선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- polymyxa DY1의 생장과 항균물질의 생산을 위한 배지의 영양조성과 적정 농도를 평가하였다. 균체 생장과 항균물질 생산의 관계, 최적배양 온도, 초발 pH 등을 조사하여 최적 배 양조건을 탐색 하였고, P. polymyxa DY1 의 새로운 항균물질생산을 위한 배양학적인 기초정보를 확보하고자 하였다.
- polymyxa DY1 이 생산하는 이 새로운 항균물질이 이러한 요구에 부응하는 유용한 치료제로 개발이 되기 위해서 항균활성물질 구조의 정밀한 규명과 각종 내성균에 대한 광범위한 항균력 평가가 잇따라야 한다. 본 연구는 P. polymyxa DY1의 항균물질 생산에 대한 배양학적 인 기초 자료를 제공한다.
- 0으로 조정하고 35, C에서 30~48 시간동안 진탕배양하는 것이 가장 좋았다. 본 연구는 새로운 항균활성물질을 생산하는 것으로 보고된 P. pofymyxa DY1 (Shin et al. 2007a, b)의 항균활성 생산을 위한 최적 배지 조성과 최적생장 조건을 조사한 기초연구이다. 현재 임상에서 널리 쓰이는 항생제에 대한 내성균의 확산으로 인해 이에 대항할 수 있는 새로운 항생물질을 찾는 요구가 크다.
- 2007b). 본 연구에서는 P. polymyxa DY1의 생장과 항균물질의 생산을 위한 배지의 영양조성과 적정 농도를 평가하였다. 균체 생장과 항균물질 생산의 관계, 최적배양 온도, 초발 pH 등을 조사하여 최적 배 양조건을 탐색 하였고, P.
제안 방법
- polymyxa DY1 균주를 접종하였다. 35-C에서 150rpm으로 24시간 배양한 후, OD(600nm) 값으로 생장을 측정하였다. 최적영양원을 선발한 후, 이들의 최적농도를 조사하였다.
- P. polymyxa DY1 균주를 두 개의 TSB 100 mL (250 mL 삼각플라스크)에 접종한 후, 35℃에서 48 hrs 동안 각각 진탕배양과 정치배양을 하였다. 배양중 6시간 마다 배양액 의 일부를 취 하여 600nm에서 Optical density (OD, 흡광도)를 측정하였다.
- P. polymyxa DY1 균주의 생 육에 적합한 pH를 조사하기 위하여 최적화 과정을 거쳐서 만들어진 Optimized Synthetic Medium (OSM) II (Table 2)의 pH를 0.1 N HCl 과 0.1 N NaOH로 조정하였다. 이 배지에 P.
- 각 영양물질이 항균활성물질 생산에 영향을 미치는 영 향을 조사하고자 pH 8.0으로 맞춘 기초배지 50 mL (250mL 삼각프라스크)에 Table 1에 나타난 각 영양원을 1% 첨가한 후, P. polymyxa DY1 을 접종하여 35℃에서 48시간동안 150rpm으로 진탕배양하였다. 배양 후, 배양액을 항생제 감수성 시험 표준균주인 E.
- polymyxa DY1 의 생장에 미치는 영향을 조사하였다. 각각의 기초배지 50mL(250mL 삼각플라스크)에 조사하고자 하는 영양원을 1% 씩 첨가하고, pH를 8.0으로 맞춘 후, P. polymyxa DY1 균주를 접종하였다. 35-C에서 150rpm으로 24시간 배양한 후, OD(600nm) 값으로 생장을 측정하였다.
- 보존배 지로 Nutrient Agar (NA) 배지를, 증균배 지 로 Nutrient Broth (NB)와 Brain Heart Infusion (BHI), 생장곡선 및 항균활성생산 시험용으로 Trypticase Soy Broth(TSB)를 사용하였다. 균주배양과 항균물질 생산을 위한 최적 배지 조성 탐색을 위하여 Basal Medium (BM, 기초배지)을 기본적인 조성으로 사용하였다. BMe 1L당 (NH4)2SO4 2.
- 최적영양원을 선발한 후, 이들의 최적농도를 조사하였다. 기초배지에 각 최적영양원을 0.1 ~2.0%(아미노산은 0.1 ~2.7%)로 첨가한 후, P. polymyxa DY1 균주를 접종한 후, 최적영양원을 조사하는 방법과 동일한 방법으로 최적농도를 조사하였다.
- 두 개의 TSB 100mL(250mL 삼각플라스크)에 각각 P. polymyxa DY1 균주를 접종하고 35℃에서 48시간 동안 각각 정치배양과 진탕배양을 하였다. 접종 후 6시간 간격으로 5mL의 배양액을 취하여 원심분리한 후 상층 액을 취하였다.
- polymyxa DY1 을 접종하여 35℃에서 48시간동안 150rpm으로 진탕배양하였다. 배양 후, 배양액을 항생제 감수성 시험 표준균주인 E. coli ATCC 25922 균주가 도말되어 있는 NA 배지에 50 μL를 직접 떨어뜨리 거나 (drop method), 혹은 50 μL를 6 mm disk에 떨어드려 건조시킨 후 배지위에 놓고 (disk method), 35P에서 24시간 배양시킨 후 생육억제대인 투명환의 직경을 측정하였다. 투명환이 가장 크게 나온 성분을 최적영양원으로 선택하였으며, 선택된 성분의 농도를 0.
- polymyxa DY1 균주를 두 개의 TSB 100 mL (250 mL 삼각플라스크)에 접종한 후, 35℃에서 48 hrs 동안 각각 진탕배양과 정치배양을 하였다. 배양중 6시간 마다 배양액 의 일부를 취 하여 600nm에서 Optical density (OD, 흡광도)를 측정하였다. OD 600nm의 값이 1.
- polymyxa DY1 균주의 항균활성을 알아보기 위 하 여생 장억제 시험 표준균주로 Escherichia coli ATCC 25922 를 사용하였다. 보존배 지로 Nutrient Agar (NA) 배지를, 증균배 지 로 Nutrient Broth (NB)와 Brain Heart Infusion (BHI), 생장곡선 및 항균활성생산 시험용으로 Trypticase Soy Broth(TSB)를 사용하였다. 균주배양과 항균물질 생산을 위한 최적 배지 조성 탐색을 위하여 Basal Medium (BM, 기초배지)을 기본적인 조성으로 사용하였다.
- 아미노산의 P. polymyxa DY1의 생 육에 대한 영향을 보기 위하여 0.6% dextrose와 1.4% ammonium phosphate dibasic, 0.9% peptone을 함유한 기초배지에서 Table 1 에나타난 12종의 아미노산을 1%씩 가하였다. 글루타민 함유 배지에서 생육이 가장 왕성하였으며, 발린 함유 배지에서 가장 저조하였다(data not shown).
- 항균제 감수성 시험에 사용하는 Escherichia coli ATCC 25922를 BHI 배지에서 18시간 배양 후, 멸균된 면봉을 이용하여 NA 평판배지의 표면에 골고루도 말한 다음 그 표면을 건조시켰다. 원심분리 상층액을 50 μL를 NA 표면에 떨어뜨린 후 18~24시간 반응시킨 후 생성된 억제대 (투명대)의 직경을 측정하였다.
- polymyxa DY1 을 접종하여 35℃에서 24시간 배양하였다. 최적 생장 온도를 조사하기 위하여 P. polymyxa DY1 균주를 pH 8.0의 OSM II 배지 (Table 2)에 접종한 후, 각기 다른 온도의 항온기에서 24시간 배양하였다.
- 35-C에서 150rpm으로 24시간 배양한 후, OD(600nm) 값으로 생장을 측정하였다. 최적영양원을 선발한 후, 이들의 최적농도를 조사하였다. 기초배지에 각 최적영양원을 0.
- coli ATCC 25922 균주가 도말되어 있는 NA 배지에 50 μL를 직접 떨어뜨리 거나 (drop method), 혹은 50 μL를 6 mm disk에 떨어드려 건조시킨 후 배지위에 놓고 (disk method), 35P에서 24시간 배양시킨 후 생육억제대인 투명환의 직경을 측정하였다. 투명환이 가장 크게 나온 성분을 최적영양원으로 선택하였으며, 선택된 성분의 농도를 0.1~2.0%로 (아미노산은 0.1~2.5%) 조정한 배지에서 P. polymyxa DY1 을 배양한 후, 최적영양원을 조사하는 방법과 동일하게 최적농도를 조사하였다.
- 접종 후 6시간 간격으로 5mL의 배양액을 취하여 원심분리한 후 상층 액을 취하였다. 항균제 감수성 시험에 사용하는 Escherichia coli ATCC 25922를 BHI 배지에서 18시간 배양 후, 멸균된 면봉을 이용하여 NA 평판배지의 표면에 골고루도 말한 다음 그 표면을 건조시켰다. 원심분리 상층액을 50 μL를 NA 표면에 떨어뜨린 후 18~24시간 반응시킨 후 생성된 억제대 (투명대)의 직경을 측정하였다.
- 항균활성 생산에 대한 유기질소원의 영향을 보기 위하여, 1% dextrose와 1.5% ammonium sulfate을 함유한 기초배지에 peptone을 포함한 7종류의 유기질소원을 각각 1% 첨가한 배지에서 배양하였다. 무기질소원은 항균물질 생산에 좋은 영향을 미치는데 반하여, 유기질 소원의 경우 오직 casamino acid 만 시험된 무기질소원에 필적 하는 항균물질을 생산하였다 (data not shown).
대상 데이터
- P. polymyxa DY1 균주의 항균활성을 알아보기 위 하 여생 장억제 시험 표준균주로 Escherichia coli ATCC 25922 를 사용하였다. 보존배 지로 Nutrient Agar (NA) 배지를, 증균배 지 로 Nutrient Broth (NB)와 Brain Heart Infusion (BHI), 생장곡선 및 항균활성생산 시험용으로 Trypticase Soy Broth(TSB)를 사용하였다.
- P. polymyxa DY1 을 NB, BHI 그리고 위의 각 영 양소에 대한 최적화 작업을 통해서 만들어진 Optimized Synthetic Medium (OSM) I과 II에서 배양하였다 (Table 3). P.
- 기초배지에 Table 1의 18종류의 탄소원을 각각 가하여 만든 배지에 배 양한 P. polymyxa DY1의 OD를 측정하였다. 단당류 중에서는 dextrose를 첨가한 배지에서 가장 생육이 좋았으며, 이당류 중에서는 fructose와 saccharose가 좋았다.
성능/효과
- 1% dextrose, 1.5% ammonium sulfate, 1.1% casamino acid, 1.9% aspartic acid가 포함된 기초배지에 Table 1에 있는 13종류의 무기염류를 각각 1mM 첨가한 결과, ferric sulfate를 첨가한 배지에서 항균물질의 생산이 가장 높았으며, 그 다음으로 magnesium sulfate 인 것으로 나타났다 (data not shown). 항균활성 생산을 위한 ferric sulfate 의 최적농도는 2mM이었다 (Table 2).
- 1% dextrose와 1.4% ammonium phosphate dibasic를 함유한 기초배지에서 Table 1에 열거된 유기질소원 1%를 가한 배지에서 배양한 결과 peptone을 가한 배지에서 P. polymyxa DY1의 생 육이 가장 높았으며 malt extract에서 가장 낮았다 (data not shown). P.
- Dextrose 0.6%가 함유된 기초배지에 Table 1에 있는 7 종의 무기질소원을 각각 1% 첨가한 후 P. polymyxa DY1 를 배양한 결과, ammonium phosphate dibasic과 ammonium nitrate를 함유한 배지에서 생장이 가장 높았다 (data not shown). Dextrose 0.
- polymyxa DY1 를 배양한 결과, ammonium phosphate dibasic과 ammonium nitrate를 함유한 배지에서 생장이 가장 높았다 (data not shown). Dextrose 0.6%가 함유된 기초배지에 ammonium phosphate dibasic을 질소원으로 가하여 P. polymyxa DY1 을 배 양한 결과, 1.4% 농도에서 생 육이 가장 좋았다(Table 2).
- polymyxa DY1의 항균 활성 을 측정한 결과 무기 질소원으로 (NH4)2SO4가 가장 좋은 것으로 나타났으며, 다른 무기질소원도 대체로 좋은 결과를 나타냈다 (data not shown). Dextrose 1.0%를 함유한 기초배지에 (NH4)2SO4를 가한 배지에서 P. polymyxa DY1 는 (NHieSOi 1.5% 에서 가장 높은 항균력을 보였으며, 1.6% 이상에서는 감소하였다(Table 2).
- Dextrose 1.0%를 함유한 기초배지에 7종류의 무기질 소원을 각각 1% 첨가한 배지에서 P.polymyxa DY1의 항균 활성 을 측정한 결과 무기 질소원으로 (NH4)2SO4가 가장 좋은 것으로 나타났으며, 다른 무기질소원도 대체로 좋은 결과를 나타냈다 (data not shown). Dextrose 1.
- BHI 배지에서 균의 생장은 뛰어났으나, 항균물질의 생산은 매우 저조하였다. OSM I 배지는 균체의 생장과 항균물질의 생산에 모두 우수한 효과를 나타내었다 (Table 3).
- polymyxa DY1 을 NB, BHI 그리고 위의 각 영 양소에 대한 최적화 작업을 통해서 만들어진 Optimized Synthetic Medium (OSM) I과 II에서 배양하였다 (Table 3). P. polymyxa DY1 균주는 BHI 배지에서 가장 잘 자랐으며, casamino acid가 첨가된 OSM I, casamino acid가 없는 OSM Ⅱ, NB 배지 순으로 생장하였다(Table 3). 생장억제환의 직경으로 본 P.
- 2). P. polymyxa DY1 균주는 pH 8.0 의 OSM II 배지에서 35℃에서 생장이 가장 왕성하였다. 생육을 위한 배양 적정온도는 25℃에서 35℃인 것으로 나타났다 (Fig.
- polymyxa DY1의 생 육이 가장 높았으며 malt extract에서 가장 낮았다 (data not shown). P. polymyxa DY1 는 0.9% 의 peptone을 함유한 배지에서 가장 잘 자랐다(Table 2).
- 7%를 초과하면 생 육이 점차 감소하였다 (data not shown). P. polymyxa DY1 은 dextrose를 1.0% 첨가한 배지에서 가장 높은 항균 활성을 보였다 (Table 2). 그러나 1.
- (Han and Kim 1999). P. polymyxa DY1에서 항균활성이 ferric sulfate나 magnesium sulfate를 첨가한 배지에서 높게 나타났는데, 이는 1 mM CaCl2 첨가 시 항균물질의 생산이 좋았으며, KCl, MgCl2, NaCl, BaCl2 첨가 시 생산이 양호하였고, CaCh 첨가 시 항균물질 생산이 좋았다는 보고와 비교된다. (Hong et al.
- polymyxa DY1 의 생육이 가장 저조하였다. P. polymyxa DY1은 0.6%의 dextrose에서 생육이 가장 좋았으나, 0.7%를 초과하면 생 육이 점차 감소하였다 (data not shown). P.
- P. polymyxa DY1은 OSM II 배지에서 초발 pH 8.0의 조건에서 가장 높은 생장을 나타냈다. pH 9 이상의 알칼리 환경에서는 생육이 급격히 떨어졌으며 적정 초발 pH 는 7~8이 었다 (Fig.
- 2007a). P. polymyxa DY1은 다제내성을 가지는 다양한 장내세균에 대하여 항균력을 나타내어 장내세균 치료제로서의 잠재력을 보여주었다. 항균활성 양상과 분리정제한 항균 활성 물질의 구조를 분석한 결과 hydroxyl기를 가지고 있는 alkane 으로 나타났으며, 지금까지 보고된 항생물질과 다른 새로운 물질로 추측되 었다 (Shin et al.
- P. polymyxa DY1은 무기질소원이 유기질소원보다 항균물질의 생산에 더 나은 영향을 보였다 (data not shown). 이는 Bacillus sp.
- Calcium chloride와 magnesium sulfate에서도 유사한 결과를 얻 었다 (data not shown). P. polymyxa DY1의 생 육을 위한 sodium molibdate의 최적 농도는 2mM이었다 (Table 2).
- TSB 배지에서 배양한 P. polymyxa DY1의 생균수는, 진탕배양의 경우 접종 후 12시간까지 대수기적 성장을 보인 후 둔화되어 18시간에 정지기에 도달하였다. 24시간 후에 감소기가 되어 30시간에 일시적으로 떨어진 후부 분 적으로 회복 되었다.
- 단당류 중에서는 dextrose를 첨가한 배지에서 가장 생육이 좋았으며, 이당류 중에서는 fructose와 saccharose가 좋았다. 다당류 중에서는 soluble starch와 dextrin이 함유된 배지에서 생육이 좋았고, sugar alcoh이에서는 glycerol 함유배지가 좋았다. 단당류중 galactose, 이당류 중 lactose, 다당류중 raffinose, 당알콜중 Na-carboxy- methylcellulose가 함유된 배지에서 P.
- polymyxa DY1의 OD를 측정하였다. 단당류 중에서는 dextrose를 첨가한 배지에서 가장 생육이 좋았으며, 이당류 중에서는 fructose와 saccharose가 좋았다. 다당류 중에서는 soluble starch와 dextrin이 함유된 배지에서 생육이 좋았고, sugar alcoh이에서는 glycerol 함유배지가 좋았다.
- 다당류 중에서는 soluble starch와 dextrin이 함유된 배지에서 생육이 좋았고, sugar alcoh이에서는 glycerol 함유배지가 좋았다. 단당류중 galactose, 이당류 중 lactose, 다당류중 raffinose, 당알콜중 Na-carboxy- methylcellulose가 함유된 배지에서 P. polymyxa DY1 의 생육이 가장 저조하였다. P.
- 무기염류가 균의 생장에 미치는 영향을 보기 위하여 0.6% dextrose, 1.4% ammonium phosphate dibasic, 0.9% peptone, 2.4% glutamine이 포함된 기초배지에 Table 1의 13종류의 무기염류를 각각 1mM 첨가하여 만든 배지에서 배양한 결과 sodium molibdate에서 생육이 가장 좋았다. Calcium chloride와 magnesium sulfate에서도 유사한 결과를 얻 었다 (data not shown).
- polymyxa DY1 균주는 BHI 배지에서 가장 잘 자랐으며, casamino acid가 첨가된 OSM I, casamino acid가 없는 OSM Ⅱ, NB 배지 순으로 생장하였다(Table 3). 생장억제환의 직경으로 본 P. polymyxa DY1의 항균활성의 생산은 OSMⅠ과 OSM II에서 높았다. BHI 배지에서 균의 생장은 뛰어났으나, 항균물질의 생산은 매우 저조하였다.
- 정치배양과 진탕배양간의 비교에서 P. polymyxa DY1 균은 진탕배양에서 균체의 생장이 더욱 높으며, 항균물질 생성도 빨랐다. 항균활성은 진탕배양에서 접종 후 30 시간에, 그리고 정치배양에서 48시간에 정점을 나타내었다 (Fig.
- 진탕배양에서 접종 후 18시간 후부터 12mm 억제환의 항균활성이 나타났다. 30시간 후에 항균활성이 16 mm 수준으로 올라간 다음 지속되었다.
- 3% peptone 첨가시 항생물질을 다량 생산한다는 보고와 상이하였다(Han and Kim 1999). 최적화된 합성배지인 OSMⅠ과 OSM Ⅱ는 casamino acid의 함유 여부에서만 차이가 나는데 casamino acid를 함유하는 OSM I에서 균체의 생장과 항균물질의 생산이 더 높았다 (Table 3).
- 1% casamino acid7 가 포함된 기초배지에 Table 1의 12가지 아미노산을 각각 1% 첨가하여 배양한 결과 aspartic acid를 첨가한 배지에서 가장 높은 항균활성이 나타났다 (data not shown). 항균 활성 물질 생산에 대한 aspartic acid의 최적농도는 1.9%로 나타났다 (Table 2).
- 항균활성 생산에 대한 영향을 조사하기 위하여 1% dextrose, 1.5% ammonium sulfate, 1.1% casamino acid7 가 포함된 기초배지에 Table 1의 12가지 아미노산을 각각 1% 첨가하여 배양한 결과 aspartic acid를 첨가한 배지에서 가장 높은 항균활성이 나타났다 (data not shown). 항균 활성 물질 생산에 대한 aspartic acid의 최적농도는 1.
- Table 2에 종합하였다. 항균활성의 생산을 위해서는 기초배지에 1% dextrose, 1.5% ammonium sulfate, 1.1% casamino acid, 1.9% aspartic acid, 2 mM ferrous sulfate 를첨가한 배지를 pH8.0으로 조정하고 35, C에서 30~48 시간동안 진탕배양하는 것이 가장 좋았다. 본 연구는 새로운 항균활성물질을 생산하는 것으로 보고된 P.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.