였다.
제안 방법
- 24종의 발기부전치료제 및 그 유사물질의 HPLC/PDA 분석법은 검출한계, 직선성, 회수율 실험을 통하여 시료 및 분석방법을 최적화 하였다. 24종의 발기부전치료제 및 그 유사물질의 검출한계는 물질마다 차이는 있으나, 신호대잡음비 3이상에서 0.
- 24종의 발기부전치료제 및 그 유사물질의 동시분석법 확립을 위하여 발기부전치료제 및 그 유사물질 24종을 각각 100 µg/kg 표준 용액을 질량분석기에 주입하여 각 표준성분에 적합한 MS 모드와 분자 이온을 찾은 후, 그 모드에서 정량성이 뛰어난 이온과 모드를 선택하였다.
- Acethylvardenafil외 21종의 발기부전치료제 및 그 유사물질을 각각 100 µg/kg를 FIA(FlowInjection Analysis)방법을 통하여 ESI positive(+) mode와 negative(-) mode에서 분석하였다.
- Column은 Capcell Pak C18 UG 120(2.0 mmI.D.×150 mm, 5 µm, Shiseido)를 사용하였으며, 이동상은 0.1% ammonium formate와 acetonitrile을 사용하여 Table 2의 조건으로 유속 0.25 mL/min에서 표준품과 시험용액을 5 µL 주입하여 분석하였다.
- 24종의 발기부전치료제 및 그 유사물질의 LC-MS/MS 분석법은 발기부전치료제 및 그 유사물질 24종을 각각 100 µg/kg 표준 용액을 질량분석기에 주입하는 FIA(Flow Injection Analysis) 방법을 통해 ESI positive(+) mode와 negative(-) mode에서 분석하였다. Icariin의 경우 분자식은 C33H40O15이고 676.7의 분자량을 갖는 물질로서 ESI positive mode에서는 677 amu(atomic mass unit) 분자이온을 관찰하였으며, ESI negative mode에서는 675 amu(atomic mass unit) 분자 이온을 관찰하였다. 각 모드에서 이온의 세기를 비교하여 본 결과, icariin의 경우는 ESI positive mode에서 보다 ESI negative mode에서 감도가 더 좋았으므로 negative mode에서 분석을 수행하였다.
- 기기의 오염여부 및 시료 분석 전후에 carry over가 일어나지 않는지 확인 후 24종의 발기 부전치료제 및 그 유사물질 표준품 및 시료의 분석은 Table 1의 조건으로 HPLC/PDA를 이용하여 정량하였다. Table 2, 3의 분석조건으로 LC-ESI-MS-MS를 이용하여 발기부전치료제 및 그 유사물질 24종에 대하여 정성 시험을 수행하였다. 24종의 발기부전치료제 및 그 유사물질의 모니터링 수행 중 수거한 총 226건의 시료 중에서 인터넷에서 성기능을 강조한 제품 5건에서 발기부전치료제 및 그 유사물질이 검출되었으며, 검출량은 Table 6과 같다.
- 7의 분자량을 갖는 물질로서 ESI positive mode에서는 677 amu(atomic mass unit) 분자이온을 관찰하였으며, ESI negative mode에서는 675 amu(atomic mass unit) 분자 이온을 관찰하였다. 각 모드에서 이온의 세기를 비교하여 본 결과, icariin의 경우는 ESI positive mode에서 보다 ESI negative mode에서 감도가 더 좋았으므로 negative mode에서 분석을 수행하였다. 또한 tadalafil의 경우 분자식은 C22H19N3O4이고 분자량은 389.
- 4의 분자량을 갖는 물질로서 ESI positive mode에서는 390 amu(atomic mass unit) 분자이온을 관찰하였으며, ESI negative mode에서는 388 amu(atomic mass unit) 분자 이온을 관찰하였다. 각 모드에서 이온의 세기를 비교하여 본 결과, tadalafil의 경우도 ESI positive mode에서 보다 ESI negative mode에서 감도가 더 좋았으므로 negative mode에서 분석을 수행하였다. 따라서 시료간의 간섭 및 매트릭스 효과가 없는 한 ESI negative mode에서 분석하는 것이 타당하다는 결론을 얻었다.
- 수거된 시료들은 검체별, 원산지(수입 및 국내), 검체구입 경로, 국가별(온라인) 수거 검체, 수거지역별로 구분하였다. 검체 수거는 식품의약품안전청 통계연보(35)에 따라 매출 현황, 제조업소 현황, 수입현황, 판매현황이 높은 검체 중에 부적합 이력이 있었던 검체를 수거 계획에 반영하였으며, 수도권 및 광역시, 그리고 인구 비율이 높은 지역을 고려한 10개 지역을 대상으로 수거를 실시하였다, 최근 인터넷 식품 및 건강기능식품 시장이 확대되고 있고, 소비자의 식품 및 건강기능식품의 구매 실태도 인터넷 구매가 증가하고 있으므로(36) 10개 포탈 검색 사이트를 이용하여 검색하여 판매 사이트를 조사하고 검색시 빈도가 높고 성기능 표방 제품을 판매하는 사이트를 선정하여 인터넷 수거를 수행하였다. 시료 채취는 식품공전 식품별 검체 채취방법(6)에 따라 채취하였고, 채취한 시료는 분석시까지 냉동 보관하였다.
- 1에 나타내었으며 24종의 발기부전치료제 및 유사물질에서 특이성이 있었다. 검출된 발기 부전 치료제 및 그 유사물질은 LC/MS/MS(US/API 4000, Applied Biosystem, Foster City, CA, USA)를 이용하여 확인하였다. Column은 Capcell Pak C18 UG 120(2.
- 식품 및 건강기능식품을 수도권(서울, 경기, 인천) 69건, 강원도 12건, 대전충남 27건, 충북 29건, 부산경남 19건, 대구경북 17건, 광주전남 18건, 전북 20건, 온라인 인터넷 구매 15건 등 총 226건을 수거하고 발기부전치료제 및 그 유사물질 24종에 대한 혼입실태 조사를 실시하였다. 기기의 오염여부 및 시료 분석 전후에 carry over가 일어나지 않는지 확인 후 24종의 발기 부전치료제 및 그 유사물질 표준품 및 시료의 분석은 Table 1의 조건으로 HPLC/PDA를 이용하여 정량하였다. Table 2, 3의 분석조건으로 LC-ESI-MS-MS를 이용하여 발기부전치료제 및 그 유사물질 24종에 대하여 정성 시험을 수행하였다.
- 각 모드에서 이온의 세기를 비교하여 본 결과, icariin의 경우는 ESI positive mode에서 보다 ESI negative mode에서 감도가 더 좋았으므로 negative mode에서 분석을 수행하였다. 또한 tadalafil의 경우 분자식은 C22H19N3O4이고 분자량은 389.4의 분자량을 갖는 물질로서 ESI positive mode에서는 390 amu(atomic mass unit) 분자이온을 관찰하였으며, ESI negative mode에서는 388 amu(atomic mass unit) 분자 이온을 관찰하였다. 각 모드에서 이온의 세기를 비교하여 본 결과, tadalafil의 경우도 ESI positive mode에서 보다 ESI negative mode에서 감도가 더 좋았으므로 negative mode에서 분석을 수행하였다.
- 식품 및 건강기능식품 중 24종 발기부전치료제 및 그 유사물질을 분석하기 위한 전처리 방법을 시간을 단축시킬수 있는 방법으로 최적화하기 위하여 시료 종류(matrix)별로 회수율을 측정하여 전처리 방법을 검토하였다. 발기부전치료제 및 그 유사물질 24종의 회수율은 시료 종류별로 식품(다류, 주류, 기타가공품)과 건강기능식품에 24종 발기부전치료제 및 그 유사물질 혼합표준 용액을 첨가하고 시료 전처리를 하여 최종농도가 10 mg/kg이 되도록 하였다. 발기부전치료제 및 그 유사물질의 검출된 농도와 발기부전치료제의 복용량이 성분별로 차이는 있으나 1일 최소 복용량이 sildenafil은 25 mg, vardenafil 5 mg, tafalafil 10 mg, udenafil 100 mg이므로 고농도임을 감안하여 직선성이 있는 농도중 10 mg/kg의 농도가 되도록 첨가하였다.
- 발기부전치료제 및 그 유사물질 24종의 회수율은 시료 종류별로 식품(다류, 주류, 기타가공품)과 건강기능식품에 24종 발기부전치료제 및 그 유사물질 혼합표준 용액을 첨가하고 시료 전처리를 하여 최종농도가 10 mg/kg이 되도록 하였다. 발기부전치료제 및 그 유사물질의 검출된 농도와 발기부전치료제의 복용량이 성분별로 차이는 있으나 1일 최소 복용량이 sildenafil은 25 mg, vardenafil 5 mg, tafalafil 10 mg, udenafil 100 mg이므로 고농도임을 감안하여 직선성이 있는 농도중 10 mg/kg의 농도가 되도록 첨가하였다. 회수율 측정 결과, 주류에서 평균 회수율은 105.
- 발기부전치료제 및 그 유사물질의 기기분석은 HPLC/PDA(Alliance 2695 separation module and 2998 photodiode array detector, Waters, Milford, MA, USA)를 이용하였으며, 분석에 사용한 column은 Capcell Pak C18 UG 120(4.6 mmI.D.×250 mm, 5 µm, Shiseido, Tokyo, Japan)이며, 0.1% sodium-1-hexane sulfonate용액에 phosphoric acid를 0.1% 되도록 혼합한 액과 95% acetonitrile을 조제한 이동상을 사용하였다.
- 24종의 발기부전치료제 및 그 유사물질의 동시분석법 확립을 위하여 발기부전치료제 및 그 유사물질 24종을 각각 100 µg/kg 표준 용액을 질량분석기에 주입하여 각 표준성분에 적합한 MS 모드와 분자 이온을 찾은 후, 그 모드에서 정량성이 뛰어난 이온과 모드를 선택하였다. 선택한 이온과 모드에서 충돌에너지를 가하여 분자이온을 딸이온(daughter ion)으로 쪼개고 에너지별 쪼개짐과 딸이온의 세기를 비교하여 최적의 딸이온이 생성하는 충돌에너지 및 기타 파라미터를 저장하여 MS/MS 조건을 확립하였다. 이와 같이 확립한 각 이온의 MS/MS조건과 HPLC의 분리 조건을 조합하여 발기부전치료제 및 그 유사물질 24종 각각의 의약품 성분에 대한 매트릭스 효과 및 불순물에 대한 간섭을 확인한 후 시료간 간섭과 매트릭스 효과를 최소화한 이온을 확인하였다.
- 발기부전치료제 및 그 유사물질 24종을 모니터링하기 위하여 유통 중인 식품 및 건강기능식품을 226건을 수거하여 모니터링 검체로 사용하였다. 수거된 시료들은 검체별, 원산지(수입 및 국내), 검체구입 경로, 국가별(온라인) 수거 검체, 수거지역별로 구분하였다. 검체 수거는 식품의약품안전청 통계연보(35)에 따라 매출 현황, 제조업소 현황, 수입현황, 판매현황이 높은 검체 중에 부적합 이력이 있었던 검체를 수거 계획에 반영하였으며, 수도권 및 광역시, 그리고 인구 비율이 높은 지역을 고려한 10개 지역을 대상으로 수거를 실시하였다, 최근 인터넷 식품 및 건강기능식품 시장이 확대되고 있고, 소비자의 식품 및 건강기능식품의 구매 실태도 인터넷 구매가 증가하고 있으므로(36) 10개 포탈 검색 사이트를 이용하여 검색하여 판매 사이트를 조사하고 검색시 빈도가 높고 성기능 표방 제품을 판매하는 사이트를 선정하여 인터넷 수거를 수행하였다.
- 식품 및 건강기능식품 중 24종 발기부전치료제 및 그 유사물질을 분석하기 위한 전처리 방법을 시간을 단축시킬수 있는 방법으로 최적화하기 위하여 시료 종류(matrix)별로 회수율을 측정하여 전처리 방법을 검토하였다. 발기부전치료제 및 그 유사물질 24종의 회수율은 시료 종류별로 식품(다류, 주류, 기타가공품)과 건강기능식품에 24종 발기부전치료제 및 그 유사물질 혼합표준 용액을 첨가하고 시료 전처리를 하여 최종농도가 10 mg/kg이 되도록 하였다.
- 이와 같이 확립한 각 이온의 MS/MS조건과 HPLC의 분리 조건을 조합하여 발기부전치료제 및 그 유사물질 24종 각각의 의약품 성분에 대한 매트릭스 효과 및 불순물에 대한 간섭을 확인한 후 시료간 간섭과 매트릭스 효과를 최소화한 이온을 확인하였다. 이때, 필요하면 MRM 조건을 재 선택한 후 최종적인 MRM 조건 및 LC/MS/MS 조건을 Table 3에 나타낸 것과 같이 23종의 발기부전치료제 및 유사물질은 mass range 50-550 amu에서 iacariin은 50-700 amu에서 표준품과 시험용액의 쪼개짐 이온(fragmentation ion)의 비율을 비교하여 정성 분석하였다. 24종의 발기부전치료제 및 그 유사물질 중 LC/MS/MS를 이용하여 acethylvardenafil을 분석한 TIC와 XIC는 Fig.
- 본 연구는 국내/수입 유통되는 식품과 건강기능식품의 발기부전치료제 및 그 유사물질 혼입 농도를 모니터링하고, 그 결과를 바탕으로 식품의 안전성을 확보하고자 하였다. 전국에서 유통 중인 식품 및 건강기능식품 총 226건을 구입하고 24종의 발기부전치료제 및 그 유사물질을 HPLC/PDA 및 LC-ESI-MS-MS를 이용하여 분석하였다. 고체 및 액체 시료의 전처리는 메탄올을 이용하여 추출하였다.
대상 데이터
- Icariin, yohimbin을 포함한 24종의 발기부전치료제 및 그 유사물질 표준품은 식품의약품안전청으로부터 분양받아 사용하였다. 시약은 sodium 1-hexanesulfonate(TCI-Ace, Kita-Ku, Tokyo, Japan), phosphoric acid(Sigma-Aldrich, St.
- 발기부전치료제 및 그 유사물질 24종을 모니터링하기 위하여 유통 중인 식품 및 건강기능식품을 226건을 수거하여 모니터링 검체로 사용하였다. 수거된 시료들은 검체별, 원산지(수입 및 국내), 검체구입 경로, 국가별(온라인) 수거 검체, 수거지역별로 구분하였다.
- Icariin, yohimbin을 포함한 24종의 발기부전치료제 및 그 유사물질 표준품은 식품의약품안전청으로부터 분양받아 사용하였다. 시약은 sodium 1-hexanesulfonate(TCI-Ace, Kita-Ku, Tokyo, Japan), phosphoric acid(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)와 Ammonium formate(99.995%, Sigma-Aldrich)를 사용하였다. 용매로서 메탄올(HPLC grade, Burdick & Jackson, Seoul, Korea)과 아세토나이트릴(HPLC grade, Burdick & Jackson)을 사용하였으며, 시료 전처리에 사용되는 물 및 이동상은 초순수를 사용하였다.
- 식품 및 건강기능식품을 수도권(서울, 경기, 인천) 69건, 강원도 12건, 대전충남 27건, 충북 29건, 부산경남 19건, 대구경북 17건, 광주전남 18건, 전북 20건, 온라인 인터넷 구매 15건 등 총 226건을 수거하고 발기부전치료제 및 그 유사물질 24종에 대한 혼입실태 조사를 실시하였다. 기기의 오염여부 및 시료 분석 전후에 carry over가 일어나지 않는지 확인 후 24종의 발기 부전치료제 및 그 유사물질 표준품 및 시료의 분석은 Table 1의 조건으로 HPLC/PDA를 이용하여 정량하였다.
- 용매로서 메탄올(HPLC grade, Burdick & Jackson, Seoul, Korea)과 아세토나이트릴(HPLC grade, Burdick & Jackson)을 사용하였으며, 시료 전처리에 사용되는 물 및 이동상은 초순수를 사용하였다.
- 45 µm membrane filter로 여과하여 시험 용액으로 사용하였다. 추출 및 희석만으로 분석이 곤란한 점도가 강한 추출물 시료와 여러 가지 천연물이 혼합되어 있는 천연물 시료는 식품공전방법(6)으로 전처리하여 시험용액으로 하였다.
- 45 µm membrane filter로 여과하여 시험용액으로 하였다. 환제, 캡슐제와 같은 건강기능식품(영양보충용제품, 인삼제품류 등)과 고체시료인 다류(추출차, 침출차등), 기타가공식품은 일정량을 취해 막자사발을 이용하여 균질화하여 시료로 사용하였다. 균질화한 시료 1g을 취하여 메탄올을 가하여 초음파진탕기로 추출하고 원심분리(4000 rpm, 5분간) 후 0.
이론/모형
- 24종의 발기부전치료제 및 그 유사물질의 LC-MS/MS 분석법은 발기부전치료제 및 그 유사물질 24종을 각각 100 µg/kg 표준 용액을 질량분석기에 주입하는 FIA(Flow Injection Analysis) 방법을 통해 ESI positive(+) mode와 negative(-) mode에서 분석하였다.
- 본 연구에서는 다양한 식품 및 건강기능식품을 측정해야 하므로 시간을 단축할 수 있는 스크리닝 방법에 대하여 회수율을 검증하여 전처리 방법에 적용하였으며, 식품 중에 점도가 높거나 천연물이 함유되어 있는 매트릭스 효과가 큰 식품의 경우는 식품공전 방법(6)을 사용하였다.
- 검체 수거는 식품의약품안전청 통계연보(35)에 따라 매출 현황, 제조업소 현황, 수입현황, 판매현황이 높은 검체 중에 부적합 이력이 있었던 검체를 수거 계획에 반영하였으며, 수도권 및 광역시, 그리고 인구 비율이 높은 지역을 고려한 10개 지역을 대상으로 수거를 실시하였다, 최근 인터넷 식품 및 건강기능식품 시장이 확대되고 있고, 소비자의 식품 및 건강기능식품의 구매 실태도 인터넷 구매가 증가하고 있으므로(36) 10개 포탈 검색 사이트를 이용하여 검색하여 판매 사이트를 조사하고 검색시 빈도가 높고 성기능 표방 제품을 판매하는 사이트를 선정하여 인터넷 수거를 수행하였다. 시료 채취는 식품공전 식품별 검체 채취방법(6)에 따라 채취하였고, 채취한 시료는 분석시까지 냉동 보관하였다.
성능/효과
- 24종의 발기부전치료제 및 그 유사물질을 최적화한 MRM 조건과 HPLC 조건을 이용하여 식품 및 건강기능식품에 발기부전치료제 및 그 유사물질 24종을 100 µg/kg가 되도록 첨가하고 분석하였을때 얻은 크로마토그램을 24종의 발기부전치료제 및 그 유사물질이 들어 있지 않은 음성 검체와 비교할 때, 확립한 LC/MS/MS 조건에서 24종의 발기부전치료제 및 그 유사물질의 분리가 양호함을 알 수 있었다.
- Choi 등(7)의 5-100 mg/kg과 Jang 등(10)의 1-50 mg/kg과 유사하였다. 24종의 발기부전치료제 및 그 유사물질의 r2가 0.9966 이상으로 양호한 직선성을 나타내었다. Choi 등(7)의 vardenafil, hongdenafil, hydroxyhongdenafil, sildenafil, homosidenafil, tadalafil 6종에서는 직선성이 0.
- 24종의 발기부전치료제 및 그 유사물질의 HPLC/PDA 분석법은 검출한계, 직선성, 회수율 실험을 통하여 시료 및 분석방법을 최적화 하였다. 24종의 발기부전치료제 및 그 유사물질의 검출한계는 물질마다 차이는 있으나, 신호대잡음비 3이상에서 0.03-0.10 mg/kg이었다. 검출한계는 Choi 등(7)의 0.
- Table 2, 3의 분석조건으로 LC-ESI-MS-MS를 이용하여 발기부전치료제 및 그 유사물질 24종에 대하여 정성 시험을 수행하였다. 24종의 발기부전치료제 및 그 유사물질의 모니터링 수행 중 수거한 총 226건의 시료 중에서 인터넷에서 성기능을 강조한 제품 5건에서 발기부전치료제 및 그 유사물질이 검출되었으며, 검출량은 Table 6과 같다. 발기부전치료제 및 그 유사물질의 동시분석 결과, acethylvardenafil이 1종에서 21,476 mg/kg(15 mg/capsule)이었으며, sildenafil이 2종에서 각각 52,778 mg/kg(29 mg/capsule), 71,535 mg/kg(48 mg/capsule)이었고, Tadalafil이 4종에서 9,772 mg/kg(6 mg/capsule)-55,545 mg/kg(33 mg/capsule)이 검출되었다.
- 05 mg/kg과 유사하였으며, Jang 등(10)의 1 mg/kg보다는 낮았다. 24종의 발기부전치료제 및 유사물질을 농도별(1, 5, 10, 25, 50 mg/kg)로 측정한 결과 linear range가 1-50 mg/kg이었다. Choi 등(7)의 5-100 mg/kg과 Jang 등(10)의 1-50 mg/kg과 유사하였다.
- Acethylvardenafil외 21종의 발기부전치료제 및 그 유사물질을 각각 100 µg/kg를 FIA(FlowInjection Analysis)방법을 통하여 ESI positive(+) mode와 negative(-) mode에서 분석하였다. ESI positive mode와 ESI negative mode에서 분석한 경우 acethlvardenafil외 21종의 발기부전치료제 및 그 유사물질에서 감도가 ESI positive mode에서 감도면에서 더 좋은 결과를 얻었다. 따라서, 발기부전 치료제 및 그 유사물질 24종을 각각 질량분석기에 주입하여 ESI positive mode와 ESI negative mode에서 감도를 비교한 결과 icariin과 tadalafil의 경우는 ESI negative에서 acethylvardenafil외 21종에서는 ESI positive mode에서 감도가 더 좋은 결과를 얻었다.
- 고체 시료인 건강기능식품과 기타가공품에서의 스크리닝 분석법으로 24종의 발기부전치료제 및 그 유사물질을 첨가한 경우, 회수율 측정 결과는 Table 4, 5와 같았다. Table 4에서 보는 것과 같이 건강기능식품 중 스크리닝 방법에 따라 전처리한 결과, 24종 발기부전치료제의 평균 회수율은 103.1%로 양호 하였으며 상대표준편차도 0.9로 양호하였으므로 전처리 방법으로 타당한 것으로 사료된다. 또한 기타가공품에서의 스크리닝 분석법으로 전처리 후 회수율 측정한 결과는 Table 5에서 보는 바와 같이 회수율은 111.
- 3(c)에서 보는 바와 같이 tadalafil 표준품의 PDA spectrum과 검출된 시료의 PDA spectrum이 일치함을 알 수 있었다. 검출된 성분을 정성하기 위하여 LC-ESI-MS-MS를 이용하여 분석한 tadalafil의TIC와 검출된 시료의 TIC는 Fig. 4에 나타내었으며, tadalafil의 daughter ion인 m/z 232, m/z 262 등의 peak가 검출됨을 확인하였다. 성기능을 강조한 제품의 발기부전치료제 및 그 유사물질의 검출 경향은 한 시료에서 여러가지 발기부전치료제 및 그 유사물질이 검출된 보고(37)와 일치하였으며, 발기부전치료제 뿐만아니라 그 유사물질도 함께 검출됨을 알 수 있었다.
- 7로 주류 중에 스크리닝 전처리 방법이 타당한 것으로 사료된다. 다류 중 액상추출차와 고체시료인 침출차 및 추출차에서는 평균 회수율은 각각 107.7, 107.0%이었고, 상대표준편차(RSD%)는 0.3, 0.7로 다류 중의 스크리닝 전처리 방법이 타당한 것으로 검토되었다. Kim 등(8)은 액체시료 전처리시 스크리닝 방법을 이용하여 전처리하였으며, Shin 등(9)도 기타음료(추출음료)를 대상으로 스크리닝 전처리한 결과를 보고한 바 있다.
- Shin 등(9)의 식품 중의 sildenafil에 관한 연구와 Kim 등(8)의 sildenafil외 5종을 스크리닝 방법으로 한 연구와 일치하였다. 다만, 추출과 희석만으로 분석이 곤란한 점도가 강한 물질과 여러 가지 천연물이 혼합되어 있는 시료는 디클로로메탄으로 추출하는 과정을 거치는 식품 공전 방법(6)으로 수행하는 것이 분석하고자 하는 24종의 발기부전치료제의 분리를 위해 적합하였다. 이는 Kim 등(8)의 연구 보고 중의 전처리 방법에 대한 연구와 일치하였다.
- 따라서, 발기부전 치료제 및 그 유사물질 24종을 각각 질량분석기에 주입하여 ESI positive mode와 ESI negative mode에서 감도를 비교한 결과 icariin과 tadalafil의 경우는 ESI negative에서 acethylvardenafil외 21종에서는 ESI positive mode에서 감도가 더 좋은 결과를 얻었다. 따라서 icariin과 tadalfil의 경우는 ESI negative mode에서 그 외의 발기부전치료제 및 그 유사물질 22종에서는 ESI positive mode에서 분석하는 것이 타당하다는 결론을 얻었다.
- 분석 결과, 대부분 검출된 발기부전치료제 및 그 유사물질의 농도가 고농도이므로 스크리닝 방법으로 전처리했을 경우에도 분석시에 문제가 없었다. 따라서 고체 시료에도 스크리닝 전처리 방법을 적용하여 실험이 가능함을 확인하였다. Shin 등(9)의 식품 중의 sildenafil에 관한 연구와 Kim 등(8)의 sildenafil외 5종을 스크리닝 방법으로 한 연구와 일치하였다.
- 각 모드에서 이온의 세기를 비교하여 본 결과, tadalafil의 경우도 ESI positive mode에서 보다 ESI negative mode에서 감도가 더 좋았으므로 negative mode에서 분석을 수행하였다. 따라서 시료간의 간섭 및 매트릭스 효과가 없는 한 ESI negative mode에서 분석하는 것이 타당하다는 결론을 얻었다. Acethylvardenafil외 21종의 발기부전치료제 및 그 유사물질을 각각 100 µg/kg를 FIA(FlowInjection Analysis)방법을 통하여 ESI positive(+) mode와 negative(-) mode에서 분석하였다.
- ESI positive mode와 ESI negative mode에서 분석한 경우 acethlvardenafil외 21종의 발기부전치료제 및 그 유사물질에서 감도가 ESI positive mode에서 감도면에서 더 좋은 결과를 얻었다. 따라서, 발기부전 치료제 및 그 유사물질 24종을 각각 질량분석기에 주입하여 ESI positive mode와 ESI negative mode에서 감도를 비교한 결과 icariin과 tadalafil의 경우는 ESI negative에서 acethylvardenafil외 21종에서는 ESI positive mode에서 감도가 더 좋은 결과를 얻었다. 따라서 icariin과 tadalfil의 경우는 ESI negative mode에서 그 외의 발기부전치료제 및 그 유사물질 22종에서는 ESI positive mode에서 분석하는 것이 타당하다는 결론을 얻었다.
- 24종의 발기부전치료제 및 그 유사물질의 모니터링 수행 중 수거한 총 226건의 시료 중에서 인터넷에서 성기능을 강조한 제품 5건에서 발기부전치료제 및 그 유사물질이 검출되었으며, 검출량은 Table 6과 같다. 발기부전치료제 및 그 유사물질의 동시분석 결과, acethylvardenafil이 1종에서 21,476 mg/kg(15 mg/capsule)이었으며, sildenafil이 2종에서 각각 52,778 mg/kg(29 mg/capsule), 71,535 mg/kg(48 mg/capsule)이었고, Tadalafil이 4종에서 9,772 mg/kg(6 mg/capsule)-55,545 mg/kg(33 mg/capsule)이 검출되었다. 24종의 발기부전치료제 및 그 유사물질의 HPLC chromatogram과 인터넷에서 성기능을 강조한 제품 중 대표적으로 tadalafil이 검출된 chromatogram은 Fig.
- 식품 및 건강기능식품 시료에서 확립된 시험법을 이용하여 식품과 건강기능식품 226건을 수거하여 모니터링한 결과, 5건의 성기능 표방 제품에서 acethylvardenafil, sildenafil, tadalafil이 검출되었다. 분석 결과, 검출량은 acethylvardenafil이 1종에서 21,476 mg/kg(15 mg/capsule)이었으며, sildenafil이 2종에서 각각 52,778 mg/kg(29 mg/capsule), 71,535 mg/kg(48 mg/capsule)이었고, tadalafil이 4종에서 9,772 mg/kg(6 mg/capsule) -55,545 mg/kg (33 mg/capsule)이었다. 따라서 식품 및 건강 기능식품 중의 발기부전치료제 및 그 유사물질에 대한 지속적인 실태조사가 요구된다.
- 5로 양호하였다. 분석 결과, 대부분 검출된 발기부전치료제 및 그 유사물질의 농도가 고농도이므로 스크리닝 방법으로 전처리했을 경우에도 분석시에 문제가 없었다. 따라서 고체 시료에도 스크리닝 전처리 방법을 적용하여 실험이 가능함을 확인하였다.
- 고체 및 액체 시료의 전처리는 메탄올을 이용하여 추출하였다. 식품 및 건강기능식품 시료에서 확립된 시험법을 이용하여 식품과 건강기능식품 226건을 수거하여 모니터링한 결과, 5건의 성기능 표방 제품에서 acethylvardenafil, sildenafil, tadalafil이 검출되었다. 분석 결과, 검출량은 acethylvardenafil이 1종에서 21,476 mg/kg(15 mg/capsule)이었으며, sildenafil이 2종에서 각각 52,778 mg/kg(29 mg/capsule), 71,535 mg/kg(48 mg/capsule)이었고, tadalafil이 4종에서 9,772 mg/kg(6 mg/capsule) -55,545 mg/kg (33 mg/capsule)이었다.
- 선택한 이온과 모드에서 충돌에너지를 가하여 분자이온을 딸이온(daughter ion)으로 쪼개고 에너지별 쪼개짐과 딸이온의 세기를 비교하여 최적의 딸이온이 생성하는 충돌에너지 및 기타 파라미터를 저장하여 MS/MS 조건을 확립하였다. 이와 같이 확립한 각 이온의 MS/MS조건과 HPLC의 분리 조건을 조합하여 발기부전치료제 및 그 유사물질 24종 각각의 의약품 성분에 대한 매트릭스 효과 및 불순물에 대한 간섭을 확인한 후 시료간 간섭과 매트릭스 효과를 최소화한 이온을 확인하였다. 이때, 필요하면 MRM 조건을 재 선택한 후 최종적인 MRM 조건 및 LC/MS/MS 조건을 Table 3에 나타낸 것과 같이 23종의 발기부전치료제 및 유사물질은 mass range 50-550 amu에서 iacariin은 50-700 amu에서 표준품과 시험용액의 쪼개짐 이온(fragmentation ion)의 비율을 비교하여 정성 분석하였다.
- 발기부전치료제 및 그 유사물질의 검출된 농도와 발기부전치료제의 복용량이 성분별로 차이는 있으나 1일 최소 복용량이 sildenafil은 25 mg, vardenafil 5 mg, tafalafil 10 mg, udenafil 100 mg이므로 고농도임을 감안하여 직선성이 있는 농도중 10 mg/kg의 농도가 되도록 첨가하였다. 회수율 측정 결과, 주류에서 평균 회수율은 105.0%이었고, 평균상대표준편차(RSD%)는 0.7로 주류 중에 스크리닝 전처리 방법이 타당한 것으로 사료된다. 다류 중 액상추출차와 고체시료인 침출차 및 추출차에서는 평균 회수율은 각각 107.
후속연구
- 24종의 발기부전치료제 및 그 유사물질을 최적화한 MRM 조건과 HPLC 조건을 이용하여 식품 및 건강기능식품에 발기부전치료제 및 그 유사물질 24종을 100 µg/kg가 되도록 첨가하고 분석하였을때 얻은 크로마토그램을 24종의 발기부전치료제 및 그 유사물질이 들어 있지 않은 음성 검체와 비교할 때, 확립한 LC/MS/MS 조건에서 24종의 발기부전치료제 및 그 유사물질의 분리가 양호함을 알 수 있었다. 따라서 검출된 검체에 대하여 24종의 발기부전치료제 및 그 유사물질을 신속 정확하게 동시 정성이 가능함에 따라 시료 분석에 적용할 수 있을 것으로 사료된다.
- 성기능을 강조한 제품의 발기부전치료제 및 그 유사물질의 검출 경향은 한 시료에서 여러가지 발기부전치료제 및 그 유사물질이 검출된 보고(37)와 일치하였으며, 발기부전치료제 뿐만아니라 그 유사물질도 함께 검출됨을 알 수 있었다. 식품 및 건강기능식품, 성기능 표방 제품을 소비자의 구매 패턴에 따라 백화점, 마트뿐만 아니라 통신판매의 하나인 인터넷에서 수거하여 분석한 결과 발기부전치료제 및 그 유사물질이 검출됨에 따라 오남용의 우려가 있고, 정해진 용법대로 의사의 처방전에 따르지 않을 경우 부작용이 따르므로, 온라인 수거 검사를 상시 검사화 하고 지속적으로 모니터링이 수행되어야 할 것이다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.